胡金梅

梔子收載于歷版《中華人民共和國藥典》中，為茜草科植物梔子Gardenia jasminoisesEllis的干燥成熟果實。梔子性寒味苦，具有保肝、抗腦缺血損傷、抗動脈粥樣硬化、降血脂、降血糖、抗炎作用等多種藥理作用[1]。在2015年版《中華人民共和國藥典》中焦梔子的制法描述為：“取梔子，或碾碎，照清炒法（通則0213）用中火炒至表面焦褐色或焦黑色，果皮內表面和種子表面為黃棕色或棕褐色，取出，放涼。”焦梔子含梔子苷不得少于1.0%。本研究參照藥典炮制工藝，選取200 ℃、180 ℃、160 ℃做為炮制火力的參考溫度，炒制時間以梔子炒到顏色表面顏色焦褐色，6分鐘開始計時，分別以6、8、10 min做參考時間，研究得出能量化的炮制工藝。本研究主要為了明確焦梔子的炮制工藝參數，并驗證其止血效果。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters 2695高效液相色譜儀（Waters 2998 DAD檢測器，Waters Empower工作站）；CM-5分光測色計(日本KONICA MINOLTA CM-5)； CPA225D型電子天平（十萬分之一，德國Sartorius公司）；BS224S型電子天平(萬分之一，德國Sartorius公司)；DHG-9240A型電熱恒溫鼓風干燥箱(鞏義市予華儀器有限責任公司)； SB-D220型超聲波清洗器(寧波新芝生物科技股份有限公司)。

1.2 試藥

梔子藥材，購自重慶市藥材市場；梔子苷對照品（批號110749-201115，中國食品藥品檢定研究院）；乙腈、甲醇均為色譜純，購自美國TEDIA公司；其他試劑均為分析純；水為三級水。

2 梔子苷含量測定方法學研究

2.1 色譜條件

色譜柱為Boston Symmetrix ODS-RC18 （4.6×250 mm, 5 μm）；流動相為乙睛-水=15:85；流速：1.0 mL·min-1；柱溫:30 ℃；進樣體積：10 μL，檢測波長238 nm。

圖1 對照品、供試品、空白溶液HPLC圖

2.2 對照品溶液的制備

取梔子苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含梔子苷5.6 mg的對照品溶液，搖勻，0.22 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品粉末(過四號篩)約0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液10 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.4 線性關系的考察

精密吸取上述對照品溶液配制成系列濃度對照品溶液，注入液相色譜儀，測定峰面積，以梔子苷的進樣量（μg）為橫坐標(X)、峰面積積分值為縱坐標(Y)，進行回歸，得回歸方程為Y = 1.6×106 X+15399（R2= 0.9999），結果表明，梔子苷在0.168～3.36 μg范圍內峰面積與含量線性關系良好。

圖2 梔子苷標準曲線

2.5 精密度試驗

精密吸取同一供試品溶液10 μL，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積，結果，梔子苷量的RSD為0.33%，表明儀器具有較好的精密度。

2.6 重復性試驗

取梔子藥材粉末約0.5 g，共6份，按照擬定的方法制備供試品溶液并測定，計算梔子苷的量，結果梔子苷量的RSD為2.01%，表明本法較好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

精密吸取同一供試品溶液10 μL，分別于0 h，2 h，4 h，8 h，12 h，24 h，注入液相色譜儀，記錄峰面積，計算梔子苷的量，結果對照品溶液和供試品溶液在24 h內穩(wěn)定性良好。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的梔子樣品溶液6份，每份0.5 g，精密加入一定量的梔子苷對照品，按供試品制備方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進行測定，記錄梔子苷峰面積，計算回收率和RSD，梔子苷的平均回收率為99.42%，RSD為1.26%，表明該方法較好。

