羅亞敏，劉振權(quán)，任小巧，宋慧榮，仁青加，陶曉華,△

(1.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029； 2.西藏藏醫(yī)學(xué)院，拉薩 850000)

藏藥如意珍寶丸由珍珠母、沉香等30余種藥材組成，具有清熱、醒腦開(kāi)竅、舒筋活絡(luò)及干黃水等功效，主要用于治療瘟疫、陳舊熱癥、白脈病、四肢麻木、癱瘓、口眼歪斜、神志不清、痹癥、痛風(fēng)、肢體強(qiáng)直和關(guān)節(jié)不利等疾病[1]。藏醫(yī)認(rèn)為偏頭痛屬于白脈病范疇[2-3]，而如意珍寶丸對(duì)其具有良好的療效。

偏頭痛是一組反復(fù)發(fā)作的頭部疾病，呈一側(cè)或雙側(cè)疼痛，少數(shù)典型病例發(fā)作前有視覺(jué)、感覺(jué)和運(yùn)動(dòng)障礙等先兆。隨著現(xiàn)代對(duì)其探索的不斷深入，將偏頭痛發(fā)病機(jī)制分為“血管說(shuō)、神經(jīng)-血管說(shuō)、神經(jīng)說(shuō)”，其中最為完善且廣泛流傳的病理基礎(chǔ)當(dāng)屬神經(jīng)血管說(shuō)[4]。雖涉及炎癥因子、信號(hào)通路等探究方向，然目前以腦電波律電位、生物學(xué)特點(diǎn)的研究甚少[5]。據(jù)文獻(xiàn)表明，偏頭痛患者腦電波異常率顯著高于非偏頭痛患者[6]，故本實(shí)驗(yàn)從腦電圖的變化來(lái)證明藏藥如意珍寶丸治療偏頭痛的藥理作用。

1 材料與方法

1.1 藥物與儀器

藏藥如意珍寶丸0.5 g×10丸/板×2板/盒，青海金訶藏藥藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)(國(guó)藥準(zhǔn)字Z63020064)；正天丸，華潤(rùn)三九醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)(國(guó)藥準(zhǔn)字Z44020711)；硝酸甘油注射液，北京益民藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(國(guó)藥準(zhǔn)字11020289)；注射用生理鹽水,四川科倫藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)；戊巴比妥鈉，德國(guó)生產(chǎn)(國(guó)藥準(zhǔn)字171060)；BL-420S生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，成都泰盟軟件有限公司生產(chǎn)；針灸針，佳興醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)。

1.2 動(dòng)物

清潔級(jí)SD雄性大鼠，體質(zhì)量250～300 g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供(合格證號(hào)SCXK(京)2016-0006)。

1.3 大鼠腦電功率譜百分比數(shù)值的測(cè)定

清潔級(jí)SD雄性大鼠30只，體質(zhì)量250～300 g，適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d，稱(chēng)重編號(hào)隨機(jī)分6組，每組5只，包括空白組(未造模時(shí)檢測(cè))、模型組(空白組造模后檢測(cè))、藏藥如意珍寶丸高(10 g·kg-1)、中(5 g·kg-1)、低(2.5 g·kg-1)組和正天丸組(3 mg·kg-1)各5只，連續(xù)灌胃給藥7 d。在動(dòng)物腦電圖測(cè)試前1 d，將大鼠固定于立體定位儀上，以鼻根、枕后粗隆、兩耳屏前凹為范圍進(jìn)行剃毛處理，并劃分測(cè)量點(diǎn)位置。取鼻根、枕后粗隆與雙側(cè)耳屏前凹連線(xiàn)的交點(diǎn)，即頭頂正中點(diǎn)(Cz)，以軟尺將鼻根、額前點(diǎn)(Fp)、額區(qū)點(diǎn)(Fz)、中央?yún)^(qū)點(diǎn)(Cz)、頂區(qū)點(diǎn)(Pz)、枕區(qū)點(diǎn)(Dz)、枕后粗隆(Dp)分為1∶2∶2∶2∶2∶1比例，并將雙側(cè)耳屏前凹定義為O(左為O1，右為O2)。取兩點(diǎn)，即Cz與Fp之中點(diǎn)Fz、與Dz之中點(diǎn)Pz，同時(shí)測(cè)量O1、O2分別與Fz、Pz的中點(diǎn)，命名為L(zhǎng)A2、LA3(左側(cè))、RB2、RB3(右側(cè))，之后以不同顏色的熒光筆對(duì)每只老鼠進(jìn)行標(biāo)記，即LO1A2(藍(lán)色)、LO1A3(紫色)、RO2B2(綠色)、RO2B3(粉色)，待第2天腦電圖檢測(cè)。

