■張 娟 孫國(guó)平 韓 帥 閆素梅

（內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010018）

阿爾巴斯白絨山羊是世界著名的絨肉兼用型品種，所產(chǎn)羊絨以細(xì)、長(zhǎng)、柔軟著稱，素有“纖維寶石”之美譽(yù)，一直以來是飼養(yǎng)絨山羊主要的經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)點(diǎn)[1]，然而，近幾年羊絨價(jià)格的下跌導(dǎo)致了山羊育肥成為了新的經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)點(diǎn)。在絨山羊的飼養(yǎng)過程中，大量被淘汰的母羊和羔羊被用來育肥做肉用。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道每年留作種用的羔羊僅30%，且每年淘汰30%左右成年羊作育肥用，成為羊肉的主要來源[2-3]。現(xiàn)如今，生態(tài)環(huán)境極具脆弱與敏感，加上人為干擾，使生態(tài)環(huán)境問題越來越嚴(yán)峻，限制了放牧養(yǎng)殖，這就使得短期舍飼育肥成為了絨山羊育肥方式的新的關(guān)注點(diǎn)[4]。瘤胃發(fā)酵功能直接影響反芻動(dòng)物的生產(chǎn)效率與產(chǎn)品品質(zhì)，育肥方式的改變會(huì)對(duì)日糧精粗比產(chǎn)生影響，且通過瘤胃微生物的變化對(duì)瘤胃發(fā)酵功能的影響較大，從而對(duì)育肥效果及肉品品質(zhì)等產(chǎn)生影響，但究竟如何影響尚不清楚。瘤胃是反芻動(dòng)物特有的消化器官，反芻動(dòng)物可通過瘤胃中細(xì)菌、原蟲和真菌發(fā)酵分解飼料進(jìn)而獲得營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)[5]。楊蕾等[6]指出瘤胃中微生物與宿主之間存在互惠共生的關(guān)系，瘤胃中所含的26類、7 000多種菌之間的相互作用，影響蛋白質(zhì)、脂肪等沉積速率以及纖維素的降解速率，從而改善反芻動(dòng)物消化功能，影響其肉品品質(zhì)。郭秀蘭[7]發(fā)現(xiàn)脂肪沉積與硬壁菌門呈正線性關(guān)系，與擬桿菌門呈負(fù)線性關(guān)系，這說明瘤胃內(nèi)菌群的變化會(huì)影響脂肪沉積，進(jìn)而影響肉品質(zhì)及其風(fēng)味。課題組前期就自然放牧與舍飼對(duì)絨山羊生產(chǎn)性能及肉品品質(zhì)的影響做了大量研究，結(jié)果表明舍飼可提高絨山羊飼料轉(zhuǎn)化效率、生產(chǎn)性能和屠宰性能，對(duì)理化特性并未產(chǎn)生不利影響，但影響羊肉的氨基酸與脂肪酸組成[1，3，8-9]，其機(jī)理尚不清楚。尹永志等[10]也提出羔羊瘤胃發(fā)育并不完善，而瘤胃微生物數(shù)量和結(jié)構(gòu)的變化影響機(jī)體生理平衡，所以研究羔羊瘤胃內(nèi)菌群變化對(duì)預(yù)測(cè)其健康成長(zhǎng)具有重要意義。本試驗(yàn)旨在探究不同飼養(yǎng)方式對(duì)阿爾巴斯白絨山羊成年羊與羔羊瘤胃菌群的影響，為科學(xué)的制定阿爾巴斯白絨山羊成年羊與羔羊育肥方案，深入探討飼養(yǎng)方式對(duì)肉品品質(zhì)的影響機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)在內(nèi)蒙古阿爾巴斯白絨山羊種羊場(chǎng)進(jìn)行。試驗(yàn)分2部分，均采用單因子完全試驗(yàn)設(shè)計(jì)。試驗(yàn)1將60只年齡、體重相近的淘汰成年母羊隨機(jī)分為2組，每組30只。一組為對(duì)照組，在天然草場(chǎng)進(jìn)行自然放牧育肥；一組為試驗(yàn)組，完全舍飼育肥，日糧采用全混合飼喂，自由采食，育肥期60 d，1～30 d為育肥前期，31～60 d為育肥后期。試驗(yàn)2從內(nèi)蒙古白絨山羊種羊場(chǎng)的4月齡斷奶羔羊群中選擇日齡相近[（130±10）d]的去勢(shì)公羔60只分為2組，每組30只。一組為對(duì)照組，進(jìn)行放牧補(bǔ)飼育肥，一組為試驗(yàn)組，進(jìn)行舍飼育肥。放牧補(bǔ)飼育肥的羔羊按照原廠方式，每天在天然草場(chǎng)上放牧并每只補(bǔ)飼玉米（風(fēng)干基礎(chǔ)）300 g，舍飼育肥羔羊按照試驗(yàn)設(shè)計(jì)的全混合日糧飼喂，各組羔羊均自由飲水。育肥時(shí)間為3個(gè)月，分育肥前期（1～30 d）、中期（31～60 d）和后期（61～90 d）三期。

