王天學，張敏娟，魏文芝，陳學艷，袁 璐，張耀元，段廣佩

(1.青海省食品檢驗檢測院，西寧 810016；2.青海省藥品檢驗檢測院/青海省中藏藥現(xiàn)代化研究重點實驗室，西寧 810016)

鹽酸嗎啡片為國家特殊管理的麻醉藥品，屬選擇性阿片受體激動劑，是強效鎮(zhèn)痛藥，適用于其他鎮(zhèn)痛藥無效的急性劇痛，如嚴重創(chuàng)傷、戰(zhàn)傷、燒傷和癌癥晚期等疼痛，臨床應用廣泛[1-5]，國內(nèi)現(xiàn)有2家生產(chǎn)企業(yè)。鹽酸嗎啡片現(xiàn)行標準收載于《中國藥典》2015年版二部[6]，其溶出度方法為溶出度與釋放度測定法(《中國藥典》2015年版四部通則0931 第三法，即小杯法)[7]，該方法用紫外-可見分光光度法，將第二法(槳法)的溶出介質(zhì)體積由900 mL(或1 000 mL)縮減為100～250 mL，同時相應縮小攪拌槳(槳葉直徑由74 mm縮小為45 mm)從而實現(xiàn)溶出度測定。兩者的轉(zhuǎn)換本身缺乏嚴謹?shù)目茖W依據(jù)[8]，且為我國特有的溶出度檢查方法，通用性不足；采用紫外-可見分光光度法進行測定，靈敏度不高，專屬性不強。溶出度實驗是評價口服固體制劑質(zhì)量的一種重要手段，能更加全面評價藥品生產(chǎn)工藝，完善質(zhì)量標準[9]，以保障用藥安全有效，因此對鹽酸嗎啡片溶出度方法進行優(yōu)化十分必要。參考國外藥典及相關文獻[10-19]，參照《中國藥典》2015年版四部中溶出度與釋放度測定方法的要求，建立通用性較好的槳法為鹽酸嗎啡片溶出度實驗方法，并采用專屬性較強、靈敏度較高的HPLC-DAD方法測定嗎啡溶出度。

1 儀器與材料

1.1儀器 RCZ-8MD型智能溶出實驗儀(天津天大天發(fā)科技有限公司)；真空脫氣機(上海富科思分析儀器有限公司)；e2695-2998高效液相色譜儀，包括Empower3軟件工作站，二極管陣列檢測器(美國Waters公司)；CP 225D電子天平(德國Sartorius公司)。

1.2試藥 鹽酸嗎啡片(生產(chǎn)廠家A，規(guī)格：5 mg，批號：20141031，20140811，20140521，20140217和20150324；生產(chǎn)廠家B，規(guī)格：10 mg，批號：1150403，1150101，1140903，1140905和1150606)。嗎啡對照品(批號171201-201324，質(zhì)量分數(shù)為99.1%)，由中國食品藥品檢定研究院提供；甲醇為色譜純(德國Merck公司)；磷酸氫二鉀為分析純(天津百世化工有限公司)；水為純化水。

2 方法與結果

2.1色譜條件 色譜柱：Waters XBrige C18色譜柱(250 mm×0.46 mm，5 μm)；流動相：甲醇-0.05 mol·L-1磷酸氫二鉀溶液(10∶90)；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：235 nm；柱溫：35 ℃；進樣量：20 μL。理論塔板數(shù)按照嗎啡峰計算為7 800。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液 精密稱取嗎啡對照品11.25 mg，置于100 mL量瓶中，加流動相振搖使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為嗎啡對照品溶液。

2.2.2供試品溶液 取樣品適量，采用《中國藥典》2015年版四部溶出度與釋放度測定第二法(槳法)，以900 mL水為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50 r·min-1，依法操作，30 min時，取溶出液5 mL，用0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3系統(tǒng)適用性實驗 取2.2項下制備的對照品溶液、供試品溶液和溶出介質(zhì)(水)各20 μL，按照2.1項下色譜條件進行測定，記錄色譜圖，見圖1。由圖1可知，在該色譜條件下，理論塔板數(shù)以嗎啡峰計≥7 000，保留時間為4.050 min。結果表明，其他成分對測定無干擾。

2.4線性關系考察 精密量取2.2.1項下制備的對照品溶液0.1，1.0，5.0，10.0和20.0 mL，置于100 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得系列對照品溶液。精密量取上述對照品溶液20 μL，按照2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以嗎啡質(zhì)量濃度為橫坐標(x)、峰面積為縱坐標(y)進行線性回歸，得嗎啡回歸方程為y=1 117.1x+18 839.5(r=1.000 0)。結果表明，嗎啡質(zhì)量濃度線性范圍為0.111 5～111.487 5 μg·mL-1。

2.5精密度實驗 取2.2.1項下制備的對照品溶液適量，按照2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果嗎啡峰面積的RSD值為0.1%(n=6)，結果表明，儀器精密度良好。

2.6穩(wěn)定性實驗 取2.2.2項下制備的供試品溶液適量，在室溫下放置0，4，8，12和24 h，按照2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果嗎啡峰面積的RSD值為0.4%(n=5)，結果表明，供試品溶液在室溫放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7重復性實驗 取樣品(批號1150403)適量，按照2.2.2項下方法制備供試品溶液，按照2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果表明，嗎啡峰面積的RSD值為1.8%(n=6)，重復性良好。

圖1HPLC圖

A.嗎啡對照品；B.供試品；C.溶出介質(zhì)(水)。

Fig.1 HPLC chromatograms

A.reference substance of morphine；B.test sample；C.water.

