余麗萍 向紅梅

【摘 要】目的：對免疫檢測結(jié)果的灰區(qū)判讀意義進行研究。方法：選取我院2014年1月至2017年1月采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測的126例乙肝核心抗體（Anti-HBc）樣本，其檢測結(jié)果均為邊緣值，分別采用西門子電化學(xué)發(fā)光法與強生酶免疫化學(xué)發(fā)光法對樣本進行復(fù)檢分析，以對免疫檢測的灰區(qū)判讀意義進行研究。結(jié)果：酶聯(lián)免疫吸附法檢測的126例灰區(qū)樣本，采用另外兩種方法復(fù)檢顯示，82例樣本結(jié)果得到確認(rèn)證實，并且在對復(fù)檢結(jié)果存在差異的樣本采用乙肝PCR或既往乙肝標(biāo)志物檢測分析顯示，復(fù)檢陽性與結(jié)果不確定樣本均存在既往感染情況，而復(fù)檢陰性樣本無既往感染發(fā)生。結(jié)論：免疫檢測受敏感性與特異性影響，存在灰區(qū)結(jié)果容易造成誤檢或漏檢發(fā)生，應(yīng)引起重視。

【關(guān)鍵詞】酶聯(lián)免疫吸；附法 檢測； 灰區(qū)； 判讀意義

【中圖分類號】R392.3 【文獻標(biāo)識碼】B 【文章編號】2095-6851（2018）09--02

乙肝病毒感染檢測是免疫檢測的重要內(nèi)容，其中，乙肝表面抗原作為乙肝病毒感染的特異性標(biāo)志，在乙肝病毒感染判斷中存在一定的局限性，比如，對表面抗原陰性的乙肝病毒感染者，就需要通過乙肝核心抗體的檢測來實現(xiàn)其病毒感染情況判斷，它也是進行乙肝病毒感染診斷的唯一性指標(biāo)，對恢復(fù)期以及乙肝病毒攜帶者也可以通過該指標(biāo)檢測分析進行判斷[1]。臨床中，對單獨核心抗體陽性的情況，也存在病毒傳染性，由此可見，乙肝核心抗體檢測及其結(jié)果準(zhǔn)確性在乙肝診斷的重要作用和意義。下文以我院2014年1月至2017年1月采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測的126例乙肝核心抗體（Anti-HBc）結(jié)果處于邊緣值的樣本為研究對象，對免疫監(jiān)測灰區(qū)判讀意義進行研究，以供參考。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取我院2014年1月至2017年1月采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測的126例乙肝核心抗體（Anti-HBc）結(jié)果處于邊緣值樣本為研究對象，S/CO標(biāo)準(zhǔn)為0.50-1.50，均為在我院就診并進行乙肝標(biāo)志物篩查患者，包含男性患者69例、女性患者57例，患者年齡在14至67歲不等，平均為（42.4±6.8）歲。

1.2 方法 對126例采用酶聯(lián)免疫吸附法（檢測儀器為美國寶特Bio-TekELX800全自動酶免分析儀，檢測試劑從上海榮盛公司購買）檢測顯示抗Anti-HBc結(jié)果處于邊緣值的樣本血清進行分離后，在-20℃環(huán)境中進行冰凍保存，以進行備用。根據(jù)上述Anti-HBc的免疫檢測結(jié)果，分別采用西門子電化學(xué)發(fā)光法（檢測儀器為西門子XP電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，檢測試劑為配套試劑）與強生酶免疫化學(xué)發(fā)光法（檢測儀器為強生5600化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，試劑為配套試劑）對樣本進行復(fù)檢，對檢測結(jié)果分析中，將兩種復(fù)檢方式檢測結(jié)果相反，或者是至少一種復(fù)檢方法的檢測結(jié)果位于灰區(qū)的情況，判斷為不確定樣本，然后對復(fù)檢不確定以及與復(fù)檢結(jié)果相反的樣本，采用乙肝PCR（檢測儀器為ABI5700基因分析儀，檢測試劑為中山大學(xué)達安基因股份有限公司提供）或乙肝標(biāo)志物檢測進行再次確認(rèn)分析。

2 結(jié)果

酶聯(lián)免疫吸附法檢測的126例灰區(qū)樣本，采用另外兩種方法復(fù)檢顯示，82例樣本結(jié)果得到確認(rèn)證實，如下表1所示，即為各檢測方法對樣本的檢測結(jié)果對比。