1.2 日糧組成

對(duì)照組成年羊在天然草場(chǎng)進(jìn)行自然育肥，采食牧草的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量見表1；試驗(yàn)組的日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表2，日糧干物質(zhì)基礎(chǔ)的精粗比例在育肥前期為40∶60，育肥后期為45∶55。

表1 自然放牧成年母羊采食牧草營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

表2 舍飼育肥母羊日糧組成和營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

對(duì)照組羔羊在天然草場(chǎng)進(jìn)行自然放牧補(bǔ)飼所采食牧草的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量見表3；試驗(yàn)組的日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表4，日糧干物質(zhì)基礎(chǔ)的精粗比例育肥前期為40∶60，育肥中期和育肥后期為50∶50。

表3 放牧補(bǔ)飼育肥羔羊采食牧草營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 測(cè)試指標(biāo)與方法

在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，分別從對(duì)照組和試驗(yàn)組中選擇6只羊、在禁食24 h、禁水2 h后屠宰，采集瘤胃液后立即混勻，將采集的瘤胃液裝入到凍存管內(nèi)，-80℃保存。

1.3.1 瘤胃中總DNA的提取

采用珠磨硯法從處理好的瘤胃液中提取瘤胃液微生物總DNA。DNA的純度、濃度與玻璃珠的用量和振蕩破碎細(xì)胞及蛋白質(zhì)的去除過程密切相關(guān)。加入酚∶氯仿∶異戊醇（25∶24∶1）處理5 min，使蛋白質(zhì)徹底變性并將其完全去除，從而提高DNA產(chǎn)物的純度。加入氯仿∶異戊醇（24∶1）抽提時(shí)，靜置后離心是使液面更加清晰，更好的吸取上清，以免蛋白污染。

1.3.2 引物設(shè)計(jì)、PCR反應(yīng)體系及反應(yīng)參數(shù)

引物設(shè)計(jì)及退火溫度詳見表5。

PCR反應(yīng)體系為25 μl：模板（瘤胃液DNA）1 μl，目標(biāo)基因上游、下游引物各1 μl,目標(biāo)基因下游引物1 μl，DNA連接酶Mix 12.5 μl，ddH2O（無酶水）9.5 μl。PCR反應(yīng)參數(shù)：94℃預(yù)變性5 min，95℃變性30 s，退火40 s，72 ℃延伸1 min，40個(gè)循環(huán)，72 ℃延伸8 min。目標(biāo)菌株P(guān)CR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖電泳檢測(cè)后，均與預(yù)期擴(kuò)增長(zhǎng)度一致，可用于膠回收?；厥辗椒▍⒄湛禐槟z回收試劑盒（Gel Extraction Kit，康為世紀(jì)生物科技有限公司）的方法進(jìn)行，產(chǎn)品號(hào)為Cat.No.CW0525。

表4 舍飼育肥羔羊日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

表5 PCR擴(kuò)增引物

1.3.3 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的克隆

按DNA Ligatiog Kit試劑盒說明，將PCR產(chǎn)物與pGM-T載體連接。連接體系為目的PCR片段7 μl、pGM-T 載體 1 μl、0×T4DNA Ligation Buffer 1 μl、T4DNA Ligase 1 μl，共 10 μl?？寺『笮枰c載體進(jìn)行連接，為保證連接質(zhì)量，選擇輕彈混勻后16℃過夜。將10 μl連接產(chǎn)物加入到冰浴5 min融化好的100 μl TOP 10感受態(tài)細(xì)胞中，輕彈混勻后冰浴30 min，42℃水浴90 s后立即冰浴2～3 min，其間不要搖動(dòng)離心管。向離心管中加入250～500 μl預(yù)熱的37℃的液體LB培養(yǎng)基（不含抗生素），150 r/min、37℃振蕩培養(yǎng)45 min。將離心管中的菌液混勻，6 000 r/min離心5 min。棄去400 μl上清液，抽打混勻剩余菌液取100 μl涂布到含有IPTG、X-gal和含有相應(yīng)抗生素的LB固體培養(yǎng)基上，無菌玻璃棒均勻的涂開后待平板表面干燥將平板倒置，37℃培養(yǎng)12～16 h。

