劉 虹，李素玲，許 晶，王 華

（山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所，山西 太原 030031）

乳牛肝菌屬（Suillus）主要分布于北溫帶地區(qū)[1]，也是中國(guó)北方地區(qū)最常見(jiàn)的牛肝菌代表類群之一[2-3]。已有研究報(bào)告資料顯示，幾乎所有的乳牛肝菌屬物種都是松科（Pinaceae）植物的外生菌根真菌，而且有些物種有著明顯的寄主專一性現(xiàn)象[4]。有些乳牛肝菌屬物種在樹(shù)木外生菌根物種演替中處于先鋒物種位置，在森林形成、生態(tài)平衡以及植樹(shù)造林方面具有重要的價(jià)值。乳牛肝菌屬多數(shù)物種可以食用，有些種是國(guó)際市場(chǎng)上重要的貿(mào)易物種，如點(diǎn)柄乳牛肝菌（Suillus granulatus） 和土黃乳牛肝菌（S.luteus） 等。乳牛肝菌屬物種是山西森林地區(qū)常見(jiàn)的真菌類群，本研究首次采用DNA分子和形態(tài)學(xué)特征相結(jié)合的研究手段，對(duì)山西呂梁山地區(qū)采集的乳牛肝菌屬物種進(jìn)行了分析研究。

1 材料與方法

1.1 采集樣本

調(diào)查采集采用樣線調(diào)查方法，于2017年7月～10月間在呂梁山北部的管涔山、中部的關(guān)帝山和南部的五鹿山進(jìn)行。在進(jìn)行調(diào)查和標(biāo)本采集過(guò)程中，通過(guò)航跡儀記錄采集路線，詳細(xì)觀察并記錄調(diào)查區(qū)域的植被情況，拍攝群落外貌、生境、子實(shí)體特征的數(shù)碼照片，像素不低于600萬(wàn)。記錄乳牛肝菌樣本的主要特征，包括子實(shí)體大小，菌蓋顏色，菌管顏色、結(jié)構(gòu)和密度（個(gè)·mm-2），菌柄形狀、長(zhǎng)度和直徑，有無(wú)菌環(huán)，表面特征，菌肉顏色和變色情況，氣味，味道。每份標(biāo)本均制備2份材料，1份采用蘑菇干燥器烘干，用作憑證標(biāo)本，另外1份采用硅膠干燥，以備后續(xù)分子鑒定使用。樣本分別保存在山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所標(biāo)本館（HSA）和首都師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院。

1.2 標(biāo)本鑒定

對(duì)采集的每份樣本，采用形態(tài)分類結(jié)合分子鑒定的方法進(jìn)行鑒定，同時(shí)結(jié)合下述因素：野外采集拍攝的照片，記錄的宏觀形態(tài)特征，以及在室內(nèi)顯微鏡下觀察的形態(tài)特征，如孢子形狀和大小，擔(dān)子形狀和大小，囊狀體的有無(wú)、形狀和大小以及菌蓋表皮的特征等。ITS分子片段的提取、測(cè)序參照Fan等[5]的方法。所得序列與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)所收錄的序列用BLAST工具進(jìn)行比對(duì)，每個(gè)樣本序列選取比對(duì)到相似度最高的序列。山西呂梁山乳牛肝屬樣本信息表和引證樣本在NCBI上的比對(duì)結(jié)果見(jiàn)表1、表2。

2 結(jié)果分析

本研究共在山西呂梁山林區(qū)采集13份乳牛肝菌屬樣本（表1），提取nrDNA-ITS分子片段13份。將13份nrDNA-ITS分子片段用BLAST工具在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)合形態(tài)學(xué)特征分析，本研究共鑒定出產(chǎn)于山西省呂梁山地區(qū)的乳牛肝菌屬Suillus物種6種，報(bào)告如下。

表1 本研究采集的呂梁山乳牛肝屬樣本信息表Tab.1 The specimens information of Suillus species in Lvliang Mountains used in this study

表2 本研究引證樣本在NCBI上的比對(duì)結(jié)果表Tab.2 The BLAST results of cited specimens of this study in NCBI

2.1 厚環(huán)乳牛肝菌

厚環(huán)乳牛肝菌擔(dān)子果形態(tài)見(jiàn)圖1。

Suillus grevillei(Klotzsch)Singer,Farlowia 2(2)：259(1945).

圖1 厚環(huán)乳牛肝菌的擔(dān)子果Fig.1 Fruitbodies of Suillus greville

異名：

Boletinus grevillei(Klotzsch)Pomerl.,Naturaliste Can.107:303（1980）.

Boletus clintonianus Peck,Ann.Rep.Reg.N.Y.St.Mus.23:128（1870）.Boletus grevillei Klotzsch,Linnaea 7:19（1832）.Suillus clintonianus(Peck)Kuntze,Revis.gen.pl.(Leipzig)3(2):535（1898）.

Suillus grevillei var.clintonianus(Peck)Singer,Lilloa 22:657（1949）.

