袁惠霞 歐國(guó)燈 劉瀟瀟

1.廣州市荔灣區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，廣東廣州 510140；2.廣東省藥品檢驗(yàn)所，廣東廣州 510180

香砂六君丸來源于《太平惠民和劑局方》，由木香、砂仁、黨參、炒白術(shù)、茯苓等10味藥組成，具有益氣健脾、和胃的功效，臨床上用于脾虛氣滯、消化不良、噯氣食少、脘腹脹滿、大便溏泄等癥[1-4]。本品為全生粉入藥制劑，因此，原料藥材的質(zhì)量和安全直接影響到成品的療效和用藥安全。砂仁為方中佐藥，奏以健脾和胃，理氣散寒之效。揮發(fā)油成分是砂仁重要的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，其中乙酸龍腦酯為砂仁揮發(fā)油中主要成分[5-15]。本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《中國(guó)藥典》2010年版一部，目前暫未對(duì)砂仁進(jìn)行有效的控制[1]，亦未見文獻(xiàn)報(bào)道香砂六君丸中砂仁的檢測(cè)。本研究建立了氣相色譜法測(cè)定香砂六君丸中乙酸龍腦酯，并對(duì)收集到的23家生產(chǎn)企業(yè)共23批樣品（濃縮丸8批，水丸15批）進(jìn)行檢測(cè)，為該品種砂仁的質(zhì)量控制提供參考。

1 儀器與試藥

Agilent 6890N氣相色譜儀系統(tǒng)、FID檢測(cè)器；Sartorius CP224S、CP225D 電 子 天 平； Elmasionic 300H超聲波清洗器（功率350W，頻率37kHz）。試劑為分析純。乙酸龍腦酯對(duì)照品（批號(hào)為110759-200303），購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。收集來自不同生產(chǎn)企業(yè)樣品23批。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

以彈性石英毛細(xì)管柱Agilent DB-1（柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.25mm，膜厚度0.25μm）為色譜柱；載氣為高純氮?dú)?；柱?00℃；進(jìn)樣口溫度230℃，不分流進(jìn)樣；火焰離子化檢測(cè)器（FID），檢測(cè)器溫度250℃；進(jìn)樣量1μL。

2.2 對(duì)照品溶液的配制

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 精密稱取乙酸龍腦酯對(duì)照品0.12562g，置25mL量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為乙酸龍腦酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（即每1mL中含乙酸龍腦酯5.0248mg）。

2.2.2 混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液 精密量取乙酸龍腦酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量，用無水乙醇逐級(jí)稀釋，配制成含乙酸龍腦酯分別為 0.5025、0.1005、0.0502、0.0201、0.0100mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取本品適量，研細(xì)，水丸取約12g，濃縮丸取約5g（相當(dāng)于含砂仁1g），精密稱定，精密加入無水乙醇25mL，稱定重量，超聲處理（功率350W，頻率37kHz）30分鐘，并時(shí)時(shí)振搖，使樣品充分溶散，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。另按《中國(guó)藥典》收載的本品處方，取除砂仁外其余7味藥材，按制法配制不含砂仁的陰性樣品，同法制備陰性樣品溶液。

2.4 專屬性

分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各1μL，注入氣相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析。在此色譜條件下，陰性樣品無干擾，表明該法專屬性良好，見圖1。

圖1 乙酸龍腦酯對(duì)照品（A）、香砂六君丸樣品（B）和陰性樣品（C）的氣相色譜圖

2.5 線性關(guān)系考察

取“2.2.2”項(xiàng)下乙酸龍腦酯標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以對(duì)照品濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)X，測(cè)得的峰面積為縱坐標(biāo)Y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程y=7325x-2.661（r=1.0000）。結(jié)果表明，乙酸龍腦酯在0.0100～1.0050mg/mL的濃度范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度和穩(wěn)定性