2.8加樣回收率實驗 取樣品(批號1150403)共9份，分別置于100 mL量瓶中，加流動相使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取續(xù)濾液2.5 mL，置于50 mL量瓶中，加入低、中、高質(zhì)量濃度的嗎啡對照品溶液，加流動相稀釋至刻度，搖勻，按照2.1項下的色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算加樣回收率，結果見表1。

2.9溶出介質(zhì)的選擇 取2個廠家的樣品適量，按照《中國藥典》2015年版四部通則0931第二法(槳法)，分別以水、0.1 mol·L-1鹽酸溶液、pH值為4.0醋酸鹽緩沖溶液和pH值為6.8磷酸鹽緩沖溶液作為溶出介質(zhì)，體積為900 mL，轉(zhuǎn)速為50 r·min-1，于5，10，20，30，45和60 min取樣，按照2.1項下色譜條件進樣測定，考察不同廠家樣品在4種溶出介質(zhì)中的累積溶出曲線，見圖2和圖3。

由圖2和圖3可知，樣品在4種介質(zhì)中的溶出行為均相似。查閱國外藥典(日本藥局方JP16)中“鹽酸嗎啡片”溶出度測定項下，其溶出介質(zhì)為水[20]，現(xiàn)行《中國藥典》2015年版二部中，溶出介質(zhì)亦為水，因此選擇水為溶出介質(zhì)。

表1加樣回收率實驗結果

Tab.1 Results of recovery tests

取樣量/g樣品含量/mg加入量/mg測得量/mg加樣回收率/%平均加樣回收率/%RSD/%0.080 040.247 70.243 80.493 8100.96100.10.90.080 270.248 40.243 80.489 899.010.080 710.249 80.243 80.492 499.530.079 960.247 40.325 00.574 4100.590.079 540.246 10.325 00.576 1101.500.080 270.248 40.325 00.572 299.610.079 970.247 50.406 30.656 0100.540.080 200.247 50.406 30.648 798.750.079 250.245 20.406 30.652 6100.25

圖2樣品(5mg)在4種介質(zhì)中的溶出曲線

Fig.2 Dissolution curves of sample (5 mg) in 4 kinds of dissolution media

圖3樣品(10mg)在4種介質(zhì)中的溶出曲線

Fig.3 Dissolution curves of sample (10 mg) in 4 kinds of dissolution media

2.10轉(zhuǎn)速的確定 取樣品(批號1150403和20150324)，以水為溶出介質(zhì)，溶出介質(zhì)體積為900 mL，轉(zhuǎn)速分別為50和75 r·min-1，于5，10，20，30，45和60 min取樣，按照2.1項下色譜條件進樣測定，考察樣品在不同轉(zhuǎn)速和時間點的平均累積溶出度，結果見表2。由表2可知，樣品在轉(zhuǎn)速為50 r·min-1時即可達到較理想的平均累積溶出度，因此選擇50 r·min-1為本實驗的轉(zhuǎn)速。

2.11取樣時間的確定 取樣品(批號1150403和20150324)適量，各6份，以水為溶出介質(zhì)，溶出介質(zhì)體積為900 mL，轉(zhuǎn)速為50 r·min-1，于5，10，20，30，45和60 min取樣，按照2.1項下色譜條件進樣測定，考察樣品在不同時間點的平均累積溶出度，結果見圖4。由圖4可知，樣品在30 min時溶出曲線達到平臺期。

表2A、B廠家樣品在不同轉(zhuǎn)速及不同取樣時間點的平均累積溶出度

Tab.2 Average accumulative dissolution of samples from manufactures A and B at different rotation speeds and different times

批號時間/min平均累積溶出度/%轉(zhuǎn)速/50 r·min-1轉(zhuǎn)速/75 r·min-111504035605910929320969430999745959860969720150324595941098992099100309910045100101609999

圖4樣品(5mg)在不同時間點的溶出曲線(n=6)

Fig.4 Dissolution curves of sample (5 mg) at different time points (n=6)

2.12濾膜吸附實驗 取2.2.1項下濾過前和濾過后的對照品溶液適量，經(jīng)0.45 μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液1，2，3，5和6 mL，按照2.1項下的色譜條件進樣測定。結果0.45 μm微孔濾膜對嗎啡的吸附量小于2.0%(n=5)，符合規(guī)定[21]。

2.13樣品溶出度測定 取10批樣品各適量，按照2.2.2項下方法制備供試品溶液，再按照2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算嗎啡的溶出度，結果見表3。

表3樣品溶出度實驗結果

Tab 3 Results of dissolution determination of samples

(n=6)

3 討論

將10批次樣品應用原標準檢測方法與本實驗方法測得溶出度及RSD值結果進行比較，結果見表4。由表4可知，原方法測得溶出度平均值、溶出度RSD值較本實驗方法偏高，本實驗方法通用性更佳、檢測靈敏度更高、專屬性更強；按照生產(chǎn)企業(yè)分析，A廠家溶出度結果RSD值較B廠家略高，說明A廠家樣品批間差異、溶出度離散性較B廠家略大，提示A廠家應進一步優(yōu)化生產(chǎn)工藝，以提高批間一致性，降低產(chǎn)品質(zhì)量風險。

表42種方法測得溶出度平均值與RSD結果比較

Tab 4 The comparison of the average dissolution and RSD results determined by the 2 methods

(n=6)

綜上所述，改進后的鹽酸嗎啡片溶出度測定方法提高了方法靈敏度、專屬性、準確性和通用性，適用于鹽酸嗎啡片的溶出度測定。