1.3.4 陽(yáng)性克隆菌藍(lán)白斑篩選及PCR鑒定

運(yùn)用藍(lán)白斑篩選法篩選出陽(yáng)性克隆菌，在LB固體培養(yǎng)基上隨機(jī)挑選白色菌落，將得到的白色菌落接種于1～5 ml LB培養(yǎng)基（含終濃度為50～100 μg/ml的氨芐青霉素）中，37℃搖床培養(yǎng)過夜。將過夜培養(yǎng)的菌液做普通PCR鑒定，體系及模板量同上。選取經(jīng)PCR鑒定后的陽(yáng)性克隆菌液，由中美泰和公司進(jìn)行測(cè)序。測(cè)序結(jié)果在NCBI的Blast進(jìn)行比對(duì)。

1.3.5 陽(yáng)性克隆質(zhì)粒的小量提取及標(biāo)線制備

對(duì)比對(duì)成功的陽(yáng)性克隆菌進(jìn)行質(zhì)粒的小量提取，按照質(zhì)粒小提試劑盒[TIANprep Mini Plasmid Kit，天根生化科技（北京）有限公司]說明步驟進(jìn)行操作。用酶標(biāo)儀測(cè)定質(zhì)粒的濃度，再根據(jù)公式計(jì)算陽(yáng)性克隆質(zhì)粒的拷貝數(shù)：DNA（拷貝數(shù)）=DNA濃度（ng/μl）×6.02×1 023（拷貝/mol）/DNA長(zhǎng)度（dp）×660 （g/mol.dp）。然后對(duì)已知拷貝數(shù)的質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品做至少5個(gè)10倍梯度稀釋，每個(gè)濃度做三個(gè)重復(fù)，同時(shí)用無酶水做對(duì)照，用熒光定量PCR儀（BIO-RAD-IQ5TM）按如下體系操作：模板（待測(cè)樣DNA）1 μl，熒光定量用SYBR Green Ⅱ Mix 12.5 μl、目標(biāo)基因上游引物、下游引物（10 μmol/l）各1 μl，ddH2O為9.5 μl制備標(biāo)線。

1.3.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析

所測(cè)樣本用與上述相同體系及方法進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.7 瘤胃液的原蟲數(shù)量

采集的瘤胃液立即用兩層紗布過濾，取1 ml該濾液用4 ml MFS染液將原蟲固定，靜置30 min，常溫放置以備用。顯微鏡計(jì)數(shù)。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

試驗(yàn)數(shù)據(jù)運(yùn)用SAS 9.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)，當(dāng)P≤0.05時(shí)，表示組間差異顯著，當(dāng)0.05＜P≤0.10時(shí)，表示組間差異趨于顯著，而P＞0.10表明組間差異不顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 成年羊瘤胃液中的幾種微生物數(shù)量

表6 不同飼養(yǎng)方式對(duì)成年羊瘤胃液中總細(xì)菌、總產(chǎn)甲烷菌及三種纖維降解菌數(shù)量的影響（copy/ml）

表7 飼養(yǎng)方式對(duì)成年羊瘤胃液中反芻月型單胞菌、牛鏈球菌、嗜淀粉瘤胃桿菌和脂解厭氧弧桿菌數(shù)量的影響（copy/ml）

如表6與表7所示，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組成年羊瘤胃液中的總產(chǎn)甲烷菌與反芻月型單胞菌趨于顯著增加，（P=0.06，P=0.09），牛鏈球菌趨于顯著降低（P=0.07），原蟲、產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌與脂解厭氧弧桿菌數(shù)量顯著增加（P=0.01，P=0.05，P=0.05）。成年羊試驗(yàn)組和對(duì)照組的瘤胃液總細(xì)菌、白色瘤胃球菌、黃色瘤胃球菌及嗜淀粉瘤胃桿菌間差異均不顯著（P＞0.10），但在數(shù)值上試驗(yàn)組高于對(duì)照組。

