王 留，王向國，柴西超

（商丘職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南 商丘 476100）

蒲公英為多年生菊科草本植物，其干燥全草常作為一種傳統(tǒng)的臨床常用中草藥，具有清熱、利尿、消腫、解毒等作用。蒲公英化學(xué)成分復(fù)雜，主要含有總黃酮、綠原酸、咖啡酸、生物堿、多糖等化合物，具有抗菌消炎、免疫調(diào)節(jié)、清除自由基、抗氧化、抗應(yīng)激、抗腫瘤等多種生物學(xué)功能[1-5]。蒲公英在我國有廣泛的地域分布，在東北、華北、華中、華東地區(qū)有豐富的原料來源，是一種高效無毒、價格低廉的綠色飼料添加劑，具有很高的研究開發(fā)和推廣應(yīng)用價值。本試驗在斷奶仔豬飲水中分別添加3 g/L、6 g/L蒲公英水提物，通過測定斷奶仔豬血清中白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-2（IL-2）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）以及血清總抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、過氧化氫酶（CAT）活性、丙二醛（MDA）含量，評價蒲公英水提物對斷奶仔豬免疫功能和抗氧化功能的影響，為蒲公英水提物在養(yǎng)豬生產(chǎn)應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

真空采血管；臺式冷凍離心機(jī)，湖南赫西儀器裝備有限公司；722型可見光分光光度計，上?？蒲袃x器有限公司；酶標(biāo)儀，上海拜格科技公司?？偪寡趸芰Γ═-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、過氧化氫酶（CAT）、丙二醛（MDA）檢測試劑盒，購于南京建成生物工程公司。白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-2（IL-2）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測試劑盒，購于上海藍(lán)基生物科技有限公司。蒲公英水提物，商丘職業(yè)技術(shù)學(xué)院動物藥理實驗室制備，詳見參考文獻(xiàn)[6]。

1.2 試驗分組與處理

30頭35日齡健康、體重相近的杜長大三元雜種仔豬隨機(jī)分成空白對照組、試驗1組、試驗2組，每組10頭，各組均飼喂基礎(chǔ)飼糧。試驗期間，試驗1、2組飲水中分別添加終濃度為3 g/L、6 g/L的蒲公英水提物，自由飲水；空白對照組正常飲水。試驗期35 d。試驗于2018年7月10日至8月14日在商丘宏鑫養(yǎng)豬場進(jìn)行，斷奶仔豬采用高架保育床飼養(yǎng)，按該場年度保健計劃與免疫程序進(jìn)行保健與免疫。

1.3 樣品采集與處理

試驗結(jié)束時，用不含抗凝劑的真空采血管每頭豬耳靜脈采血5 mL，室溫靜置3 h自然凝固，3 000 r/min離心5 min分離血清，-20℃凍存，用于血清免疫因子和抗氧化功能指標(biāo)的測定。

1.4 指標(biāo)檢測

1.4.1 血清免疫因子檢測 血清IL-1β、IL-2、IL-6采用ELISA檢測試劑盒測定，操作過程嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4.2 血清抗氧化功能指標(biāo)檢測 T-AOC采用化學(xué)比色法測定，GSH-Px活性采用二硫代二硝基苯甲酸法測定，超氧化物SOD活性采用化學(xué)比色法測定，CAT活性采用紫外吸收法測定，MDA含量采用硫代巴比妥法測定，操作過程嚴(yán)格按照檢測試劑盒說明書進(jìn)行。

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗采用SPSS 20.0統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行單因素方差分析，用LSD法進(jìn)行多重比較，試驗數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，以P＜0.05作為差異顯著性判定標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 蒲公英水提物對斷奶仔豬血清免疫因子的影響

血清免疫因子檢測結(jié)果見表1，試驗結(jié)果顯示，飲水中添加蒲公英水提物的斷奶仔豬血清中免疫因子含量與空白對照組相比呈整體升高趨勢。試驗1、2組血清中IL-1β和IL-6含量與空白對照組相比差異顯著（P＜0.05），試驗1組血清中IL-2含量與空白對照組相比差異不顯著（P＞0.05），試驗2組血清中IL-2含量與空白對照組相比差異顯著（P＜0.05）。

表1 蒲公英水提物對斷奶仔豬血清免疫因子的影響

2.2 蒲公英水提物對斷奶仔豬抗氧化功能的影響

蒲公英水提物對斷奶仔豬抗氧化功能指標(biāo)的影響見表2。飲水中添加蒲公英水提物能夠相對提高斷奶仔豬血清中 T-AOC、SOD、GSH-Px、CAT 活性和降低血清MDA含量。試驗1、2組血清中GSH-Px活性和MDA含量與空白對照組相比差異顯著（P＜0.05），試驗 1組血清中 T-AOC、SOD、CAT 活性與空白對照組相比差異不顯著（P＞0.05），試驗2組血清中T-AOC、SOD、CAT活性與空白對照組相比差異顯著（P＜0.05）。

