韓姝伊 ，魏凱 ，陳春山 ，何亞鵬 ，趙寶華 ，何宏軒

（1.河北師范大學(xué)，河北 石家莊 050024； 2.北京市水生野生動植物救護(hù)中心，北京 102110；3.中國科學(xué)院動物研究所，北京 100101）

細(xì)鱗鮭Brachymystax lenok屬于鮭形目Salmoniformes鮭科Salmonidae細(xì)鱗魚屬Branchymystax，主要分布在我國東北、華北及西北等地，具有重要的科研、生態(tài)及經(jīng)濟(jì)價值，被列為我國Ⅱ級保護(hù)動物[1]。在保護(hù)和合理開發(fā)資源的基礎(chǔ)上，我國已經(jīng)開展了細(xì)鱗鮭的人工繁育和養(yǎng)殖[2,3]。

隨著我國鮭鱒養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，細(xì)鱗鮭的養(yǎng)殖也初具規(guī)模，但虹鱒Oncorhynchus mykiss、大西洋鮭Salmo salar等傳統(tǒng)養(yǎng)殖種類或品種的疫病極易威脅細(xì)鱗鮭的繁育、養(yǎng)殖及保護(hù)[4]，需要采取有效措施防控這些疫病，保護(hù)和合理開發(fā)利用細(xì)鱗鮭。不同魚類對各種藥物的敏感性不同，在病害防治中如用藥不當(dāng)會造成魚類大規(guī)模死亡。本文通過研究高錳酸鉀、聚維酮碘、食鹽、甲醛4種常用水產(chǎn)消毒劑對細(xì)鱗鮭幼魚急性毒性試驗(yàn)，以期為細(xì)鱗鮭的病害防治及健康養(yǎng)殖提供參考。

表1 各種試驗(yàn)藥物規(guī)格及試驗(yàn)質(zhì)量濃度梯度Tab.1 Specification and concentrations of the test chemicals

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)魚為北京市水生野生動植物救護(hù)中心人工繁育的1齡細(xì)鱗鮭，平均體長（11±0.5）cm，平均體質(zhì)量（10.0±0.2）g，體質(zhì)健康，規(guī)格整齊。試驗(yàn)前，將魚在玻璃缸中暫養(yǎng)一周，試驗(yàn)前1d停止投喂。

試驗(yàn)選用高錳酸鉀、聚維酮碘、食鹽和甲醛4種消毒劑，藥物規(guī)格見表1。試驗(yàn)前，配制試驗(yàn)藥物母液，再按比例稀釋成所需濃度，藥液現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2 方法

試驗(yàn)容器為50cm×30cm×30cm的玻璃缸，試驗(yàn)用水為經(jīng)過充分曝氣的地下水，水溫（12±1）℃，pH6.8～7.4，溶解氧（8±0.5）mg·L-1。試驗(yàn)期間不投餌，不充氣。

正式試驗(yàn)前進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，確定對細(xì)鱗鮭幼魚24h致死的濃度下限值及96h無死亡的濃度上限值，然后在此濃度范圍內(nèi)按等對數(shù)間距設(shè)置5個濃度組和一個空白對照，每個試驗(yàn)濃度組設(shè)2個平行，數(shù)據(jù)取平均值。

參照盧玲[5]等的方法進(jìn)行室內(nèi)試驗(yàn)。甲醛具有揮發(fā)性，為保證試驗(yàn)藥液的質(zhì)量濃度，每隔24 h更換一次藥液。各試驗(yàn)藥物的質(zhì)量濃度梯度如表1所示。每個試驗(yàn)玻璃缸加入已配好的藥液，每組隨機(jī)放入10尾魚。試驗(yàn)開始后連續(xù)觀察并記錄試驗(yàn)魚的中毒癥狀、死亡情況，及時撈出死魚。試驗(yàn)魚的死亡標(biāo)準(zhǔn)為：喪失游動能力，靜臥水底，對外界刺激無反應(yīng)。試驗(yàn)結(jié)束時，計算四種消毒劑對細(xì)鱗鮭的24h、48h、72h和 96h死亡率。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用寇式法（Karder）[6]計算4種消毒劑作用下細(xì)鱗鮭幼魚的 24h、48h、72h和 96h半致死濃度（LC50），計算公式如下：LogLC50=Xm-d（∑p-0.5）。根據(jù)24h和48h的半致死濃度計算出安全濃度（SC）：SC=48hLC50×0.3/（24hLC50/48hLC50）2。式中：Xm為死亡組最大劑量的對數(shù)，d為相鄰兩組濃度對數(shù)差，p為各組的死亡率，∑p為各組死亡率的總和。

2 結(jié)果與分析

2.1 高錳酸鉀毒性試驗(yàn)

