舒高 宋曉飛 張軻 陳曉東 梁鵬展

1. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510006 2. 南陽市中心醫(yī)院骨科，河南 南陽 473000 3. 宜賓市第二人民醫(yī)院小兒外科，四川 宜賓 644000 4. 深圳市羅湖區(qū)中醫(yī)院，廣東 深圳 518000 5. 深圳平樂骨傷科醫(yī)院，廣東 深圳 518000

絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥是絕經(jīng)后女性較為常見的一種全身性骨疾病。絕經(jīng)后女性由于雌激素分泌不足，導(dǎo)致骨吸收抑制能力衰退，使得骨量流失加快；此外，有關(guān)研究發(fā)現(xiàn)女性雌激素水平下降還會導(dǎo)致血脂代謝異常的發(fā)生發(fā)展[1]，成為影響絕經(jīng)后女性身體健康和生活質(zhì)量的社會衛(wèi)生問題。西醫(yī)中常用的補充雌激素療法在治療過程中會增加患者發(fā)生心血管疾病的風(fēng)險[2]。中醫(yī)學(xué)認為腎對骨骼的生長具有重要的作用。近年來有研究報道指出，采用中醫(yī)補腎療法可以改善絕經(jīng)后女性的骨質(zhì)疏松癥狀[3]。本研究在建立絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松大鼠模型的基礎(chǔ)上，研究溫腎固疏方對大鼠模型骨代謝及脂代謝指標(biāo)的影響，探討其改善骨質(zhì)疏松和脂代謝異常的的作用機制，以期進一步發(fā)掘中醫(yī)藥治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥及脂代謝異常的臨床價值。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

80只雌性未孕SPF大鼠(200±20)g由鄭州大學(xué)實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK(豫)K2016-0002。大鼠在12 h：12 h的循環(huán)照明時間環(huán)境中飼養(yǎng)，溫度為22.0～24.0°C，濕度為50%～60%。所有實驗均按照動物保護與利用準則(批準文號SCXK 2012-0012)進行。

1.2 試劑

溫腎固疏方由本院藥房提供。I型膠原氨基端延長肽(PING)、抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(TRACP5b)、骨保護素(OPG)、骨鈣素(BGP)試劑盒均購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.3 模型建立與分組干預(yù)

80只雌性未孕SPF大鼠在喂養(yǎng)7 d后，隨機分為假去勢組20只和去勢組60只。去勢組大鼠麻醉后，取俯臥位于手術(shù)面板上，在左右兩側(cè)腹后壁肌肉層較薄弱處打開腹腔，找到卵巢后將其連帶輸卵管末端輕輕提出體外，結(jié)扎后用眼科剪將卵巢全部切除；假去勢組保留卵巢，只切除周圍少量脂肪，其余操作同去勢組。術(shù)后30 d，將去勢大鼠隨機分為對照組(n=20)、雌激素組(n=20)和實驗組(n=20)。雌激素組按照0.05 mg/(mL·100 g)戊酸雌二醇，實驗組按照20 g/(kg·d)溫腎固疏方藥劑，對照組和假去勢組大鼠按照0.5 mL/100 g生理鹽水，每天灌胃給藥1次，連續(xù)治療8周。

1.4 指標(biāo)檢測

最后一次治療后，大鼠心室抽血處死，搜集血液不抗凝，放置2 h后，分離血清，使用英諾華D280自動分析儀，測定血清血脂水平。取右側(cè)股骨，使用法國medilink超聲骨密度儀測量其骨密度(BMD)值。按照試劑盒說明書步驟要求，采用酶聯(lián)免疫法測定PING、TRACP5b、OPG、BGP四項骨代謝指標(biāo)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠骨密度值比較

與假去勢組相比，對照組大鼠的股骨和股骨近端的BMD顯著降低(P<0.05)；雌激素組和實驗組大鼠同樣部位的BMD均較對照組顯著增加(P<0.05)。詳見表1。

表1 各組大鼠右側(cè)股骨Table 1 BMD value of the femur in rats in each

注：與假去勢組比較，△P<0.05；與對照組比較，*P<0.05。

2.2 各組大鼠血清骨代謝指標(biāo)比較

與假去勢組相比，對照組大鼠的PING、TRACP5b、BGP水平顯著提高(均P<0.05)，OPG水平明顯下降(P<0.05)；灌胃治療后，雌激素組和實驗組大鼠的PING、TRACP5b、BGP水平均較對照組顯著提高(均P<0.05)，而OPG水平顯著降低(P<0.05)。詳見表2。