厚環(huán)乳牛肝菌是本屬最為常見(jiàn)的物種之一，與落葉松（Larix spp.）形成外生菌根而且專一性很強(qiáng)，因此在歐洲也叫落葉松乳牛肝菌（Larch suillus）。本研究采到的 4份樣本 FM043、FM295、FM339、FM341（表1） 在NCBI上全部比對(duì)到Suillus clintonianus名下，然而根據(jù)Index Fungorum（http://www.speciesfungorum.org），Suillus clintonianus是 Suillus grevillei的同物異名。依據(jù)文獻(xiàn)記載，本種可食用，在呂梁山地區(qū)其是秋季華北落葉松林內(nèi)常見(jiàn)物種，個(gè)別年份產(chǎn)量很大。

2.2 亞洲乳牛肝菌

亞洲乳牛肝菌擔(dān)子果形態(tài)見(jiàn)圖2。

圖2 亞洲乳牛肝菌擔(dān)子果Fig.2 Fruitbody of Suillus asiaticus

Suillus asiaticus(Singer)Kretzer&T.D.Bruns,in Kretzer,Li,Szaro&Bruns,Mycologia 88(5)：784 （1996）.

異名：

Boletinus asiaticus Singer,Revue Mycol.,Paris 3(4-5):164（1938）.

亞洲乳牛肝菌（表1中的FM061） 特征明顯，紅色或紫紅色，具纖毛的菌蓋，易被識(shí)別，夏秋季見(jiàn)于落葉松云杉混交林內(nèi)，產(chǎn)量較小，但很常見(jiàn)。

2.3 空柄乳牛肝菌

空柄乳牛肝菌擔(dān)子果形態(tài)見(jiàn)圖3。

圖3 空柄乳牛肝菌的擔(dān)子果Fig.3 Fruitbody of Suillus cavipes

Suillus cavipes(Klotzsch)A.H.Sm.&Thiers,Monogr.North Amer.Species Suillus:30（1964）.

異名：

Boletus cavipes Klotzsch,in Fries&H?k,Boleti,Fungorum generis,illustratio:7（1835）.

Boletinus cavipes(Klotzsch)Kalchbr.,Icon.Sel.Hymenomyc.Hung.(Budapest)25：52（1867）.

空柄乳牛肝菌（表1中的FM160） 的識(shí)別特征是褐色并具纖毛的菌蓋，發(fā)育早期白色內(nèi)菌幕包著黃色菌管層。與亞洲乳牛肝菌一樣夏季見(jiàn)于落葉松云杉混交林內(nèi)，常見(jiàn)，產(chǎn)量較小。

2.4 土黃乳牛肝菌

土黃乳牛肝菌擔(dān)子果形態(tài)見(jiàn)圖4。

圖4 土黃乳牛肝菌的擔(dān)子果Fig.4 Fruitbody of Suillus luteus

Suillus luteus(L.)Roussel,F.Calvados:34(1796).

異名：

Boletus luteus L.,sp.pl.2:1177(1753).

土黃乳牛肝菌是北半球廣泛分布的物種（表1中的FM320），只生長(zhǎng)在松林內(nèi)（Pinus spp.）。與典型的歐洲樣本相比，山西產(chǎn)樣本的菌環(huán)沒(méi)有那么肥大，但DNA分子序列確認(rèn)他們是同一個(gè)物種。產(chǎn)量不均，個(gè)別年份產(chǎn)量較大，是國(guó)際市場(chǎng)的常見(jiàn)貿(mào)易品種，產(chǎn)自山西的土黃乳牛肝菌較易生蟲(chóng)，達(dá)不到出口標(biāo)準(zhǔn)，但在晉中平遙南部的山區(qū)一帶民間有采食傳統(tǒng)，被稱做松蘑菇。

2.5 灰環(huán)乳牛肝菌

灰環(huán)乳牛肝菌擔(dān)子果形態(tài)見(jiàn)圖5。

圖5 灰環(huán)乳牛肝菌的擔(dān)子果Fig.5 Fruitbody of Suillus viscidus

Suillusviscidus(L.) Roussel,F.Calvados:34(1796).

異名：

Boletus laricinus Berk.,in Smith,Engl.Fl.,Fungi(Edn 2) (London)5(2):248（1836）.

Boletus viscidus L.,sp.pl.2:1177 （1753）.

Fuscoboletinusaeruginascens(Secr.ex Snell)Pomerl.&A.H.Sm.,Brittonia 14:167（1962）.

Fuscoboletinus viscidus(L.)Grund&K.A.Harrison,Biblthca Mycol.47:134 （1976）.

Suillus aeruginascens Secr.ex Snell,in Slipp&Snell,Lloydia 7(1):25 （1944）.

Suillus laricinus(Berk.)Kuntze,Revis.gen.pl.(Leipzig)3(2):535 （1898）.

Suillus viscidusf.albus(Kühner)Klofac,?st.Z.Pilzk.22:217 （2013）.

