路素麗 王玥 胡亞

摘要 目的：探討EB病毒核杭原- 1（EBNA1）在惡性淋巴瘤發(fā)生中的意義。方法：收集50例淋巴瘤組織蠟塊和20例癌旁正常組織蠟塊，采用免疫組織化學(xué)SP法檢測EBNA1的表達(dá)情況。結(jié)果：EBNA1在淋巴瘤標(biāo)本和癌旁正常組織中的陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)論：EBNA1在淋巴瘤中的表達(dá)上調(diào)，EBNA1的陽性表達(dá)率與惡性淋巴瘤的臨床分期和組織類型有關(guān)，推測EBNA1可能與淋巴瘤的預(yù)后有關(guān)。

關(guān)鍵詞 陽病毒核抗原- 1;淋巴瘤;表達(dá)率

淋巴瘤是近幾年國內(nèi)發(fā)病率呈上升趨勢的惡性血液腫瘤之一，淋巴瘤按細(xì)胞成分可以分為霍奇金淋巴瘤（HL）和非霍奇金淋巴瘤（NHL）。EBV基因組長約172kb，參與多種惡性腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展，被EB病毒感染的細(xì)胞攜帶EBV的基因組以表達(dá)一系列EBV潛伏感染蛋白為特征[1]。目前已發(fā)現(xiàn)EB病毒可表達(dá)6種核蛋白，即EBNA1、EBNA2、EBNA3A、EBNA3B、EBNA3C和EBNA-LP。其中EBNA1是病毒復(fù)制所需唯一的病毒編碼蛋白，在維持EBV在體內(nèi)的潛伏感染起重要的作用。本試驗收集南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院病理科2015年1月-2017年1月50例淋巴瘤組織蠟塊和20例癌旁正常組織蠟塊，采用免疫組織化學(xué)法檢測EB-NA1的表達(dá)情況。

資料與方法

收集2015年1月-2017年1月50例淋巴瘤組織蠟塊和20例癌旁正常組織蠟塊，患者術(shù)前未接受過放化療。免疫組化試劑盒購自北京中山金橋公司。鼠抗人EBNA1單克隆抗體購自美國SANTA公司。

方法：常規(guī)組織切片脫臘處理，抗原修復(fù)，孵育，非特異性血清封閉，滴加一抗，4℃孵育，滴加二抗，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，封片。用PBS代替一抗作為陰性對照，已知淋巴瘤陽性標(biāo)本作陽性對照。

統(tǒng)計學(xué)處理：統(tǒng)計學(xué)分析用SPSS13.0軟件，計數(shù)資料用R×C表的χ²檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

EBNA1在淋巴瘤及癌旁正常組織中的表達(dá)情況：EBNA1陽性定位于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核中，陽性顆粒為棕褐色。EBNA1在淋巴瘤中的陽性表達(dá)率為26%（13/50）， EBNA1在20例癌旁組織中無表達(dá)，EBNA1在兩組中的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

EBNA1的表達(dá)與淋巴瘤臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系：EBNA1的陽性表達(dá)與淋巴瘤患者的性別和年齡無明顯關(guān)系，而與腫瘤的組織類型及臨床分期密切相關(guān)，見表1。

討論

惡性淋巴瘤是我國常見的十大惡性腫瘤之一，屬于起源自淋巴造血系統(tǒng)的單克隆增殖性疾病，主要表現(xiàn)是無痛性淋巴結(jié)腫大，最開始多出現(xiàn)頸部的淋巴結(jié)腫大。隨著研究技術(shù)的不斷發(fā)展，國內(nèi)外學(xué)者對為淋巴瘤的病因和機(jī)制有了更深入的了解，淋巴瘤的發(fā)生可能和多種因素有關(guān)。EB病毒是一種重要的皰疹病毒，與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系，大部分成年人均感染過EB病毒而且終身攜帶[2]。被EB病毒感染的細(xì)胞攜帶EBV的基因組，其中EBNA1是一種EBV編碼核蛋白，由641個氨基酸組成。EBNA1可以通過調(diào)節(jié)信號通路從而影響細(xì)胞基因的轉(zhuǎn)錄，共同調(diào)節(jié)病毒基因與染色體的結(jié)合及分離，對維持EBV的潛伏感染起重要的作用[3]。EBNA1特有的甘氨酸一丙氨酸重復(fù)序列，可抑制抗原遞呈細(xì)胞對自身的加工與處理，因此可以逃避免疫應(yīng)答，在病毒復(fù)制中起重要作用[4]。Lu等研究發(fā)現(xiàn)EBNA1可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡抑制蛋白[5]，從而誘發(fā)腫瘤的發(fā)生。