表8 成年羊瘤胃液中的7種菌占總菌的百分比（%）

由表8列出了瘤胃液中的7種菌占總菌的比例。結(jié)果得出，試驗(yàn)組的反芻月型單胞菌比例最高，顯著地高于對(duì)照組（P=0.03），纖維類降解菌中的產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌比例次之，顯著高于對(duì)照組（P=0.03），脂解厭氧弧桿菌占比最低，但顯著高于對(duì)照組。對(duì)照組以嗜淀粉瘤胃桿菌比例最高，反芻月型單胞菌比例次之，脂解厭氧弧桿菌最低。

2.2 羔羊瘤胃液中的幾種微生物數(shù)量

表9 不同飼養(yǎng)方式對(duì)羔羊瘤胃液中總細(xì)菌、總產(chǎn)甲烷菌及三種纖維降解菌數(shù)量的影響（copy/ml）

表10 飼養(yǎng)方式對(duì)羔羊瘤胃液中反芻月型單胞菌、牛鏈球菌、嗜淀粉瘤胃桿菌和脂解厭氧弧桿菌數(shù)量的影響（copy/ml）

如表9、表10所示，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組的羔羊瘤胃液總細(xì)菌數(shù)量顯著增加（P=0.003），總產(chǎn)甲烷菌及原蟲數(shù)量差異趨于顯著增加（P=0.08，P=0.09）；反芻月型單胞菌、白色瘤胃球菌與黃色瘤胃球菌數(shù)量呈上升趨勢(shì)，其他各菌雖然數(shù)值上略有降低，但均無顯著差異（P＞0.10）。

表11 羔羊瘤胃中7種菌占總菌的百分比（%）

如表11所示，羔羊瘤胃液中7種菌占總菌的比例在兩組間均無顯著差異（P＞0.05）,但對(duì)照組均略高于試驗(yàn)組。對(duì)照組與試驗(yàn)組瘤胃液細(xì)菌均以嗜淀粉瘤胃桿菌占比最高，產(chǎn)琥珀絲狀桿菌、白色瘤胃球菌次之，脂解厭氧弧桿菌最低。

3 討論

反芻動(dòng)物與瘤胃微生物之間建立共生關(guān)系，動(dòng)物通過這些微生物為飼料發(fā)酵提供營(yíng)養(yǎng)和最佳環(huán)境條件，進(jìn)而為宿主動(dòng)物提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。如產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌是嚴(yán)格厭氧型革蘭氏陰性菌，具有較強(qiáng)的纖維素降解能力?？蓪暳现欣w維物質(zhì)發(fā)酵產(chǎn)生乙酸和琥珀酸。原蟲能夠?qū)㈩w粒性淀粉和葡萄糖等可溶性糖等碳水化合物轉(zhuǎn)變成支鏈淀粉并貯藏于其體內(nèi)，避免了其他細(xì)菌對(duì)淀粉和可溶性糖類的快速發(fā)酵，以保持瘤胃內(nèi)pH值的穩(wěn)定[16]。脂解厭氧弧桿菌可能是目前唯一的脂肪降解菌[17]。是以脂解厭氧弧菌受日糧結(jié)構(gòu)影響較為明顯。周航[18]對(duì)延邊黃牛的研究中發(fā)現(xiàn)日糧精粗比對(duì)瘤胃微生物群落結(jié)構(gòu)有很大影響。有相關(guān)研究表明，羔羊出生后2～4 d可在瘤胃中發(fā)現(xiàn)纖維分解菌，說明羔羊在采食固體飼料之前瘤胃中就已經(jīng)建立了纖維降解菌區(qū)系[19]。但建立后的細(xì)菌種群或整個(gè)微生物區(qū)系受日糧影響顯著，而Yá?ezrui等[20]也通過比較飼喂精料加粗料與僅飼喂粗料對(duì)斷奶前羔羊瘤胃細(xì)菌總數(shù)、產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌和產(chǎn)甲烷菌數(shù)量的影響，說明了幼畜瘤胃微生物區(qū)系結(jié)構(gòu)和菌群組成與飼糧類型相關(guān)。張海波等[21]及Zhang等[22]均表示隨著精補(bǔ)料能量增加，瘤胃原蟲數(shù)量增多，并提出精補(bǔ)料能量增加可能為原蟲的繁殖提供了充足的能量，有利于原蟲的繁殖。王夢(mèng)芝等[23]也表示日糧結(jié)構(gòu)（精粗比）影響瘤胃細(xì)菌和原蟲數(shù)量，本試驗(yàn)中無論成年羊與羔羊，試驗(yàn)組原蟲數(shù)量均顯著或趨于顯著的高于對(duì)照組，證明飼喂精料后，對(duì)原蟲數(shù)量有影響且有促進(jìn)作用。課題組前期試驗(yàn)表明完全舍飼顯著提高了成年羊瘤胃內(nèi)乙酸、丙酸水平[24]，本試驗(yàn)中成年羊舍飼組產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌數(shù)量相比放牧組也顯著增加，說明舍飼提高了瘤胃內(nèi)該菌的數(shù)量，進(jìn)而使更多的纖維物質(zhì)被降解生成乙酸。有研究報(bào)道，飼喂高精料日糧可顯著增加反芻月型單胞菌的數(shù)量，進(jìn)而提高了丙酸含量，這說明丙酸水平的變化可能與反芻月型單胞菌的數(shù)量有關(guān)[25-26]。本試驗(yàn)研究結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，舍飼組成年羊瘤胃內(nèi)反芻月型單胞菌顯著增加，這與上述報(bào)道一致。這可能是由于舍飼組的日糧營(yíng)養(yǎng)水平高于對(duì)照組，進(jìn)而增加了成年羊反芻月型單胞菌的數(shù)量。而對(duì)于羔羊來說，其瘤胃內(nèi)反芻月型單胞菌變化并不顯著，這可能是羔羊瘤胃微生物區(qū)系尚不完善的原因。反芻月型單胞菌既是乳酸利用菌[15]，也是丙酸生成菌[27]，據(jù)此可推斷該菌可能利用乳酸轉(zhuǎn)化為丙酸，提高瘤胃內(nèi)VFA的含量，這與本試驗(yàn)結(jié)果也相吻合，VFA濃度過高，會(huì)導(dǎo)致pH降低，影響瘤胃發(fā)酵情況，但本試驗(yàn)同期結(jié)果表明pH值在適宜范圍內(nèi)，說明VFA濃度雖然升高了，但并未對(duì)瘤胃發(fā)酵功能產(chǎn)生影響。

