古國(guó)寧 蔣小藝 張宏佳

丙型肝炎是一種臨床常見(jiàn)病, 其臨床特征接近于乙型肝炎, 但癥狀相對(duì)較輕, 與乙型肝炎相比, 丙型肝炎更容易出現(xiàn)肝硬化, 發(fā)展成為肝癌的幾率更大, 因此丙肝病毒的變異性較高, 所以丙肝疫苗在短期內(nèi)無(wú)法取得突破性的進(jìn)展, 患者預(yù)后普遍較差, 及早的對(duì)患者病情做出診斷, 對(duì)于改善患者預(yù)后, 降低死亡率具有重大影響［1,2］。現(xiàn)臨床上多用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)法對(duì)HCV-Ab進(jìn)行檢測(cè), 由于抗體出現(xiàn)的較晚, 存在窗口期, 在一定程度上會(huì)影響早期丙肝患者的診斷, 從而失去早期治療的時(shí)機(jī), HCV-cAg檢測(cè)丙肝的病原體, 與HCV-Ab檢測(cè)比較, 能更早的檢測(cè)出丙型肝炎。鑒于上述研究背景, 本文選擇2015年6月～2018年6月本院收治的HCV-Ab陽(yáng)性感染患者55例以及同期門診體檢的HCV-Ab陰性高危者55例進(jìn)行HCV-cAg檢測(cè)研究, 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 在醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)下開(kāi)展本研究, 選擇2015年6月~2018年6月本院收治的HCV-Ab陽(yáng)性感染的住院患者55例作為HCV-Ab(+)組, 同期門診體檢谷丙轉(zhuǎn)氨酶>200 U/L的HCV-Ab陰性高危者55例作為HCV-Ab(-)組。HCV-Ab(+)組女23例, 男32例；年齡36~62歲, 平均年齡(49.26±6.23)歲；體質(zhì)量指數(shù)18~26 kg/m2, 平均體質(zhì)量指數(shù)(22.14±2.05)kg/m2。HCV-Ab(-)組女21例 , 男 34例；年齡38~60歲, 平均年齡(49.14±6.14)歲；體質(zhì)量指數(shù)19~26 kg/m2,平均體質(zhì)量指數(shù)(22.04±2.14)kg/m2。兩組性別、年齡等一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：①自愿參加本次研究者；②年齡>18周歲者；③患者于研究前均知情, 并對(duì)知情同意書(shū)閱讀簽字者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他器質(zhì)性疾病者；②合并心力衰竭、惡性腫瘤者；③存在精神疾病、聽(tīng)語(yǔ)障礙者；④配合度、依從性較差者；⑤存在凝血功能障礙、血液疾病者。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本處理 抽取所有研究對(duì)象空腹靜脈血5 ml, 離心處理, 速率是3000 r/min, 離心時(shí)間5 min, 分離血清, 保存在-20℃的冰箱中, 標(biāo)本確保僅凍融1次。

1.2.2 HCV-cAg檢測(cè) 采用ELISA法對(duì)HCV-cAg進(jìn)行定性分析, 采用儀器為深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司的RT-6100型的酶標(biāo)儀, HCV-cAg測(cè)定試劑盒由湖南景達(dá)生物工程有限公司提供。嚴(yán)格按照對(duì)應(yīng)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作, 最終在酶標(biāo)儀上用單波長(zhǎng)450 nm讀取各孔的吸光度值(A值), 以檢測(cè)樣本的A值≥臨界值(C.O.)為檢測(cè)陽(yáng)性, 檢測(cè)樣本的A值<臨界值(C.O.)為檢測(cè)陰性。

1.2.3 HCV-RNA檢測(cè) 采用核酸擴(kuò)增法對(duì)HCV-RNA進(jìn)行測(cè)定, 儀器為美國(guó)Applied Biosystems公司的 7500型實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)分析儀, 試劑為上海科華生物工程股份有限公司的丙型肝炎病毒核酶測(cè)定試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?, 嚴(yán)格按照對(duì)應(yīng)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。對(duì)本研究中的兩組標(biāo)本均采用核酸擴(kuò)增法檢測(cè)HCV-RNA載量來(lái)進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)。以1000 copies/ml為敏感線, >1000 copies/ml為陽(yáng)性。

1.3 觀察指標(biāo) 比較兩組HCV-cAg檢測(cè)結(jié)果, 分析HCV-cAg與HCV-RNA檢測(cè)結(jié)果符合情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS24.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組HCV-cAg檢測(cè)結(jié)果比較 HCV-Ab(+)組HCV-cAg檢出陽(yáng)性率為83.64%(46/55), 高于HCV-Ab(-)組的5.45%(3/55), 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組HCV-cAg檢測(cè)結(jié)果比較(n)