次日上午，大鼠稱(chēng)重后以1%戊巴比妥鈉(4 mL·kg-1)腹腔麻醉后，用0.5 mm針灸針?lè)謩e針刺RO2點(diǎn)、RB3點(diǎn)及耳朵，再與BL-420S生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)相連，黑線(xiàn)連接耳朵上的針灸針，紅線(xiàn)連接RO2點(diǎn)針灸針，白線(xiàn)連接RB3點(diǎn)針灸針，同時(shí)記錄RO2B3之間的電位差,之后以順時(shí)針?lè)轿粰z測(cè)LO1A3、LO1A2、RO2B2的腦電圖數(shù)據(jù)。EEG根據(jù)其頻率分為δ(0.5～4.0 Hz)、θ(4.0～8.0 Hz)、α1(8.0～11.0 Hz)、α2(11.0～13.0 Hz)、β(13.0～30.0 Hz)5個(gè)頻段。數(shù)據(jù)采樣率為200 Hz,采集造模前40 min及臀部皮下注射硝酸甘油注射液(10 g·kg-1)后4、10,30,60 min的腦電信號(hào)，每次記錄時(shí)間5 min，計(jì)算腦電圖功率百分比數(shù)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 藏藥如意珍寶丸對(duì)硝酸甘油致偏頭痛模型大鼠4 min功率譜百分比數(shù)值的影響

表1圖1顯示，給藥前各組大鼠SI 4個(gè)腦區(qū)相同功率百分比均相似(P>0.05)。大鼠臀部注射硝酸甘油注射液后4 min腦電圖波形發(fā)生明顯改變。其中與空白組比較，模型組δ頻段百分比在B3、A2、B2腦區(qū)有顯著性降低,而θ、α2頻段百分比在B3、A3、B2腦區(qū)，α1頻段百分比在B3、B2、A2腦區(qū)，β頻段百分比在A(yíng)2、B3腦區(qū)均顯著提高[7-9]，提示該腦電圖由偏頭痛引起，而該腦電圖指標(biāo)可作為鎮(zhèn)痛藥效學(xué)的評(píng)價(jià)參考，實(shí)驗(yàn)藥及陽(yáng)性藥均能抑制上述變化達(dá)到治療效果。與陽(yáng)性藥比較，藏藥如意珍寶丸高劑量的θ頻段百分比在B3、A2腦區(qū)顯示有差異。

圖1 硝酸甘油致偏頭痛模型大鼠腦電波顯示快波增多

2.2 藏藥如意珍寶丸對(duì)硝酸甘油致偏頭痛模型大鼠10 min功率譜百分比數(shù)值的影響

表2顯示，與空白組比較，硝酸甘油致偏頭痛后10 min，模型組δ頻段百分比在B3、A3、A2腦區(qū)顯著性降低，θ頻段百分比在B2、A3腦區(qū)，α1頻段百分比在SI四腦區(qū)，α2頻段百分比在B3腦區(qū)，β頻段百分比在B2、B3腦區(qū)均顯著提高。陽(yáng)性藥與如意珍寶丸高、中、低劑量均能抑制上述改變。與陽(yáng)性藥比較，藏藥如意珍寶丸高劑量的θ頻段百分比在B2腦區(qū)、α1頻段百分比在B3腦區(qū)有較高的差異性；低劑量的θ頻段百分比在A(yíng)3、B2顯示明確區(qū)別。

2.3 藏藥如意珍寶丸對(duì)硝酸甘油致偏頭痛模型大鼠30 min功率譜百分比數(shù)值的影響

表3顯示，硝酸甘油致偏頭痛后30 min，與空白組比較，模型組的δ頻段百分比在A(yíng)3、B2腦區(qū)顯著性下降；θ頻段百分比在B2、A3、A2腦區(qū)，α1頻段百分比在SI四腦區(qū)，α2頻段百分比在B3、A2腦區(qū)，β頻段百分比在B3、A2、B2腦區(qū)均顯著提高；陽(yáng)性藥與如意珍寶丸高、中、低劑量均能抑制上述變化，且較陽(yáng)性藥比較，藏藥如意珍寶丸高劑量的θ頻段百分比在B3、A3、B2腦區(qū)、α1在B3、δ在B2腦區(qū)均具有特異性。

2.4 藏藥如意珍寶丸對(duì)硝酸甘油致偏頭痛模型大鼠60 min功率譜百分比數(shù)值的影響

硝酸甘油致偏頭痛后60 min，與空白組比較，模型組的δ頻段百分比在A(yíng)3、B2、B3腦區(qū)產(chǎn)生明顯的降低，θ、β頻段百分比在B3、A3、B2腦區(qū)，α1、α2頻段百分比在SI四腦區(qū)均表現(xiàn)出明確的量效關(guān)系，陽(yáng)性藥與如意珍寶丸高、中、低劑量均能抑制上述變化。與陽(yáng)性藥比較，藏藥如意珍寶丸高劑量的θ頻段百分比在SI腦區(qū)、δ在B2腦區(qū)均具有特異性(表4)，可見(jiàn)在60 min后其治療效果達(dá)至高峰。