在高錳酸鉀質(zhì)量濃度為10.00mg·L-1時，試驗(yàn)魚放入藥液中后急速游動，呼吸頻率加快，側(cè)臥水底，3h后開始死亡。死魚身體僵直，口部張開，體色發(fā)黑，體表黏液增加，鰓上附著大量黑色沉淀，鰓絲充血紅腫，24h死亡率達(dá)100%。低濃度組魚在水底靜伏不動或緩慢游動。隨時間延長，高錳酸鉀對細(xì)鱗鮭的急性毒性明顯增強(qiáng)，死亡率上升（表2）。

表2 高錳酸鉀對細(xì)鱗鮭幼魚毒性試驗(yàn)Tab.2 Toxicityofpotassium permanganatetolenok Brachymystax lenok juveniles

2.2 聚維酮碘毒性試驗(yàn)

在聚維酮碘質(zhì)量濃度為7.00mg·L-1時，試驗(yàn)魚進(jìn)入藥液幾分鐘后就開始急速游動、極度不安，逐漸失去平衡能力，在玻璃缸底部聚集，呼吸困難，陸續(xù)開始死亡，死亡魚身體僵硬，體表無黏液。低濃度組魚有輕度的反應(yīng)，呼吸急促，快速游動，而后慢慢恢復(fù)正常（表3）。

表3 聚維酮碘對細(xì)鱗鮭幼魚毒性試驗(yàn)Tab.3 Toxicity of povidone iodine to lenok Brachymystax lenok juveniles

2.3 食鹽毒性試驗(yàn)

在高濃度食鹽溶液中，試驗(yàn)魚表現(xiàn)不安，呈浮頭狀，偶爾上下游動，瀕臨死亡時呼吸微弱，對刺激反應(yīng)不靈敏，失去平衡，5h后開始陸續(xù)死亡，體表有大量黏液。低濃度組魚游動平緩，與空白對照組一致（表4）。

表4 食鹽對細(xì)鱗鮭幼魚毒性試驗(yàn)Tab.4 Toxicity of NaCl to lenok Brachymystax lenok juveniles

2.4 甲醛毒性試驗(yàn)

甲醛對細(xì)鱗鮭幼魚的毒性試驗(yàn)結(jié)果見表5。甲醛濃度為50.00mg·L-1時，試驗(yàn)魚極度不安，呈浮頭狀，失去平衡，尾部緩慢擺動，3h后開始死亡，死魚口及鰓蓋張開，翻臥于缸底，體色較對照組淺，體表有黏液，8h內(nèi)全部死亡。死亡率隨濃度升高明顯上升。

表5 甲醛對細(xì)鱗鮭幼魚毒性試驗(yàn)Tab.5 Toxicity of formaldehyde to lenok Brachymystax lenok juveniles

2.5 四種消毒劑對細(xì)鱗鮭幼魚的半致死濃度和安全濃度

四種消毒劑對細(xì)鱗鮭幼魚的24h、48h、72h、96h的半致死濃度和安全濃度見表6。根據(jù)化學(xué)物對魚類急性毒性等級評價標(biāo)準(zhǔn)，按96hLC50的大小將藥物劃分為劇毒（＜0.1mg·L-1）、高毒（0.1～1mg·L-1）、中毒（1～10mg·L-1）和低毒（＞10mg·L-1）4 個等級[7]。由表6可知，聚維酮碘的安全濃度為0.71mg·L-1，對細(xì)鱗鮭幼魚的急性毒性為高毒；高錳酸鉀和甲醛的96hLC50分別為 1.19mg·L-1和 2.61mg·L-1，為中毒；食鹽的96hLC50為2 376.00mg·L-1，為低毒。四種消毒劑對細(xì)鱗鮭幼魚的急性毒性由高至低依次為：聚維酮碘＞高錳酸鉀＞甲醛＞食鹽。安全濃度為：高錳酸鉀 1.19mg·L-1，聚維酮碘 0.71mg·L-1，食鹽 2 376 mg·L-1，甲醛 2.61mg·L-1。

表6 四種消毒劑對細(xì)鱗鮭幼魚的半致死濃度和安全濃度Tab.6 LC50and safe concentrations of the four disinfectants in lenok Brachymystax lenok juveniles

3 討論

3.1 高錳酸鉀對細(xì)鱗鮭的毒性

高錳酸鉀是常用的外用消毒劑，具有較強(qiáng)的氧化性，溶于水后產(chǎn)生的新生態(tài)氧能破壞菌體蛋白或酶蛋白，起到殺菌、殺蟲、消毒的作用。生產(chǎn)上通常用于防治魚、蝦等細(xì)菌、真菌和寄生蟲類疾病及工具、設(shè)施的消毒，但在堿性或微酸性的水中，高錳酸鉀易產(chǎn)生二氧化錳沉淀，沉積在水生動物鰓部，嚴(yán)重?fù)p壞鰓組織[8]。不同魚類對高錳酸鉀的耐受能力不同，細(xì)鱗鮭的安全濃度為1.19mg·L-1，比褐鱒Salmo trutta的安全濃度 0.18mg·L-1[9]高，與白斑狗魚 Esox lucius Linnaeus的 1.37mg·L-1[10]接近。由此可見，不同的魚對高錳酸鉀的敏感性相差較大。生產(chǎn)中高錳酸鉀全池潑灑濃度為2～3mg·L-1，短暫浸浴濃度為10～20mg·L-1[8]，高于細(xì)鱗鮭幼魚的安全濃度。因此，防治細(xì)鱗鮭的病害時，要慎用高錳酸鉀，但可用于養(yǎng)殖設(shè)施和工具的消毒。