2.2 HCV-cAg與HCV-RNA檢測(cè)結(jié)果符合情況 HCV-Ab(+)組中HCV-cAg陽(yáng)性患者46例, HCV-Ab(-)組中HCV-cAg陽(yáng)性患者3例, 共49例。HCV-cAg與HCV-RNA的檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性符合率為94.00%(47/50), 陰性符合率為96.67%(58/60),總符合率為95.45%(105/110)。見(jiàn)表2。

表2 HCV-cAg與HCV-RNA檢測(cè)結(jié)果符合情況(n)

3 討論

當(dāng)前, 臨床普遍認(rèn)為丙肝與肝癌、肝硬化的發(fā)生有著極為密切的聯(lián)系, 丙肝患者機(jī)體中HCV復(fù)制活躍, 具有較強(qiáng)的傳染性, HCV可以通過(guò)密切接觸、靜脈吸毒、輸血等方式傳播, 一般HCV感染是持續(xù)性的終生感染, 將近20%的HCV感染患者在10～20年后會(huì)發(fā)展成為肝硬化, 10年內(nèi)的生存率較低, 因此HCV復(fù)制活躍的患者, 應(yīng)及早的進(jìn)行抗病毒治療,最大限度延緩疾病發(fā)展［3,4］。HCV感染早期臨床癥狀較輕,極易被患者忽視, 往往會(huì)導(dǎo)致疾病錯(cuò)過(guò)最佳的治療時(shí)機(jī)。當(dāng)前臨床診斷肝炎病毒的常用方法有HCV-RNA、丙肝病毒重組免疫印跡法(HCV-RIBA), 但是上述檢測(cè)方法對(duì)實(shí)驗(yàn)室要求嚴(yán)格, 且操作步驟復(fù)雜, 成本較高, 具有一定的局限性, 在基層醫(yī)院根本無(wú)法開(kāi)展。

人體感染了HCV要經(jīng)歷窗口期, 一般HCV-Ab在HCV感染后的2～6個(gè)月內(nèi)才能檢出, 而在感染HCV后的14～35 d,就可檢出HCV-cAg［5,6］。HCV-cAg是HCV早期感染的重要標(biāo)志, 一般是與HCV-RNA同時(shí)出現(xiàn), 感染后的14～70 d是檢測(cè)HCV-cAg的最佳時(shí)段［7］。HCV-cAg檢測(cè)操作方便、價(jià)格低廉、對(duì)實(shí)驗(yàn)室要求較低, 明顯縮短了檢測(cè)的窗口期, 對(duì)于早期診斷患者疾病, 反映HCV復(fù)制情況具有一定的積極意義。本文研究示：HCV-Ab(+)組HCV-cAg檢出陽(yáng)性率為83.64%(46/55), 高于HCV-Ab(-)組的5.45%(3/55), 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。HCV-cAg試劑盒的檢測(cè)結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)HCV-RAN的檢測(cè)結(jié)果的陽(yáng)性符合率為94.0%(47/50), 陰性符合率為96.67%(58/60), 總符合率為95.45%(105/110)。證實(shí)了HCV-cAg檢測(cè)在丙肝患者疾病診斷中的可行性、有效性、及可靠性性, 值得作為丙肝患者首選的病情檢測(cè)方法, 在臨床中借鑒、參考價(jià)值較高。但是本文仍舊存在一定的不足,例如樣本研究容量較小, 研究時(shí)限過(guò)短等, 對(duì)結(jié)果一般性有所影響, 因此對(duì)于HCV-cAg檢測(cè)在丙肝診斷中的應(yīng)用價(jià)值,仍舊需要臨床進(jìn)一步擴(kuò)大樣本研究容量, 延長(zhǎng)研究時(shí)段, 開(kāi)展大量多中心、前瞻性、大規(guī)模的隨機(jī)試驗(yàn)加以驗(yàn)證。

綜上所述, 丙肝患者采納HCV-cAg檢測(cè), 可為臨床醫(yī)師診斷丙肝患者提供一定的參考依據(jù), 與HCV-RAN的總檢出符合率高, 能盡早診斷丙型肝炎患者, 盡可能避免患者錯(cuò)過(guò)最佳的治療時(shí)機(jī), 臨床應(yīng)用價(jià)值較高, 值得信賴并進(jìn)一步推廣。