林福忠 林秋娟 蔡鶴鳴

（福建省福州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所 350018）

雞新城疫是由新城疫病毒引起的急性、高度接觸性傳染病，禽流感是由A型流感病毒的禽類傳染病。兩者均能引起禽類呼吸道和消化道疾病，造成禽類生產(chǎn)重大損失。目前，針對雞新城疫和禽流感主要采取接種疫苗的方法進(jìn)行防控，而疫苗免疫效果影響因素很多，免疫程序就是其中之一。因此，通過生產(chǎn)實(shí)踐制定一個(gè)在臨床上有效的雞新城疫和禽流感免疫程序。為了客觀評判其免疫效果，采用血凝抑制試驗(yàn)來監(jiān)測其免疫抗體水平，為各養(yǎng)殖場做好雞新城疫和禽流感的預(yù)防工作提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)6批次桂鳳雞均來自福州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所畜禽養(yǎng)殖場。雞新城疫與禽流感免疫程序?yàn)椋?日齡，新城疫--禽流感（H9N2）二聯(lián)滅活苗，肌注，1頭份/只；15日齡，禽流感（H5N1）滅活苗，肌注，1頭份/只；20日齡，新城疫Ⅳ系，滴鼻，2頭份/只；33日齡，新城疫--禽流感 （H9N2）二聯(lián)滅活苗，肌注，1頭份/只；60日齡，新城疫Ⅰ系，肌注，1頭份/只；新城疫--禽流感 （H9N2）二聯(lián)滅活苗，肌注，1頭份/只。

1.2 血清樣本采集

1.2.1 采集時(shí)間與數(shù)量

雞采血時(shí)間為40日齡與81日齡。樣本采集數(shù)為每批次60只，共計(jì)720份。

1.2.2 血樣采集與處理

翅下靜脈采血，每只雞采血2ml，分別標(biāo)記密封，靜置30min，待血清析出后，用低溫離心機(jī)4000轉(zhuǎn)進(jìn)行血清分離，-18℃冰箱貯藏。

1.3 檢測方法

新城疫和禽流感的免疫抗體檢測方法均采用血凝抑制試驗(yàn)（HI）方法。新城疫采用GB/T16550-2008《新城疫診斷技術(shù)》進(jìn)行操作，禽流感采用GB/T18936-2003《高致病性禽流感診斷技術(shù)》進(jìn)行操作。

1.4 實(shí)驗(yàn)試劑

新城疫、禽流感抗原和標(biāo)準(zhǔn)血清來自哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司，檸檬酸鈉抗凝劑和1%紅細(xì)胞液自制。

1.5 結(jié)果判定

以100%抑制凝集的血清最大稀釋度為該血清的抗體滴度。新城疫抗體滴度≧5㏒2判定為合格，禽流感抗體滴度≧5㏒2判定為合格。

2 結(jié)果與分析

2.1 新城疫抗體檢測

新城疫抗體檢測結(jié)果見表1。由表1可知，6批次雞群40日齡平均免疫合格率為93.6%、平均抗體滴度為8.5；81日齡平均免疫合格率為94.2%、平均抗體滴度為8.6。40日齡和81日齡HI抗體效價(jià)均大于70%，平均抗體滴度均大于8.0；40日齡和81日齡的95%滴度7.9～9.1。說明該新城疫免疫程序合理，抗體效價(jià)和平均抗體滴度較高，能夠形成有效保護(hù)力。

2.2 H5N1/Re-5禽流感抗體檢測

H5N1/Re-5禽流感抗體檢測結(jié)果見表2。由表2可知，6批次雞群40日齡平均免疫合格率為89.2%、平均抗體滴度為7.4；81日齡平均免疫合格率為86.7%、平均抗體滴度為7.1。40日齡和81日齡HI抗體效價(jià)均大于70%，平均抗體滴度均大于7.0，95%滴度范圍6.6～8.0。說明該H5N1禽流感免疫抗體有保護(hù)力，但保護(hù)力較弱。

2.3 H9N2禽流感抗體檢測

H9N2禽流感抗體檢測結(jié)果見表3。由表3可知：6批次雞群40日齡平均免疫合格率為91.4%、平均抗體滴度為8.3；81日齡平均免疫合格率為89.7%、平均抗體滴度為8.0；40日齡和81日齡HI抗體效價(jià)均大于70%；除了3、4批次81日齡的平均抗體滴度為7.8和7.9，其他40日齡和81日齡的抗體平均滴度均大于8.0；95%滴度為7.4～8.8。說明該H9N2禽流感免疫程序合理，抗體效價(jià)和平均抗體滴度較高，能夠形成較強(qiáng)保護(hù)力。

3 討論

（1）本免疫程序生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)用于禽類養(yǎng)殖場比較密集、新城疫疫情較重的區(qū)域，雞新城疫、禽流感免疫合格率均大于70%，可形成有效的免疫保護(hù)力，說明免疫程序合理。但免疫效果具有動態(tài)性，容易受到雞群免疫應(yīng)答能力、疫苗種類、地域、疾病流行狀況、雞舍環(huán)境衛(wèi)生、應(yīng)激等因素影響[1]。為了雞群的生物安全，有條件的養(yǎng)殖場要制定定期的常規(guī)檢測和不定期的抽檢監(jiān)測制度，可有效判定抗體效力，控制和減少疫病發(fā)生。

表1 40日齡和81日齡各批次新城疫抗體檢測結(jié)果 （S±X）

表2 40日齡和81日齡各批次H5N1/Re-5禽流感抗體檢測結(jié)果 （S±X）

表3 40日齡和81日齡各批次H9N2禽流感抗體檢測結(jié)果 （S±X）

（2）本試驗(yàn)新城疫免疫程序密度較大，活苗和滅活苗同時(shí)配合使用，全程活苗免疫3次、滅活苗免疫2次，這樣既可快速建立局部免疫屏障，又能使機(jī)體產(chǎn)生高滴度的免疫抗體。另外，不同時(shí)間段采用滴鼻、肌注等不同免疫方法可形成全方位有效的保護(hù)力。因此，在禽類養(yǎng)殖場比較密集、新城疫疫情較重的區(qū)域可參考使用本免疫程序。

（3）本試驗(yàn)H5N1禽流感疫苗免疫1次，H9N2禽流感疫苗免疫3次。從抗體監(jiān)測分析H5N1抗體保護(hù)效力不如H9N2，H9N2抗體效價(jià)和平均抗體滴度較高能夠形成較強(qiáng)保護(hù)力，而H5N1保護(hù)力較弱。對禽流感免疫程序如此設(shè)計(jì)是因?yàn)樵谖覈鳫9N2亞型禽流感是當(dāng)前禽流感流行的主型，持續(xù)變異，可協(xié)同致病，還可以為H7N9提供重配的基因庫，造成豐富的新型基因型，因此，控制H9病毒污染勢在必行[2]；高致性H5N1亞型禽流感人畜共患。雖然全球關(guān)于H5N1亞型疫情報(bào)道逐年遞減，但疫情逐漸呈現(xiàn)地方流行態(tài)勢，每年均有發(fā)生[3]。因此，不能忽視，當(dāng)國家H5N1禽流感疫情監(jiān)測有暴發(fā)時(shí)應(yīng)加強(qiáng)免疫。