3.2 聚維酮碘對細(xì)鱗鮭的毒性

聚維酮碘是一種高效的殺菌消毒劑，對細(xì)菌、真菌和病毒等均有不同程度的殺滅作用，可直接使菌體內(nèi)的蛋白質(zhì)變性、沉淀，致使病原微生物死亡，主要用于魚卵和體表的消毒，防治魚類爛鰓、癤瘡、腐皮等細(xì)菌性疾病效果較好[11,12]，但是在貝類等軟體動物和鮭、鱒等冷水性魚類中需慎重使用。聚維酮碘全池潑灑的指導(dǎo)用藥濃度為0.45～0.75mg·L-1，而在水產(chǎn)養(yǎng)殖中常用濃度為30～35mg·L-1浸泡5～20min[13]。聚維酮碘對錦鯉幼魚24h和48h的半致死濃度為 96.39mg·L-1和 70.88mg·L-1，安全濃度為11.49mg·L-1[14]。聚維酮碘對卡拉白魚的安全濃度為14.13 mg·L-1[15]。而在本次試驗(yàn)中，聚維酮碘對細(xì)鱗鮭幼魚的安全濃度為0.71 mg·L-1，為高毒。細(xì)鱗鮭對其非常敏感，在防治細(xì)鱗鮭的病害中禁止使用。

3.3 食鹽對細(xì)鱗鮭的毒性

在魚類的養(yǎng)殖過程中，食鹽是安全的常規(guī)藥物，主要是通過改變滲透壓來殺滅一些體外寄生蟲及病原微生物，可防治魚類水霉病、多種皮膚或鰓部的寄生蟲病和細(xì)菌性魚病。但是在實(shí)際操作中食鹽用量少不起作用，用量大則易引起水分流失，使鹽分透入血液導(dǎo)致魚體脫水。在殺滅有害細(xì)菌的同時也殺滅有益菌，還容易使魚體表粘液嚴(yán)重脫落，增加了細(xì)菌侵入機(jī)體的幾率，因此必須嚴(yán)格控制食鹽的用量[16]。本試驗(yàn)中，細(xì)鱗鮭的安全濃度為2 376.00 mg·L-1，與哲羅鮭Hucho taimen的安全濃度2 182.88mg·L-1相接近[17]，低于花鰻鱺Anguilla marmorata的安全濃度 6 600mg·L-1[18]，說明食鹽對魚類的毒性種間差異極大。本試驗(yàn)的結(jié)果遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于張玉勇等[16]細(xì)鱗鮭的安全濃度9.25mg·L-1，這可能是試驗(yàn)魚的規(guī)格不同或體質(zhì)條件差異導(dǎo)致的耐受性差異。食鹽的安全濃度較高，在生產(chǎn)實(shí)踐中，建議用作浸洗藥物，使用高濃度的食鹽進(jìn)行短時間浸洗效果更佳。

3.4 甲醛對細(xì)鱗鮭的毒性

甲醛能凝固蛋白質(zhì)和溶解脂類，與氨基酸結(jié)合使其變性，滅殺細(xì)菌、芽孢、真菌、病毒和寄生蟲的效果明顯，常用來防治魚、蝦、蟹、鱉等寄生蟲類疾病設(shè)施和工具消毒，還可用來浸泡標(biāo)本，其常用劑量為10～30mg·L-1[19]。甲醛消耗水中的氧氣，傷害魚類的鰓組織，使魚的黏液、表皮蛋白質(zhì)凝固，危害魚的鰓、體表。本試驗(yàn)結(jié)果表明，細(xì)鱗鮭對甲醛的安全濃度為2.61mg·L-1，與之前文獻(xiàn)中福爾馬林對細(xì)鱗鮭魚種的安全濃度為3.52mg·L-1[16]和虹鱒幼魚的安全濃度2.478 mg·L-1[20]相接近，低于其常用劑量，對細(xì)鱗鮭為中毒。在濃度為10.00mg·L-1時試驗(yàn)魚96h的死亡率為0%，在濃度為14.95mg·L-1時試驗(yàn)魚24h的死亡率為20%。在防治細(xì)鱗鮭的病害中可以使用甲醛，但要注意浸泡濃度及時間。

在生產(chǎn)上選用藥物時，除了要考慮藥物的劑量、用藥時間外，還要結(jié)合實(shí)際，考慮水溫、水質(zhì)以及養(yǎng)殖魚類的規(guī)格和生理狀態(tài)等，以確保用藥安全和有效。