高欣妍，王海英*，劉志明

(1.東北林業(yè)大學(xué) 林學(xué)院，黑龍江 哈爾濱150040；2.東北林業(yè)大學(xué) 材料科學(xué)與工程學(xué)院，黑龍江 哈爾濱150040)

金銀忍冬[Loniceramaackii(Rupr.) Maxim.]，又名金銀木，為忍冬科(Caprifoliaceae)忍冬屬落葉灌木；高6 m，葉紙質(zhì)；花冠先白色，后變黃色；果實(shí)為暗紅色圓形漿果，越冬不落；花期5—6月，果熟期8—10月[1-2]。忍冬(L.japonicaThunb.)干燥花蕾，藥材商品名稱金銀花[3-5]。金銀忍冬與忍冬為同屬植物，有關(guān)金銀忍冬花蕾、果實(shí)化學(xué)成分研究較多，對(duì)其揮發(fā)性成分研究較少。金銀忍冬果實(shí)越冬不落，具有潛在的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。蘇慧[6]研究結(jié)果表明從金銀忍冬果實(shí)中提取的環(huán)烯醚萜類總苷具有良好的保肝、降糖活性。袁升潔[7]研究結(jié)果表明金銀忍冬果實(shí)提取物中含有開(kāi)環(huán)馬錢素二甲基乙縮醛(secologanin dimethylacetal)、開(kāi)環(huán)馬錢素(secologanin)、7S-O-甲基莫諾苷(7S-O-methylmorroniside)、馬錢素(loganin)、開(kāi)環(huán)馬錢素酸(secologanin acid)、馬錢素酸(loganic acid)、6’-O-β-D-呋喃芹糖基獐牙菜苷(6’-O-β-apiofuranosyl sweroside)。柴多武[8]研究結(jié)果表明金銀忍冬果實(shí)提取物中含有齊墩果酸，具有抗腫瘤活性。王玉莉等[9]將金銀忍冬果實(shí)提取物經(jīng)柱層析、重結(jié)晶等，鑒定了多種皂苷類化合物，分別為烏蘇醇、熊果酸乙酯、異常春藤皂苷元、常春藤皂苷元等。王廣樹(shù)等[10]進(jìn)行了金銀忍冬果實(shí)中化學(xué)成分的研究。青梅等[11]采用超聲技術(shù)提取金銀忍冬果實(shí)中的綠原酸。綠原酸具有較強(qiáng)的抗菌、抗病毒作用，是被學(xué)者們廣泛關(guān)注的藥理成分。姬曉靈等[12]研究了寧夏生長(zhǎng)的金銀忍冬果實(shí)中揮發(fā)性成分。李金英等[13]研究了2種忍冬果實(shí)揮發(fā)物質(zhì)組成。金銀忍冬果實(shí)具有藥理活性的化合物主要有黃酮類化合物、有機(jī)酸類化合物、三萜皂苷類化合物、環(huán)烯醚萜類化合物以及揮發(fā)油等。本實(shí)驗(yàn)采用索氏提取法，正己烷為提取溶劑，結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)技術(shù)進(jìn)行金銀忍冬鮮果實(shí)提取物的成分分析，為金銀忍冬鮮果實(shí)提取物在藥用、與木醋液調(diào)配抑菌制劑的開(kāi)發(fā)利用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑和儀器

采集植物經(jīng)鑒定為忍冬科(Caprifoliaceae)忍冬屬金銀忍冬[Loniceramaackii(Rupr.) Maxim.]。金銀忍冬果實(shí)于2015年10月采自東北林業(yè)大學(xué)校園。

提取溶劑選擇提取植物天然產(chǎn)物常用溶劑正己烷，來(lái)源于天津市東麗區(qū)天大化學(xué)試劑廠，為二級(jí)品分析純(AR)。色譜分析試劑為常用試劑甲醇，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，色譜純。

索氏提取裝置，定制；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(RE-2000A型)，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(7890A-7000B型)，美國(guó)Agilent公司。

1.2 金銀忍冬鮮果實(shí)提取物的制備

采用索氏提取裝置提取金銀忍冬鮮果實(shí)，溶劑為正己烷。稱取金銀忍冬鮮果實(shí)樣品30 g，用濾紙小心包好碾碎的金銀忍冬鮮果實(shí)，并用細(xì)線扎緊后放入濾筒內(nèi)，向?yàn)V筒內(nèi)加入100 mL正己烷溶劑，使樣品完全浸沒(méi)在正己烷中。放入水浴鍋內(nèi)，連接好索氏提取裝置的各部分，接通冷凝水，( 83±2)℃水浴加熱，索氏提取4 h。采用旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)法除去正己烷，得到金銀忍冬鮮果實(shí)提取物。稱量所得提取物質(zhì)量，計(jì)算得率。

1.3 金銀忍冬鮮果實(shí)提取物的GC-MS分析

用甲醇將金銀忍冬鮮果實(shí)提取物配制成10 mg/L的甲醇溶液，利用氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)聯(lián)用儀對(duì)試樣進(jìn)行分析。色譜分析條件：HP-5MS毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；FID檢測(cè)器；初始溫度40 ℃(保持2 min)，以10 ℃/min的升溫速率升到280 ℃(保持2 min)；進(jìn)樣口溫度250 ℃；進(jìn)樣量1.0 μL；不分流，氦氣載氣，流速1 mL/min。質(zhì)譜分析條件：EI電離源，接口溫度280 ℃，離子源溫度230 ℃，電子能量70 eV，掃描范圍為30～500 u。