3 討論

在偏頭痛急性發(fā)作時(shí)，可出現(xiàn)大腦皮層的神經(jīng)元去極化同步異常電活動(dòng)。高度興奮的神經(jīng)元導(dǎo)致皮質(zhì)活動(dòng)的抑制，進(jìn)而使腦組織缺氧的發(fā)生和氧耗量增加，體內(nèi)微環(huán)境產(chǎn)生變化，痛覺(jué)結(jié)構(gòu)受到觸發(fā)，引起發(fā)作。有研究顯示，由于偏頭痛急性發(fā)作期血管活性物質(zhì)如降鈣素基因相關(guān)肽、P物質(zhì)以及神經(jīng)激肽A等釋放增多，增強(qiáng)痛覺(jué)神經(jīng)纖維的敏感性，引起腦水腫，從而導(dǎo)致腦電圖異常[10]。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，偏頭痛患者腦電圖異常率與有無(wú)先兆、首次發(fā)病年齡、頭痛程度存在一定的相關(guān)性[11]，且其具有相對(duì)特異性腦電圖表現(xiàn)[12-13]。因此，腦電圖可以作為臨床偏頭痛患者有用、無(wú)創(chuàng)的輔助檢查措施。

表1 藏藥如意珍寶丸對(duì)偏頭痛大鼠4 min腦電功率譜百分比數(shù)值的影響

注：與空白組比較：&&P<0.01，&P<0.05；與模型組比較：**P<0.01，*P<0.05；與陽(yáng)性藥比較：##P<0.01

表2 藏藥如意珍寶丸對(duì)偏頭痛大鼠10 min功率譜百分比數(shù)值的影響

注：與空白組比較:&&P<0.01，&P<0.05；與模型組比較:**P<0.01，*P<0.05;與陽(yáng)性藥比較：##P<0.01，P<0.05

表3 藏藥如意珍寶丸對(duì)偏頭痛大鼠30 min功率譜百分比數(shù)值的影響

注：與空白組比較:&&P<0.01，&P<0.05；與模型組比較：**P<0.01，*P<0.05；與陽(yáng)性藥比較：##P<0.01

表4 藏藥如意珍寶丸對(duì)偏頭痛大鼠60 min功率譜百分比數(shù)值的影響

注：與空白組比較:&&P<0.01，&P<0.05；與模型組比較：**P<0.01，*P<0.05;與陽(yáng)性藥比較：##P<0.01

本實(shí)驗(yàn)以臀部皮下注射硝酸甘油注射液造成急性偏頭痛模型。過(guò)程分析顯示，SI 4個(gè)部位中模型組在各個(gè)頻段的功率百分比均發(fā)生變化，證明與相關(guān)文獻(xiàn)所描述的3 min后產(chǎn)生行為學(xué)變化及出現(xiàn)偏頭痛腦電圖波形相一致[14-15]。通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與空白組比較，模型組從時(shí)間變化方面，δ波在SI腦區(qū)出現(xiàn)下降，θ、α1、α2、β波在SI腦區(qū)均升高，其中以α1變化最為明顯，可能偏頭痛的發(fā)生與α1最為密切。與模型組比較，從時(shí)間變化方面，陽(yáng)性藥的頻波段在SI四腦區(qū)均產(chǎn)生顯著性變化，除θ頻段百分比在4 min無(wú)明顯改變外，其余均起到治療作用；而藏藥如意珍寶丸高、中、低劑量頻段百分比于SI四腦區(qū)出現(xiàn)明顯變化，但除了高劑量對(duì)θ頻段百分比在B3、A2腦區(qū)4 min有治療作用外，其余組皆與陽(yáng)性藥一致，對(duì)θ頻段百分比4 min未顯示明確療效。與陽(yáng)性藥比較，藏藥如意珍寶丸高劑量在各腦區(qū)對(duì)θ頻段波的改變較明顯，對(duì)δ頻段百分比僅在B2腦區(qū)30、60 min起作用，對(duì)α1頻段百分比僅在B3腦區(qū)的10、60 min有治療效果；低劑量對(duì)θ頻段百分比僅在A(yíng)3腦區(qū)10 min有明顯差異，其余均無(wú)明顯變化。由此可知，藏藥如意珍寶丸高、低劑量較陽(yáng)性藥比較，于θ頻段波的改變具有明顯差異，而對(duì)其余波段改變兩藥效果相同，可探知藏醫(yī)如意珍寶丸與正天丸均有鎮(zhèn)痛作用，但其較正天丸的止痛效果在θ波上比較明顯。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，藏藥如意珍寶丸可明顯減輕硝酸甘油所致偏頭痛模型大鼠腦電圖的異常變化，說(shuō)明其對(duì)偏頭痛的鎮(zhèn)痛效果較為明顯，可以作為臨床干預(yù)偏頭痛發(fā)作期的治療手段之一。