取標(biāo)準(zhǔn)曲線上乙酸龍腦酯對(duì)照品溶液（0.0201 mg/mL），連續(xù)進(jìn)樣6 次，計(jì)算對(duì)照品峰面積的RSD為 1.5%，表明儀器精密度良好；分別在 0、2、4、6、8、12、24小時(shí)內(nèi)進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算對(duì)照品峰面積的RSD為1.3%，表明乙酸龍腦酯在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 檢出限和定量限

精密量取一系列不同濃度的乙酸龍腦酯對(duì)照品溶液各1μl注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，以儀器信噪比3∶1時(shí)的乙酸龍腦酯濃度3.0μg/mL作為儀器檢出限。以儀器信噪比10∶1時(shí)的乙酸龍腦酯濃度10.0μg/mL作為定量限。根據(jù)濃縮丸和水丸的取樣量分別為5g和10g，按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液制備方法計(jì)算香砂六君丸濃縮丸和水丸樣品的方法檢出限分別為0.015mg/g和0.006mg/g，方法定量限分別為0.05mg/g和0.02mg/g。

2.8 重復(fù)性和回收率實(shí)驗(yàn)

分別取同一批水丸和濃縮丸（水丸：批號(hào)為110807；濃縮丸：批號(hào)為1202171，兩批樣品中均未檢出乙酸龍腦酯）各6份，水丸每份取12g，濃縮丸每份取5g，精密稱定，分別精密加入乙酸龍腦酯對(duì)照品溶液（0.0502mg/mL）25mL，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算樣品中乙酸龍腦酯的回收率，結(jié)果水丸和濃縮丸的平均回收率分別為98.1%和99.2%，RSD分別為1.1%和1.2%，見表1。因樣品中乙酸龍腦酯含量低于檢出限，故方法重復(fù)性由回收率RSD值表示，見表1。結(jié)果表明該法準(zhǔn)確性和重復(fù)性均良好。

2.9 樣品測(cè)定

取23個(gè)生產(chǎn)廠家的香砂六君丸樣品，每個(gè)廠家1批，共23批（濃縮丸8批，水丸15批），分別按“2.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定樣品中乙酸龍腦酯含量，結(jié)果見表2。

3 討論

在樣品前處理的預(yù)試驗(yàn)中，考察了揮發(fā)油提取法、超聲提取法及浸泡過夜提取法等幾種提取方法，結(jié)果以超聲提取法效果最佳。本方法操作簡(jiǎn)便，測(cè)定準(zhǔn)確，同時(shí)可以消除雜質(zhì)成分的干擾。

《中國(guó)藥典》2015年版一部“砂仁”項(xiàng)下規(guī)定[9]，乙酸龍腦酯含量不得少于0.90%。香砂六君丸中砂仁為原粉入藥，根據(jù)處方量，香砂六君丸中乙酸龍腦酯理論含量應(yīng)不低于0.8mg/g?？紤]揮發(fā)性成分不穩(wěn)定和大生產(chǎn)等因素，乙酸龍腦酯的轉(zhuǎn)移率按不低于50%計(jì)算，擬定香砂六君丸中乙酸龍腦酯含量不得少于0.4mg/g。通過對(duì)不同企業(yè)樣品的測(cè)定，結(jié)果23批樣品中有20批未檢出乙酸龍腦酯或低于定量限，占總批數(shù)的87.0%，而能檢出乙酸龍腦酯的樣品含量低且差異大。分析其原因可能與藥材的來源與企業(yè)生產(chǎn)工藝差異較大引起。因此，有必要在香砂六君丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中制定砂仁的含量測(cè)定項(xiàng)，從而對(duì)砂仁的質(zhì)量及藥品的有效性進(jìn)行評(píng)價(jià)。本研究所建立的砂仁含量測(cè)定方法可操作性、可控性較強(qiáng)，為香砂六君丸中砂仁的質(zhì)量控制提供參考。

表1 回收率和重復(fù)性考察結(jié)果

表2 樣品測(cè)定結(jié)果