王春風 李詠 金玲 趙光葉 劉一龍

慢性牙周炎主要表現(xiàn)為牙齦紅腫、出血，牙周袋形成，牙槽骨吸收，牙齒松動移位，最終導致牙齒脫落，嚴重影響患者的生活質量[1]。齦溝液(gingival crevicular fluid，GCF)是牙周的重要防御體系之一，其內(nèi)容物細胞因子對于牙周炎癥的變化更為敏感，可直接或者間接影響牙周疾病的變化發(fā)展[2]。其中單核細胞趨化因子(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)和白細胞介素-8(interleukin-8,IL-8)對單核細胞、巨噬細胞、淋巴細胞具有很強的趨化活性，在牙周炎炎癥反應中發(fā)揮著十分重要的作用。有研究[3-5]顯示牙周炎病原菌的水平及牙周探診深度、附著喪失等牙周指數(shù)與MCP-1、IL-8總量呈正相關。吸煙是慢性牙周炎的高危因素，嚴重影響著慢性牙周炎患者齦溝液中細胞因子水平，從而影響著牙周基礎治療的療效[6-7]。本研究通過對80 例吸煙和不吸煙的慢性牙周炎患者進行牙周基礎治療，檢測治療前后牙石指數(shù)、探診出血指數(shù)、牙周探診深度、牙周附著喪失水平和齦溝液中MCP-1、 IL-8表達水平的變化，探討吸煙對慢性牙周炎患者牙周基礎的療效和齦溝液中MCP-1、IL-8表達的影響，以期為牙周炎的臨床診治提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

1.1.1 病例選擇及分組 選取2015-05～2016-05來該院口腔科診治的慢性牙周炎患者80 例，經(jīng)倫理委員會批準，且患者知情同意。按照是否吸煙分為2 組，其中吸煙組40 例(吸煙患者要求日均吸煙量≥10 支，具有連續(xù)3 年以上吸煙史)：男26 例，女14 例，年齡(39.52±5.33) 歲；非吸煙組40 例：男 25 例，女15 例，年齡(38.49±5.28) 歲。2 組患者在年齡、性別等一般資料方面無明顯差異(P>0.05)。

1.1.2 慢性牙周炎患者納入標準[8]選取符合國際牙周炎研討會制定的慢性牙周炎診斷標準的患者作為研究對象：①PD≥5 mm、AL>4 mm的牙占受檢牙的30%以上，或PD>4 mm且AL≥3 mm的牙占受檢牙的60%以上；②BOP陽性：即牙周袋探診深度檢查完成后10 s內(nèi)齦溝有出血；③牙齦炎癥。然后從完全符合以上標準的每個慢性牙周炎患者的口腔中選取流行病學代表牙位11、16、26、31、36、46作為研究牙齒進行追蹤研究，每顆牙均做頰、舌側的遠中、正中和近中6 個位點記錄，統(tǒng)一使用CPI牙周探針，進行菌斑指數(shù)(plaque index，PLI)、探診出血(bleeding on probing，BOP，0=探診不出血，l=探診出血)、探診深度(probing depth，PD)、附著喪失(clinical attachment Loss，AL)檢查，6 個位點的PD和AL平均值即為每個牙的結果，受檢牙的平均值即為患者的平均結果。

1.1.3 排除標準 ①系統(tǒng)性疾病，如高血壓，糖尿病，炎性感染性疾病，局部感染，病毒感染，真菌感染，風濕性類風濕性關節(jié)炎;②3 個月內(nèi)有非甾體類抗炎藥和其他用藥史者等;③實驗牙經(jīng) X線檢查確診存在根尖周病或咬合創(chuàng)傷;④半年內(nèi)接受過牙周治療。

1.1.4 吸煙者和不吸煙者的判斷標準 吸煙者判斷標準：日均吸煙量大于10 支，連續(xù)3 年以上者；不吸煙者的判斷標準：從未吸煙者。

1.2 方法

1.2.1 牙周基礎治療及牙周指標檢查[9]對2 組患者均進行相同的齦上潔治術和齦下刮治術，在治療過程中禁用抗生素，治療后對患者進行口腔衛(wèi)生健康宣教，并使其掌握基本的刷牙方法，吸煙組患者囑其保持日常的吸煙習慣和數(shù)量；并于牙周治療前及治療4 周后進行PLI、PD、BOP、AL等牙周指標檢查，所有檢查和治療均由同一名牙周醫(yī)生完成(Kappa值為0.92)。

