聶相珍，劉榮漢，張素梅，黃 忠，李 杰，譚興勇，黃 震，王敬涵

（桂林旅游學(xué)院酒店管理學(xué)院 廣西 桂林 541006）

黃皮（Clausenalansium（Lour.）Skeels），又叫黃皮子、黃批、黃彈、黃檀子、黃彈子、黃壇子等[1]，為蕓香科黃皮（Clausena） 植物屬植物，原產(chǎn)于我國，是我國熱帶和亞熱帶地區(qū)的一種特種果樹，其栽培歷史較長，到目前已有1 500年之久。目前種植區(qū)域主要分布于我國廣西、廣東、云南、海南、福建、中國臺灣等地，以及越南、印度、斯里蘭卡、泰國、馬來西亞等東南亞國家及美國的部分地區(qū)均有栽種[2]。黃皮的藥用價值較高，其果、葉、根及種子均可入藥，其果實有消食、化痰、行氣的功效，能治療脘腹疼痛、食積脹滿、痰飲、咳喘等病癥[3-4]，其根、葉和種子也具有治療胃痛、腹痛、感冒發(fā)熱等功效[5]。目前，學(xué)者對黃皮的化學(xué)成分較多且主要集中在黃皮的果肉、葉和根莖上，已研究報道的化學(xué)成分主要有生物堿（黃皮酰胺類、肉桂酰胺類、肉桂酰胺類）[5-7]、香豆素[8-12]、揮發(fā)油[13-16]、黃酮類[17]、氨基酸[18]及萜類[19]等。

山黃皮，又稱雞皮果、細葉黃皮（Clausena indica（Datz.）Oliv.），是蕓香科多年生常綠小喬木，主要分布在南亞熱帶地區(qū)，在我國主要產(chǎn)于廣西的龍州和大新縣。

山黃皮和黃皮為不同的水果，但二者所含的總黃酮均是其重要的化學(xué)成分。總黃酮，也是類黃酮類化合物，是一類低分子的植物成分，為植物體多酚類的代謝物，其成分主要有黃酮、二氫黃酮、黃酮醇類、二氫黃酮醇類、黃烷醇類、異黃酮等[20-21]。目前已有學(xué)者對黃皮和山黃皮總黃酮的提取方法及其生物活性進行了研究，從現(xiàn)有的文獻報道來看，其提取方法主要有超聲波提取法、微波提取法、乙醇回流提取法，其生物活性主要體現(xiàn)在黃皮、山黃皮的抗氧化活性、抗過敏和抗菌性研究上。

1 山黃皮和黃皮總黃酮提取方法

1.1 超聲波提取法

超聲波提取植物的總黃酮是一種比較新且提取率較高的方法。目前，使用超聲波提取黃皮總黃酮的研究有一些報道。2009年，張云竹等人[22]通過正交試驗發(fā)現(xiàn)，當(dāng)超聲波提取條件為乙醇體積分數(shù)70%，料液比1∶15，超聲時間70 min，pH值4時，黃皮黃酮的得率最高，為2.76%。2011年，蘇秀芳等人[23]通過試驗對細葉黃皮總黃酮的提取條件進行了研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)乙醇體積分數(shù)60%（V/V），溫度60℃，超聲功率90 W，料液比1∶25，提取時間70 min時，細葉黃皮葉總黃酮提取率達最高，為5.730%。2012年，李昌寶等人[24]采用超聲強化提取法對山黃皮中的總黃酮進行提取。通過正交試驗方法對山黃皮總黃酮的提取工藝進行了優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)當(dāng)乙醇體積分數(shù)60%（V/V），提取溫度70℃，料液比40∶1，提取時間60 min時，山黃皮的總黃酮得率最高，為3.820%±0.020%。2012年，周燕芳[25]通過試驗發(fā)現(xiàn)，當(dāng)乙醇體積分數(shù)80%，超聲處理時間40 min，提取溫度40℃，料液比1∶60時，黃皮葉中的黃酮提取率最高，為3.620%。2015年，蘇志鵬等人[26]采用響應(yīng)面法的超聲波方法對黃皮葉總黃酮進行了提取，發(fā)現(xiàn)當(dāng)乙醇體積分數(shù)為18%，料液比為1∶31，超聲時間為73 min，超聲功率為320 W時，黃皮葉總黃酮的提取率最高，達到1.300%±0.006%。