3 焦梔子炮制工藝研究

3.1 梔子炒制工藝的單因素考察

3.1.1 炒制溫度的考察 取凈梔子，烘干，稱取100 g，置熱鍋中，分別用200 ℃、180 ℃、160 ℃炒制6 min，取出，及時攤晾。以梔子苷為評價指標，考察炒制溫度對焦梔子炮制的影響。結果見表1。

表1 含量測定結果

結果表明，炒制溫度為180 ℃時，梔子苷含量較高，因此選定炒制溫度為180 ℃。

3.1.2 炒制時間的考察 取凈梔子，烘干，稱取100g，置180 ℃鍋中，觀其外觀，6分鐘左右有焦斑出現，故分別炒制6、8、10 min，取出，及時攤晾。以梔子苷為評價指標，考察炒制時間對焦梔子炮制的影響。結果見表2。

表2 含量測定結果

可知，炒制時間為6 min時，梔子苷含量較高，隨著時間的增加，梔子苷含量有所降低，故確定炒制時間為6 min。

3.1.3 驗證試驗 為考察其工藝的穩(wěn)定性，取凈梔子，烘干，稱取100 g，置180 ℃鍋中，重復三次，結果見表3。

表3 含量測定結果

結果表明，三次驗證試驗梔子苷含量RSD為1.47%，表明該工藝較穩(wěn)定、重現性較好。

3.2 焦梔子顏色的測量

采用分光測色計，對驗證試驗的三批焦梔子的顏色性狀進行測定，若分別對果皮的內外表面及種子表面分別進行測定，數據多，操作繁瑣，標準不易統(tǒng)一，而且種子的內部顏色也不能直接測定，故考慮將其粉碎，過藥典三號篩，混合均勻，測定色度值，每批樣品取5 g，重復測定5次，取平均值，以均數為最終測定結果，結果見表4。

表4 顏色測定結果

由表2-15可知，三批焦梔子顏色色度值的RSD小于3%，表明色度值數據穩(wěn)定性良好。

4 焦梔子的止血凝血藥效驗證[2,3]

4.1 樣品的制備

取梔子及焦梔子，加水煎煮兩次，每次0.5 h，濾過，合并濾液，濃縮至含生藥1 g/mL，即得。

4.2 分組與給藥

將體重為18-22 g的小鼠，隨機分為空白組，生品組，炮制組三組，每組10只，雌雄各半，每天灌胃給藥0.2 mL/10 g，每天1次，連續(xù)給藥5 d，空白組給予同體積的生理鹽水。

4.3 出血及凝血時間的測定

于第五天給藥1 h后，剪去鼠尾3 mm，從血液流出時開始計時，并于60 s后開始，每隔10 s用濾紙輕輕拭血1次，直至不再流出血為止，小鼠的出血時間即為開始出血至停止出血的時間；血液流出時計時的同時，用毛細管收集血液并平放于桌面上，從收集時計時，每隔30秒折斷毛細管并緩慢拉開，觀察折斷處是否有血凝絲出現，出現血凝絲的時間即為凝血時間。結果見表5。

表5 各組小鼠出血時間與凝血時間比較（x±s，n=10）

結果表明，生品梔子與焦梔子均能縮短小鼠的出血時間和凝血時間。

5 討論

梔子是臨床常用中藥，收載于歷版《中華人民共和國藥典》中，其制法在2015年版《中華人民共和國藥典》中描述為：“取梔子，或碾碎，照清炒法（通則0213）用中火炒至表面焦褐色或焦黑色，果皮內表面和種子表面為黃棕色或棕褐色，取出，放涼?！贝嗣枋隹梢钥闯?，其工藝參數多為感官指標，無具體的量化指標，因而不同的人炮制結果不同，因而對其炮制工藝進行量化是很有必要的。用化學手段對其工藝進行優(yōu)化，結合藥理效果對其驗證，更能體現焦梔子炮制的合理性。

目前很多中藥炮制品的質量標準都描述為“參照藥材”，這樣體現不出來炮制品與生品的差異，因而建議其質量標準的制定需要根據炮制品的有效成分等進行控制。