本研究對50例淋巴瘤標(biāo)本和20例癌旁正常組織標(biāo)本，采用免疫組織化學(xué)法檢測EBNA1的表達(dá)情況，結(jié)果顯示EB-NA1在50例淋巴瘤中的陽性表達(dá)率為26%，在20例癌旁組織中無表達(dá)，有學(xué)者在Burkitt淋巴瘤組織中檢測到EBNA1的陽性表達(dá)并巨伴隨EBV DNA的甲基化[6]，本試驗結(jié)果與之相符。本試驗結(jié)果中31例男性其中有8例表達(dá)陽性，19例女性其中有5例表達(dá)陽性，二者差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），因此我們推測EBNA1的陽性表達(dá)與淋巴瘤患者的性別無明顯關(guān)系。本試驗結(jié)果中，19例年齡>60歲者中有4例表達(dá)陽性，31例年齡4～60歲者中有9例表達(dá)陽性，兩者無統(tǒng)計學(xué)意義，因此我們推測EBNA1的陽性表達(dá)與淋巴瘤患者的年齡無明顯關(guān)系。本試驗結(jié)果中10例HL有1例陽性表達(dá)，40例NHL中12例表達(dá)陽性，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），因此我們推測EBNA1的陽性表達(dá)與淋巴瘤的組織類型有關(guān)。本試驗結(jié)果中Ⅰ期和Ⅱ期共18例，其中有2例陽性表達(dá)，Ⅲ期和Ⅳ期共32例，其中有11例陽性表達(dá)，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），因此我們推測EBNA1的陽性表達(dá)與淋巴瘤的臨床分期有關(guān)。淋巴瘤的發(fā)生機(jī)制尚不完全明確，結(jié)合本次試驗結(jié)果并分析臨床病例資料，本次試驗推測EBNA1可能參與了淋巴瘤的發(fā)生及發(fā)展過程，但具體機(jī)制需要進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1]Lan K，Verma SC，Murakami M，et al.Ep-stein-Barr virus（EBV）Hnfeetion，propagation，quantitation，and storage[J].Curr Protoc Mi-crobiol，2007，14（14）：2.

[2]Takacs M，Banati F，Koroknai A，et al.Epi-genetic regulation of latent Epstein-Barr vi-rus promoters[J].Biochim Riophys Acta，2010，1799（3-4）：228-235.

[3]Gan R，Xie X，He Let al.Gene Analysis ofEpstein-Barr Virus-Associated Lymphomasin Hu-PBUSCID Chimeras[J].Tumori，2010，96（3）：465-472-

[4]Do NV，Tngemar E，Phi PT，et al.A major EB-NAl variant from Asian EBV is-Tarps showsenhanced transcriptional activity comparedto prototype，B958[J].Virus Res，2008，132（1/2）：15-24.

[5]Lu J，Murakami M，Verma SC，et al.Ep-stein-Barr Virus nuclear antigen I（EBNA1）confers resistance to apoptosis in EBV-posi-tive B-lymphoma cells through up-regula-tion of surviving[J].Virology，2011，410（1）：64-75.

[6]Jansson A，Masucci M，Rymo L.Methylationof discrete sites within the enhancer regionregulates the activity of the Epstein-Ban" vi-rus BamHI W promoter in Burkitt lymphomalines[J].Virol，1992，66（1）：62-69.