2 結(jié)果與分析

2.1 金銀忍冬鮮果實(shí)提取物的GC-MS分析

采用索氏提取法以正己烷為溶劑提取得到的金銀忍冬鮮果實(shí)提取物為淡黃色透明油狀液體，得率為0.77%。金銀忍冬鮮果實(shí)提取物樣品的總離子流色譜圖如圖1所示。通過(guò)面積歸一化法計(jì)算出各組分的GC含量，總GC含量76.47%的化合物被鑒定，共鑒定出13種化合物，分析結(jié)果如表1所示。

圖1 金銀忍冬鮮果實(shí)提取物的總離子流色譜圖

表1 金銀忍冬鮮果實(shí)提取物的GC-MS分析

從表1可知，金銀忍冬鮮果實(shí)提取物主要由烷烴類(35.75%)、酯類(27.34%)、酮類(10.89%)、酚類(1.76%)、醇類(0.73%)等化合物組成。GC含量最高的化合物是二十四烷(21.74%)，其次為苯甲酸-2,6-雙[(三甲基甲硅烷)氧基]-三甲基甲硅烷酯(13.06%)，也稱為三甲基甲硅烷醇三硅甲烷氧基水楊酯。2,4-雙(1,1-二甲基乙基)-苯酚(1.76%)，也稱為2,4-二叔丁基苯酚，為抗氧化劑的重要中間體。周寶利等[14]研究結(jié)果表明2,4-二叔丁基苯酚對(duì)番茄植株及葉霉病具有調(diào)控作用，0.1 mmol/L為田間施加最適濃度。王再?gòu)?qiáng)等[15]研究結(jié)果表明2,4-二叔丁基苯酚對(duì)秀麗隱桿線蟲(chóng)有較好毒殺作用。張玉[16]研究結(jié)果表明叔丁基對(duì)苯二酚(TBHQ)、茶多酚(TP)、維生素E(VE)、吡咯喹啉醌(PQQ)、葡萄原花青素(GPC)5種抗氧化劑，總抗氧化能力和清除DPPH自由基能力均表現(xiàn)為TP>GPC>TBHQ>VE。范琛[17]研究結(jié)果表明維生素C抗氧化活性高于維生素E。金銀忍冬鮮果實(shí)提取物以及與木醋液的抗氧化活性、抑菌活性、殺蟲(chóng)活性等生物活性比較，有待進(jìn)一步研究。

2.2 金銀忍冬果實(shí)提取物的揮發(fā)性成分及應(yīng)用

姬曉靈等[12]研究了寧夏生長(zhǎng)的金銀忍冬干果實(shí)中揮發(fā)性成分。乙醚為提取溶劑,氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)分析金銀忍冬干果實(shí)乙醚索氏提取物揮發(fā)性成分。色譜峰面積歸一化法計(jì)算了各成分的GC含量。共鑒定出32種化合物，主要由烷烴類、酯類、酮類、醇類、有機(jī)酸類、皂苷類、醚類、酚類、烯烴類等化合物組成，其中GC含量最高的化合物是甲基己基過(guò)氧化氫(1.31%)。李金英等[13]研究了2種忍冬果實(shí)揮發(fā)物質(zhì)組成。頂空固相微萃取 HS-SPME 裝置采集金銀忍冬鮮果實(shí)的揮發(fā)性成分，氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)分析結(jié)果表明金銀忍冬鮮果實(shí)的揮發(fā)性成分主要由醛類、醇類、酮類、酯類、萜烯類、烷烴類等化合物組成，共鑒定出16種化合物，其中GC含量最高的化合物是2-己烯醛(50.74%)。金銀忍冬果實(shí)提取物因產(chǎn)地、提取方法等揮發(fā)性成分各異。新鮮樣品、風(fēng)干樣品對(duì)揮發(fā)性成分種類均有影響。金銀忍冬果實(shí)提取物揮發(fā)性化合物種類，如烷烴類、酯類、酮類、醇類等為共有化合物種類。金銀忍冬果實(shí)提取物揮發(fā)性成分的提取工藝優(yōu)化，有待進(jìn)一步研究。

3 結(jié) 論

以正己烷為溶劑，采用索氏提取法提取金銀忍冬鮮果實(shí)中活性組分，通過(guò)氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)分析其揮發(fā)性成分。GC-MS分析結(jié)果表明金銀忍冬鮮果實(shí)提取物主要由烷烴類(35.75%)、酯類(27.34%)、酮類(10.89%)、酚類(1.76%)、醇類(0.73%)等化合物組成。GC含量最高的化合物是二十四烷(21.74%)，其次為苯甲酸-2,6-雙[(三甲基甲硅烷)氧基]-三甲基甲硅烷酯(13.06%)，也稱為三甲基甲硅烷醇三硅甲烷氧基水楊酯。2,4-雙(1,1-二甲基乙基)-苯酚(1.76%)，也稱為2,4-二叔丁基苯酚，為抗氧化劑的重要中間體，具有抑菌、殺蟲(chóng)等生物活性。