Suillus viscidus f.brunneolus(Kühner)Armada,Bull.trimest.Féd.Mycol.Dauphiné-Savoie 219:35（2015）.

灰環(huán)乳牛肝菌是形態(tài)變化較大，分類較為混亂的物種。本研究采集的5份樣本FM101、FM102、FM110、FM113、FM348，在NCBI比對(duì)中出現(xiàn)了多個(gè)名字，如Suillus viscidus、Suillus aeruginascens以及Suillus bresadolae等。依據(jù)Index Fungorum，前兩個(gè)名稱為同物異名，第3個(gè)名稱Suillus bresadolae是罕見(jiàn)的歐洲物種，與Suillus viscidus形態(tài)特征相似，是否為同一個(gè)物種或者NCBI上這條序列是否正確目前無(wú)法確定。因此，結(jié)合形態(tài)學(xué)特征分析，本文作者認(rèn)為目前將山西呂梁山地區(qū)的這個(gè)物種定為灰環(huán)乳牛肝菌Suillus viscidus(L.)Roussel較為合適?；噎h(huán)乳牛肝菌與落葉松形成外生菌根，在山西每年夏秋季只在華北落葉松林內(nèi)地上發(fā)生，常見(jiàn)，但產(chǎn)量較小。

2.6 褐乳牛肝菌

褐乳牛肝菌擔(dān)子果形態(tài)見(jiàn)圖6。

圖6 褐乳牛肝菌擔(dān)子果Fig.6 Friutbodies of Suillus collinitus

Suillus collinitus(Fr.)Kuntze,Revis.gen.pl.(Leipzig)3(2):536（1898）.

異名：

Boletus collinitusFr.,Epicr.syst.mycol.(Upsaliae):410,1838(1836～1838).

Boletus granulatus var.roseobasis J.Blum,Bull.trimest.Soc.mycol.Fr.81:485（1965）.

Suillus roseobasis(J.Blum)Gr?ger,Mykol.MittBl.,Halle 11:9（1967）.

褐乳牛肝菌（表1中的FM306） 只生長(zhǎng)在松林內(nèi)，與松樹(shù)（Pinusspp.）形成菌根。本種和點(diǎn)柄乳牛肝菌Suillus granulatus在形態(tài)上很相似，主要區(qū)別在于前者菌蓋表面常有明暗相間的放射紋理，菌柄較短，此外據(jù)歐洲文獻(xiàn)記載其菌柄基部常有粉紅色菌絲；而后者菌蓋顏色均勻，菌柄較長(zhǎng)，且基部菌絲為白色。此次所采樣本菌柄基部未發(fā)現(xiàn)粉紅色的菌絲，但DNA分子分析表明其為褐乳牛肝菌。

3 討論

劉波等[6]在書(shū)中記載了乳牛肝菌屬8個(gè)種，即空柄乳牛肝菌Suillus cavipes、松乳牛肝菌S.pictus(Peck)A.H.Smith&Thiers、褐環(huán)乳牛肝菌（土黃乳牛肝菌） S.luteus、灰環(huán)乳牛肝菌S.aeruginascens（S.viscidus）、厚環(huán)乳牛肝菌S.grevillei、點(diǎn)柄乳牛肝菌S.granulatus、亞褐環(huán)乳牛肝菌S.subluteus(Peck)Snell和亞黃乳牛肝菌S.subaureus(Peck)Snell，這些物種全部在呂梁山地區(qū)有分布記錄。其中，空柄乳牛肝菌、褐環(huán)乳牛肝菌（土黃乳牛肝菌）、灰環(huán)乳牛肝菌和厚環(huán)乳牛肝菌等4個(gè)物種被本研究的DNA分子數(shù)據(jù)分析所支持。其余4個(gè)物種中，書(shū)中松乳牛肝菌的標(biāo)本圖片和文字描述顯示其菌蓋為酒紅色，帶有明顯的纖毛鱗片，這是典型的亞洲乳牛肝菌的特征，因此我們推測(cè)書(shū)中收錄的山西呂梁山地區(qū)的松乳牛肝菌S.pictus，可能就是亞洲乳牛肝菌S.asiaticus。本次研究雖未采到點(diǎn)柄乳牛肝菌樣本，但分布于油松林內(nèi)的形態(tài)相似物種經(jīng)DNA分子鑒定為褐乳牛肝菌S.collinitus，所以真正的點(diǎn)柄乳牛肝菌在呂梁山地區(qū)是否存在尚需進(jìn)一步研究。另外2個(gè)物種亞褐環(huán)乳牛肝菌和亞黃乳牛肝菌本研究未發(fā)現(xiàn)。

為方便形態(tài)學(xué)鑒別，現(xiàn)將山西呂梁山地區(qū)發(fā)現(xiàn)的6種乳牛肝屬物種檢索表編制如下：

山西呂梁山地區(qū)乳牛肝菌屬分種檢索表