表2 各組血清PING、TRACP5b、BGP、OPG含量Table 2 The contents of serum PING, TRACP5b, BGP, and OPG in each group

注：與假去勢組比較，△P<0.05；與對照組比較，*P<0.05。

2.3 各組大鼠血脂指標(biāo)比較

與假去勢組大鼠比較，對照組大鼠四項血脂指標(biāo)水平均明顯惡化(均P<0.05)；灌胃治療后，雌激素組和實驗組大鼠的4項血脂指標(biāo)水平較對照組均發(fā)生顯著改善(均P<0.05)。詳見表3。

表3 各組大鼠血脂指標(biāo)水平Table 3 The levels of serum lipids in each group

注：與假去勢組比較，△P<0.05；與對照組比較，*P<0.05。

3 討論

骨代謝是破骨細胞和成骨細胞共同作用的過程。正常水平的雌激素不僅可直接通過成骨細胞及破骨細胞表面的受體刺激成骨細胞形成、抑制破骨細胞；還能通過降低甲狀旁腺素的骨骼刺激來抑制破骨細胞[4-5]。研究發(fā)現(xiàn)，絕經(jīng)后女性的雌激素水平下降，導(dǎo)致骨單位的激活頻率增加，骨轉(zhuǎn)換和重建加快，促進了骨單位流失，使骨量下降[6]。骨鈣素(BGP)是一種由49個氨基酸組成的蛋白質(zhì)，在調(diào)節(jié)骨鈣代謝中起重要作用，其水平變化能反應(yīng)骨代謝程度。有關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，絕經(jīng)后雌激素下降，會導(dǎo)致機體血液含鈣量降低，誘發(fā)甲亢發(fā)生，進而使得高代謝型骨質(zhì)疏松骨鈣素升高[7]。I型膠原氨基端延長肽(PINP)是骨形成的特異性指標(biāo)，骨更新率越快，該值越高，反之越低，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松女性血清PING值較正常女性明顯下降[8]。抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(TRACP5b)是反映破骨細胞活動狀態(tài)的重要標(biāo)志物，破骨細胞在骨吸收過程中會產(chǎn)生大量的TRACP5b，有關(guān)研究提出絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥患者的TRACP5b水平明顯高于骨密度正常的女性[9]。骨保護素(OPG)是雌激素影響骨代謝的重要路徑，是骨質(zhì)疏松發(fā)生的重要因素之一[10]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)絕經(jīng)女性的骨密度與OPG水平之間存在正相關(guān)關(guān)系[11]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與假去勢組大鼠相比，去勢組大鼠的股骨及其近端的骨密度值明顯下降(P<0.05)，并且骨代謝指標(biāo)水平明顯惡化(均P<0.05)，與上述研究結(jié)果基本相符。

國內(nèi)相關(guān)研究證實，絕經(jīng)后女性雌激素分泌下降與血脂異常的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[12]。本研究結(jié)果顯示，去勢組大鼠的血脂指標(biāo)水平較假去勢組明顯惡化(均P<0.05)，與王景等[13]研究結(jié)果基本一致，表明絕經(jīng)后血脂代謝異常與雌激素分泌下降有關(guān)，主要原因是雌激素分泌下降導(dǎo)致肝臟酶對膽固醇、甘油三酯合成的抑制作用降低。

溫腎固疏方主要由骨碎補、淫羊藿、黨參、補骨脂等藥材組成，以益腎滋陰為主，輔以溫陽補氣。溫腎固疏方一方面可以通過強腎溫陽來加強對骨的營養(yǎng)，刺激骨形成，具有抗骨質(zhì)疏松的功效。例如其中的重要成分骨碎補總黃酮能夠抑制骨保護素的減少，進而減少骨量的吸收。另一方面，骨碎補、淫羊藿、補骨脂等中藥成分中含有類似植物雌激素活性的異黃酮物質(zhì)，可降低雌激素水平減少對骨代謝和脂代謝產(chǎn)生的不良作用。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，采用溫腎固疏方治療的實驗組大鼠的股骨及其近端的骨密度值，骨代謝指標(biāo)和血脂指標(biāo)均較對照組明顯改善(均P<0.05)，表明溫腎固疏方通過發(fā)揮補腎壯骨及類雌激素的作用，有效提高絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松大鼠的骨密度，調(diào)節(jié)骨代謝和脂代謝指標(biāo)水平，達到改善骨質(zhì)疏松和調(diào)節(jié)血脂代謝的效果。