表2 蒲公英水提物對斷奶仔豬抗氧化功能指標(biāo)的影響

3 討論分析

3.1 蒲公英水提物對斷奶仔豬免疫功能的影響

動物的免疫功能依賴于動物機(jī)體免疫系統(tǒng)內(nèi)免疫細(xì)胞、免疫因子的正常運轉(zhuǎn)。白細(xì)胞介素是機(jī)體內(nèi)一類具有免疫調(diào)節(jié)功能的免疫因子，參與機(jī)體免疫細(xì)胞之間的信息傳遞，對機(jī)體的特異性免疫應(yīng)答發(fā)揮重要的調(diào)控作用[7]。IL-1又稱為淋巴細(xì)胞刺激因子，主要由活化的單核-巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，有IL-1α和IL-1β兩種分子形式。局部低濃度的IL-1β主要發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。IL-1β與抗原協(xié)同作用促進(jìn)CD4+T細(xì)胞活化和白細(xì)胞介素-2受體（IL-2R）表達(dá)，促進(jìn)B細(xì)胞生長分化和抗體分泌，促進(jìn)單核-巨噬細(xì)胞等抗原提呈細(xì)胞的抗原遞呈能力，與IL-2或干擾素協(xié)同增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）活性[8]。IL-2又稱T細(xì)胞生長因子，主要由活化的T細(xì)胞產(chǎn)生，以自分泌和旁分泌方式發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)。IL-2通過自分泌途徑促進(jìn)CD4+T細(xì)胞生長，通過旁分泌途徑促進(jìn)CD8+T細(xì)胞生長。IL-2刺激NK細(xì)胞增殖，增強(qiáng)NK細(xì)胞殺傷活性及產(chǎn)生細(xì)胞因子，誘導(dǎo)淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞（LAK細(xì)胞）產(chǎn)生；促進(jìn)B細(xì)胞增殖和分泌抗體；激活巨噬細(xì)胞[8]。IL-6由活化的T細(xì)胞、B細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞以及成纖維細(xì)胞等多種細(xì)胞所產(chǎn)生。IL-6能夠刺激B細(xì)胞活化增殖，分泌抗體；刺激T細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL）活化；刺激肝細(xì)胞合成急性期蛋白，參與炎癥反應(yīng)；促進(jìn)血細(xì)胞發(fā)育[8]。綜上所述，IL-1β、IL-2、IL-6不僅參與機(jī)體的免疫應(yīng)答反應(yīng)，同時對免疫應(yīng)答的過程起著重要的調(diào)控作用。

蒲公英含有的多糖類物質(zhì)具有調(diào)節(jié)免疫的功能，吳小麗等研究顯示蒲公英提取物能夠提高小鼠的免疫功能[9]，王留等試驗表明蒲公英水提物能夠調(diào)整肉仔雞體液免疫和細(xì)胞免疫，提高機(jī)體的整體免疫功能[6]。本試驗通過檢測斷奶仔豬血清中IL-1β、IL-2、IL-6等免疫因子的水平評價蒲公英水提物對斷奶仔豬免疫功能的影響，結(jié)果顯示，與空白對照組相比，飲水中添加3～6 g/L蒲公英水提物能夠顯著提高血清中IL-1β、IL-2、IL-6等免疫因子的水平，說明蒲公英水提物能夠調(diào)節(jié)斷奶仔豬的免疫狀態(tài)，提高機(jī)體的整體免疫功能。

3.2 蒲公英水提物對斷奶仔豬抗氧化功能的影響

T-AOC、SOD、GSH-Px、CAT 是機(jī)體內(nèi)主要的抗氧化酶類，其含量的變化反映機(jī)體抗氧化功能的改變，常作為評價機(jī)體抗氧化功能的臨床檢測指標(biāo)。蒲公英含有豐富的綠原酸、黃酮、多糖類化學(xué)物質(zhì)，綠原酸是一種縮酚酸，屬酚類化合物，可以清除體內(nèi)自由基，從而減輕機(jī)體的氧化應(yīng)激損傷。鐘潔等研究發(fā)現(xiàn)，蒲公英糖蛋白對羥自由基（-OH）具有很好的清除能力，并且清除作用與濃度呈正相關(guān)[10]。王珅等試驗顯示，肉仔雞飲水中添加5 g/L蒲公英多糖能夠顯著增加血清SOD和降低MDA含量[11]。本試驗通過檢測斷奶仔豬血清中 T-AOC、SOD、GSH-Px、CAT、MDA等指標(biāo)，評價蒲公英水提物對斷奶仔豬抗氧化功能的影響，結(jié)果表明，與空白對照組相比，飲水中添加3～6 g/L蒲公英水提物能夠顯著提高斷奶仔豬血清中 T-AOC、SOD、GSH-Px、CAT活性，降低血清MDA含量，說明蒲公英水提物能夠調(diào)整斷奶仔豬的氧化-抗氧化系統(tǒng)，提高機(jī)體的整體免疫功能。