1.2.2 GCF 的采集[10-11]于牙周治療前及治療4 周后采用濾紙吸附法采集GCF，選擇牙頸部無齲損及充填體、PD≥3 mm、AL≥1 mm，牙槽骨存在不同程度破壞的磨牙作為實驗牙。去除實驗牙上大塊的牙石及牙斑菌，用無菌棉球將牙面擦干后，溫空氣輕吹實驗牙及周圍牙齦，用濾紙條(上海Whatman)(使用前稱重)分別插入實驗牙頰、舌側近中及遠中4 個位點的齦溝或牙周袋內(nèi)，稍有阻力即止，取樣后分別將濾紙條放入EP管中密封稱重，并計算GCF的重量(取樣后重量-取樣前重量),然后根據(jù)GCF 的比重(1 mg/μl)將其換算成體積(μl)，置于-70 ℃環(huán)境中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 GCF中MCP-1、IL-8檢測 將保存待檢的 GCF 樣本取出后與試劑盒一起平衡至室溫后，加入100 μl PBS 緩釋液 以5 000 r/min 速度離心5 min，然后去除濾紙條，保留上清液。分別采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測GCF中MCP-1、IL-8。

1.3 統(tǒng)計學分析

2 結 果

2.1 牙周指標檢查結果

治療前吸煙組牙周指標中PLI、BOP 明顯高于非吸煙組，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，治療后4 周，2 組患者的PLI、BOP、PD、AL四項牙周指標均較治療前明顯改善(P<0.05)，但吸煙組的PLI、BOP、PD、AL四項牙周指標的降低幅度明顯小于非吸煙組，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)(表 1)。

2.2 治療前后 GCF體積的變化

治療前吸煙組GCF體積高于非吸煙組，有統(tǒng)計學差異(P<0.05);治療后4 周，2 組GCF體積較治療前明顯降低(P<0.05)，但吸煙組GCF體積降低幅度明顯小于非吸煙組(P<0.05)(表 2)。

2.3 MCP-1、IL-8檢測結果

治療前吸煙組 MCP-1、IL-8濃度高于非吸煙組(P<0.05);治療后4 周，2 組 MCP-1、IL-8濃度均較治療前明顯降低(P<0.05)，但吸煙組MCP-1、IL-8濃度降低幅度明顯小于非吸煙組(P<0.05)(表 3)。

2.4 吸煙與牙周臨床指標及GCF、MCP-1、IL-8相關性分析

將吸煙組患者治療前的吸煙指數(shù)(平均每天吸煙量×吸煙年限)與牙周臨床指標PLI、BOP、PD、AL及GCF、MCP-1、IL-8做相關性統(tǒng)計分析。發(fā)現(xiàn)吸煙指數(shù)與PLI、 BOP、MCP-1、IL-8、 GCF呈正相關(r=0.433、0.454、0.379、0.386、0.412，P<0.05)(表 4)。

表 1 2 組患者牙周基礎治療前后牙周指標比較

注：①自身治療前后比較,P<0.05；②治療前組間比較，P<0.05；③降低幅度組間比較，P<0.05

表 2 2 組患者牙周基礎治療前后GCF體積比較

注：①治療前后自身比較，P<0.05；②組間比較，P<0.05

3 討 論

慢性牙周炎其致病機理不僅與牙周致病微生物有關，還與機體防御應答有很大關系。柳鋒等[12]指出，牙周炎的發(fā)生、發(fā)展與齦溝液中的細胞因子有相關性，當機體受到刺激時細胞因子的表達水平出現(xiàn)異常，從而影響慢性牙周炎患者的炎癥程度和臨床癥狀。Lee等[13]比較健康牙周者、慢性牙周炎、牙齦炎患者的齦溝液和齦下菌斑發(fā)現(xiàn)，牙周炎病原菌的水平與MCP-1、IL-8總量呈正相關。Emingil等[14]發(fā)現(xiàn)牙周病患者隨著探診深度、附著喪失等牙周指數(shù)的升高，齦溝液中MCP-1、 IL-8的表達水平升高，牙周病的病理改變，如牙周炎癥、牙槽骨吸收都有MCP-1、IL-8的參與。