1.2 微波提取法

除了超聲波提取法外，也可利用微波提取法對黃皮、山黃皮的總黃酮進行提取。2010年，梁云貞等人[27]使用微波輔助提取法對山黃皮葉的黃酮類化合物進行提取，發(fā)現(xiàn)當(dāng)乙醇體積分數(shù)70%，微波處理時間60 s，料液比1∶35，微波功率240 W時，黃酮類化合物提取率最高，為3.900%，而常規(guī)提取法黃酮類化合物含量為3.400%。同年，梁云貞等人[28]還通過單因素試驗和正交試驗對微波輔助提取山黃皮黃酮類化合物的工藝條件進行了研究，發(fā)現(xiàn)當(dāng)乙醇體積分數(shù)60%，微波功率240 W，料液比1∶50，微波處理時間60 s時，山黃皮中黃酮類化合物的提取率最高，為3.621%，比常規(guī)提取法提取率高0.4%（常規(guī)法提取率為3.216%）。2013年，張福平等人[29]通過試驗發(fā)現(xiàn)，當(dāng)乙醇體積分數(shù)75%，浸提溫度55℃，浸提時間1.5 h，料液比1∶20，微波時間40 s，微波功率160 W時，黃皮葉黃酮的提取率最高，在該提取工藝條件下的黃皮葉總黃酮類化合物提取率為3.28%，比常規(guī)方法高0.27%。

1.3 乙醇回流提取

陳家文等人[30]采用乙醇回流提取法提取黃皮黃酮。通過正交試驗確定黃皮黃酮的最佳工藝條件為乙醇體積分數(shù)50%，提取時間2.5 h，料液比1∶30，提取溫度90℃，此時黃皮總黃酮提取率最高，為30.65 mg/g。