牛鏈球菌在牛瘤胃中存在廣泛，是瘤胃中主要的產(chǎn)乳酸菌和淀粉降解菌[28]，該菌可以產(chǎn)生活性較高的脲酶，在瘤胃非蛋白氮的分解中起重要作用。在趙培廳等采用逐漸提高飼糧精料比例的方式誘導(dǎo)奶山羊發(fā)生SARA過程中，發(fā)現(xiàn)牛鏈球菌的數(shù)量并未隨精料比例的改變出現(xiàn)較大變化，且占總菌比例較小[29]，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。

產(chǎn)甲烷菌利用真菌、原蟲發(fā)酵過程中產(chǎn)出的H2將CO2還原成CH4，釋放到空氣中[20]；因此，產(chǎn)甲烷菌主要是在瘤胃中起到代謝H2的作用。羔羊在傳統(tǒng)模式飼養(yǎng)過程中其瘤胃中產(chǎn)甲烷菌和纖維降解菌很早就被建立起來[19]，且有研究也證明產(chǎn)甲烷菌可以影響產(chǎn)氫細(xì)菌和原蟲群落的數(shù)量[30]，而產(chǎn)甲烷菌的數(shù)量會(huì)受日糧碳水化合物的影響。這一點(diǎn)在Johnson等[31]的研究中得到證實(shí)，研究指出，給動(dòng)物飼喂可溶性糖比飼喂淀粉時(shí)瘤胃產(chǎn)甲烷菌數(shù)量高。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，成年羊和羔羊舍飼育肥條件下相較于放牧或放牧補(bǔ)飼條件下產(chǎn)甲烷菌數(shù)量均增加，且差異趨于顯著，這是由于試驗(yàn)期在秋季，對(duì)照組進(jìn)行放牧育肥時(shí)飼草中粗纖維含量較高，且木質(zhì)化程度也偏高，牧草適口性差，導(dǎo)致動(dòng)物采食量下降，瘤胃中不利于產(chǎn)甲烷菌的生長(zhǎng)。而完全舍飼組的精料比例較高，可溶性碳水化合物含量高，營(yíng)養(yǎng)均衡，利于產(chǎn)甲烷菌的生長(zhǎng)繁殖，故舍飼組母羊與羔羊瘤胃內(nèi)產(chǎn)甲烷菌數(shù)比對(duì)照組多。且羔羊產(chǎn)甲烷菌和纖維降解菌在10日齡即可達(dá)到與成年羊類似的水平[20]，這也可以解釋其菌群變化規(guī)律與成年羊相似這一現(xiàn)象。趙玉華[32]提出通過減少原蟲數(shù)量以減少產(chǎn)甲烷菌附著的載體，可有效減少產(chǎn)甲烷菌，所以原蟲數(shù)量與產(chǎn)甲烷菌數(shù)量變化趨勢(shì)相一致。原蟲數(shù)量的增加可能也是導(dǎo)致產(chǎn)甲烷菌數(shù)量上升的原因之一。