表 3 2 組患者牙周基礎治療前后MCP-1、IL-8濃度比較

注：①自身治療前后比較,P<0.05；②治療前組間比較，P<0.05；③降低幅度組間比較，P<0.05

表 4 吸煙與牙周臨床指標及MCP-1、IL-8、GCF相關性分析

流行病學調(diào)查和臨床研究[15]顯示，吸煙是牙周炎發(fā)生發(fā)展的重要危險因素，它不僅損傷牙齦結締組織中的成纖維細胞與膠原纖維，導致牙周炎患病率高、病情重，而且調(diào)控細胞因子的釋放，降低牙齦的修復能力及牙周組織的重建功能，從而影響慢性牙周炎患者牙周基礎治療的療效和齦溝液中細胞因子的表達[16]。

本研究通過對吸煙和不吸煙慢性牙周炎患者牙周基礎治療前及治療4周后PLI、BOP、PD、AL的觀察和齦溝液中MCP-1、 IL-8濃度檢測，發(fā)現(xiàn)治療前吸煙組牙周指標中PLI、BOP明顯高于非吸煙組(P<0.05)，而其余牙周指標PD、AL雖高于非吸煙組，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，提示吸煙使慢性牙周炎患者菌斑增加，探針出血嚴重，與柳峰等[12]研究結果一致;此外治療前吸煙組慢性牙周炎患者GCF及其內(nèi)容物MCP-1、IL-8濃度明顯高于非吸煙組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，說明吸煙也增加慢性牙周炎患者GCF及其內(nèi)容物MCP-1、IL-8表達水平。然后通過Pearson 相關分析，發(fā)現(xiàn)吸煙指數(shù)與PLI、 BOP、GCF 、MCP-1、IL-8呈正相關(r=0.433、0.454、0.379、0.386、0.412，P<0.05)，進一步說明吸煙可能通過增加慢性牙周炎患者的牙菌斑和齦溝液，加重牙周炎癥和上調(diào)MCP-1、IL-8表達水平。牙周基礎治療后4 周，兩組患者的PLI、BOP、PD、AL四項牙周指標和GCF體積及MCP-1、IL-8濃度均較治療前明顯改善(P<0.05)，表明無論是吸煙還是不吸煙的慢性牙周炎患者，牙周基礎治療均能有效控制2 組慢性牙周炎患者的菌斑感染及齦溝液量，改善牙周臨床癥狀，降低GCF中MCP-1、IL-8的濃度，與呂康波和吳敏等[17-18]的研究結果一致；但吸煙組患者的PLI、BOP、PD、AL四項牙周指標和GCF體積及其內(nèi)容物MCP-1、IL-8濃度的降低幅度明顯小于非吸煙組(P<0.05)(表 1～2)，提示吸煙嚴重影響慢性牙周炎患者牙周基礎治療后PLI、BOP、PD、AL等牙周臨床癥狀的改善和GCF體積及其內(nèi)容物MCP-1、IL-8水平的下降。究其原因可能為:①吸煙造成牙齦成纖維細胞與膠原纖維損傷，抑制纖維細胞活性,阻礙牙周組織的新附著，從而降低牙周組織的修復能力；②吸煙組患者治療后其牙周各項指標均明顯高于非吸煙組，表示患者仍存在一定的炎性癥狀。吸煙增加牙周炎性細胞的聚集，聚集的炎性細胞釋放MCP-1、IL-8，MCP-1、IL-8又反過來引起牙周炎細胞的聚積, 如此循環(huán)形成放大反應,從而影響了牙周癥狀的改善；③吸煙使慢性牙周炎患者齦溝液增加，并影響牙周基礎治療后齦溝液的降低，從而導致吸煙組牙周基礎治療后齦溝液MCP-1、IL-8濃度降低幅度小于非吸煙組。但是由于牙周基礎治療后觀察時間短只有4周，存在一定的局限性，其結論和具體機制有待驗證和研究。

綜上所述，通過對吸煙和非吸煙慢性牙周炎患者牙周基礎治療前后PLI、BOP、PD、AL四項牙周指標、齦溝液及其內(nèi)容物MCP-1、IL-8濃度的檢測和吸煙指標與PLI、BOP、PD、AL、MCP-1、IL-8的Pearson 相關性分析，揭示吸煙嚴重影響了慢性牙周炎患者牙周基礎后牙周癥狀的改善和MCP-1、IL-8濃度的改變。因此，在慢性牙周炎的牙周基礎治療過程中，吸煙患者應盡量少抽煙或戒煙來提高牙周基礎治療的效果。