2 山黃皮和黃皮總黃酮的功能

2.1 清除自由基、抗氧化活性

經(jīng)報道，黃皮和山黃皮的總黃酮提取液具有清除羥自由基和抗氧化的作用。K NagendraPrasad等人[31]在2009年通過試驗發(fā)現(xiàn)，黃皮總黃酮的提取液具有較強的清除自由基的能力。2011年，蘇秀芳等人[23]利用前面所述的提取條件對細葉黃皮葉總黃酮進行提取后，將細葉黃皮總黃酮提取液質(zhì)量濃度設(shè)置為0.694，0.347，0.174，0.116，0.087 g/L等5個不同的質(zhì)量濃度梯度，并研究其不同質(zhì)量濃度的提取液對清除羥自由基的效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)總黃酮提取液的質(zhì)量濃度為0.694 g/L時，其清除率達49.1%；當(dāng)樣品質(zhì)量濃度為0.694 g/L時，其清除率為49.1%。提取液質(zhì)量濃度和其清除羥自由基的能力呈顯著正相關(guān)。2012年，李昌寶等人[24]利用超聲波法對山黃皮果總黃酮進行提取后，測定其總黃酮的提取液對羥自由基（·OH） 和1，1-二苯基-2-三硝基苯自由基（DPPH·） 的清除效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其提取的山黃皮總黃酮提取液對DPPH·和·OH均有較強的清除能力。2013年，張福平等人[32]采用水楊酸法、鄰苯三酚自氧化法和硫代硫酸鈉滴定法分別對黃皮葉黃酮類化合物清除羥自由基、超氧陰離子自由基的能力進行了研究，發(fā)現(xiàn)黃皮葉黃酮對羥自由基、超氧陰離子自由基具有較強的清除作用，且其質(zhì)量濃度與清除作用均呈正相關(guān)關(guān)系。當(dāng)黃皮葉黃酮的質(zhì)量濃度為0.12 mg/mL時，對羥自由基和超氧陰離子自由基的清除率均超過50.0%。充分說明了其較強的清除自由基的能力。2013年，梁云貞等人[33]以維生素C（VC）為陽性對照品，采用Fenton（鄰二氮菲）法和鄰苯三酚自氧化法（325 nm）評價山黃皮果總黃酮體外清除自由基活性。試驗發(fā)現(xiàn)山黃皮果總黃酮的清除羥自由基和超氧陰離子自由基的EC50分別為58.7，23.5 μg/mL，而VC清除羥自由基和超氧陰離子自由基的EC50分別是128.8，77.6 μg/mL。這表明山黃皮果總黃酮和VC相比，具有更強的清除能力。2015年，蘇志鵬等人[26]使用前文所述的工藝條件提取的黃皮葉總黃酮對體外清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-1-picrylhydrazyl，DPPH） 自由基、羥自由基自由基及抗氧化的能力進行了研究，發(fā)現(xiàn)黃皮葉總黃酮體外清除DPPH·的值為0.282 mg/mL，清除羥自由基的IC50值為1.152 mg/mL，且其清除率隨著總黃酮提取物的質(zhì)量濃度的增加而增大，具有顯著的相關(guān)性。且用三價鐵還原抗氧化能力（Ferricre ducing antioxidant power，F(xiàn)RAP） 法測得1 mg/mL黃酮的FRAP值為533.3 μmol/L，這說明其具有較強的抗氧化能力。2018年，羅海青等人[34]通過試驗，利用FRAP（Ferricion reducing antioxidant power）法對黃皮葉黃酮類成分的抗氧化活性進行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃皮葉總黃酮的抗氧化能力很強，相當(dāng)于 0.1～0.3 mg/mL的VC溶液，還認為黃皮總黃酮具有開發(fā)成新的天然抗氧化劑的廣闊前景。

2.2 抑菌活性和抗過敏性

趙豐麗等人[35]采用紙片擴散法和稀釋法對黃皮葉的不同溶劑提取物進行抑菌試驗后發(fā)現(xiàn)黃皮提取物對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌等具有一定的抑菌作用，其中包括黃酮類物質(zhì)。此外，趙豐麗等人[36]應(yīng)用HPLC法分析了黃皮提取物，并用透明質(zhì)酸酶抑制試驗法對不同溶劑的黃皮提取物抗過敏活性進行了研究。發(fā)現(xiàn)水和乙醇提取物對透明質(zhì)酸酶的抑制率分別為89.3%和75.3%，試驗發(fā)現(xiàn)水提取物中酚類和黃酮類物質(zhì)含量較高，而這2類物質(zhì)是具有抗過敏作用的物質(zhì)，其抑制效果也較好。其葉水提純化物的抗過敏活性隨劑量增加，抗過敏活性顯著提高，其抗過敏活性的主要成分為酚類和黃酮。

3 結(jié)語

目前對于水果總黃酮的提取方法有很多，包括酶法提取法[37]、乙醇浸泡提取法[38]、水酶法[39]、溶劑法[40]，但是實際應(yīng)用到山黃皮、黃皮的總黃酮提取的研究較少。將上述提取方法應(yīng)用到山黃皮、黃皮的總黃酮的提取中是今后研究的方向之一。此外，有研究表明，總黃酮具有抗腫瘤活性[41-45]、抗心血管疾病[46]、免疫調(diào)節(jié)[47-48]、抗輻射[49]、食物保鮮[50]等功能。但是目前學(xué)者對于山黃皮和黃皮總黃酮提取物的生物活性研究主要集中在其清除自由基和抗氧化活性上，其他的活性研究目前較少，但是植物總黃酮的生物活性共性使得黃皮和山黃皮也可能具備抗腫瘤活性、抗心血管疾病、免疫調(diào)節(jié)、抗輻射等功效，因此，對黃皮和山黃皮生物活性的研究具有重要的意義。