除產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌外，黃色瘤胃球菌和白色瘤胃球菌能將纖維降解后產(chǎn)生大量的纖維素酶和半纖維素酶，其中主要為木聚糖酶。楊宏波等[33]提出黃色瘤胃球菌與白色瘤胃球菌之間有相互抑制作用，可能是白色瘤胃球菌產(chǎn)生的細(xì)菌素抑制了黃色瘤胃球菌的生長(zhǎng)，且證明這兩種菌的變化與日糧結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。本試驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)白色瘤胃球菌數(shù)量始終高于黃色瘤胃球菌，這與馮仰廉試驗(yàn)結(jié)果也相一致[17]。但本試驗(yàn)中，不同的飼養(yǎng)方式對(duì)羔羊與母羊瘤胃中白色瘤胃球菌與黃色瘤胃球菌并無顯著影響。馬慧忠[34]在對(duì)絨山羊進(jìn)行不同精粗比日糧對(duì)其瘤胃發(fā)酵影響的研究中也發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)球菌的拷貝數(shù)發(fā)生變化，但組間差異并不顯著。日糧精粗比的改變對(duì)白色瘤胃球菌和黃色瘤胃球菌的相對(duì)表達(dá)量也沒有影響，這與本試驗(yàn)結(jié)果也相類似。瘤胃主要纖維分解菌產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌、黃色瘤胃球菌和白色瘤胃球菌只占總瘤胃細(xì)菌群落的10%以下，這與本試驗(yàn)結(jié)果基本一致[35]。成年羊嗜淀粉瘤胃桿菌變化差異雖不顯著，但是舍飼組在數(shù)值上高于自然放牧組。這可能是由于嗜淀粉瘤胃桿菌具有降解淀粉的功能，所以有增加的趨勢(shì)。但精料水平并不足以引起牛鏈球菌和嗜淀粉瘤胃桿菌的劇烈變化。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，舍飼條件與放牧條件下羔羊瘤胃中總菌數(shù)量差異顯著，而成年羊則無顯著差異，說明年齡對(duì)總菌數(shù)有影響，羔羊發(fā)育過程中瘤胃菌群可能還不完善，瘤胃內(nèi)環(huán)境還不太穩(wěn)定。成年羊試驗(yàn)中，除原蟲數(shù)量、產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌數(shù)量和產(chǎn)甲烷菌數(shù)量在兩種飼喂條件下數(shù)量差異顯著或趨于顯著，其他各菌差異均不顯著，這說明舍飼在成年羊上效果更為顯著。綜上所述，結(jié)合本試驗(yàn)研究結(jié)果表明不同育肥方式下，日糧組成不同會(huì)對(duì)成年羊及羔羊瘤胃細(xì)菌數(shù)量及菌群變化產(chǎn)生不同程度影響，且從總體來看，放牧補(bǔ)飼增加了精料的飼喂但結(jié)合課題組同期其他方面研究，舍飼育肥較放牧促進(jìn)了瘤胃微生物的生長(zhǎng)，說明舍飼育肥方式可促進(jìn)絨山羊育肥效果。這可能是舍飼育肥或補(bǔ)飼精料使絨山羊營(yíng)養(yǎng)攝入更加平衡，且為菌群生長(zhǎng)提供了必須能源，利于微生物的生長(zhǎng)，從而更好的利用日糧中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)育肥效果。

4 小結(jié)

（1）舍飼育肥方式相較于放牧育肥會(huì)引起成年羊瘤胃中原蟲、產(chǎn)甲烷菌、反芻月型單胞菌、脂解厭氧弧桿菌數(shù)量顯著或趨于顯著升高，三種主要纖維降解菌中產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌數(shù)量顯著升高，而白色瘤胃球菌與黃色瘤胃球菌數(shù)量差異不顯著。

（2）相較于放牧補(bǔ)飼育肥組，羔羊在舍飼育肥組中總細(xì)菌量、原蟲數(shù)量與產(chǎn)甲烷菌數(shù)量顯著或趨于顯著增加，而其他菌兩組間差異并不顯著。