此外，在對復(fù)檢結(jié)果存在差異的樣本采用乙肝PCR或既往乙肝標(biāo)志物檢測分析顯示，西門子電化學(xué)發(fā)光法與強生酶免疫化學(xué)發(fā)光法復(fù)檢陽性的3例患者（酶聯(lián)免疫吸附法檢測為陰性），均存在既往乙肝感染病史，且酶聯(lián)免疫吸附檢測結(jié)果最高為1.37；此外，14例西門子電化學(xué)發(fā)光法與強生酶免疫化學(xué)發(fā)光法復(fù)檢陰性樣本（酶聯(lián)免疫吸附檢測為陽性），經(jīng)PCR檢測確認(rèn)為陰性，無既往感染情況，其中，酶聯(lián)免疫吸附檢測最低值為0.56。另外，對27例不確定樣本經(jīng)PCR檢查顯示為陰性，其中有6例存在既往感染情況，酶聯(lián)免疫吸附檢測顯示2例為陰性、4例結(jié)果處于灰區(qū)，結(jié)果范圍為0.92-1.14，而西門子電化學(xué)發(fā)光法與強生酶免疫化學(xué)發(fā)光法復(fù)查顯示結(jié)果為陽性或灰區(qū)，如下表2所示。

3 討論

臨床中，在進行乙肝病毒檢測判斷中，對乙肝核心抗體檢測主要檢測方式為酶聯(lián)免疫吸附法，在對檢測樣本采用酶聯(lián)免疫吸附法進行檢測判斷中，其檢測結(jié)果主要通過樣本檢測的吸光光度值與臨界值進行計算得出[2]，其中，樣本檢測結(jié)果的陰性和陽性判斷，是根據(jù)其樣本檢測吸光光度值與臨界值比值進行判斷，其比值≥1時，表示結(jié)果為陰性，反之則為陽性，這一檢測結(jié)果的計算與判斷是由酶聯(lián)免疫吸附檢測儀器自動計算與判斷獲取。值得注意的是，酶聯(lián)免疫吸附法在進行樣本檢測分析中，由于會受到人員操作以及檢測環(huán)境、板間差異或孔間差異等因素影響，再加上對檢測儀器的校驗標(biāo)準(zhǔn)品較為缺乏與儀器自動判斷結(jié)果等情況影響，導(dǎo)致其在樣本檢測與判斷中，對同一個樣本重復(fù)檢測，其檢測數(shù)值也會出現(xiàn)一定的浮動變化，一旦檢測樣本的吸光光度值與臨界值相近，就會導(dǎo)致重復(fù)檢測過程中吸光光度值的波動變化造成檢驗結(jié)果判斷不一致情況發(fā)生[3]。針對這種情況，在實驗室檢驗環(huán)節(jié)，針對免疫檢測數(shù)值浮動變化及影響，是否針對臨界值附件樣本進行灰區(qū)設(shè)定，以解決檢測結(jié)果判定存在的問題，成為當(dāng)前實驗室檢驗與判斷研究關(guān)注的重點。

上文中，在對我院收治的126例乙肝核心抗體酶聯(lián)免疫吸附法檢測結(jié)果處于邊緣值樣本，通過不同方法進行復(fù)檢分析驗證顯示，82例樣本結(jié)果得到確認(rèn)證實，并且在對復(fù)檢結(jié)果存在差異的樣本采用乙肝PCR或既往乙肝標(biāo)志物檢測分析顯示，復(fù)檢陽性與結(jié)果不確定樣本均存在既往感染情況，而復(fù)檢陰性樣本無既往感染發(fā)生，其中，酶免檢驗樣本結(jié)果最小為0.56、最大為1.37。這一結(jié)果表明，酶免檢測在乙肝核心抗體判斷中，檢測范圍在0.56-1.37之間仍然會存在誤檢或漏檢情況，在不設(shè)定邊緣值的情況下，會導(dǎo)致3例樣本被漏檢、14例誤檢發(fā)生，與患者既往感染情況之間存在一定關(guān)聯(lián)。

總之，免疫檢測受敏感性與特異性影響，存在灰區(qū)結(jié)果容易造成誤檢或漏檢發(fā)生，應(yīng)引起重視。

參考文獻

梁振昌.乙肝HBsAg酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測信號灰區(qū)與血清免疫逃逸變異HBsAg的關(guān)系[J].實用臨床醫(yī)藥雜志，2017，21（07）：179-180.

李媛，譚艷，韓曉芳.ELISA檢測血清HBsAg、抗-HCV、抗-TP、抗-HIV灰區(qū)設(shè)定的探討[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2017，38（06）：810-812.

高景波.HIV酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測設(shè)置灰區(qū)的必要性[J].中國艾滋病性病，2016，22（12）：1009-1010.