史忠越

（吉林省通化市疾病預(yù)防控制中心，吉林 通化 134000）

感染乙型肝炎病毒（HBV）導(dǎo)致的一種可傳染性肝炎稱(chēng)為乙型病毒性肝炎，簡(jiǎn)稱(chēng)乙肝。目前在臨床上通常使用乙肝五項(xiàng)檢查來(lái)判斷患者病情的嚴(yán)重程度以及傳染力的大小[1]。臨床上將血清標(biāo)志物HBsAg、HBeAb、HBeAg、HBcAb、HBsAb五項(xiàng)作為檢查機(jī)體內(nèi)乙肝病毒感染的標(biāo)志物，即“乙肝五項(xiàng)”[2]。臨床大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）對(duì)乙肝五項(xiàng)進(jìn)行檢測(cè)，該方法具有特異性好以及靈敏度較高等優(yōu)點(diǎn)[3]，但該方法的操作步驟較多，過(guò)程較復(fù)雜，所以存在較多的人為或外界因素對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成誤差的可能。該研究將分析在用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)時(shí)，標(biāo)本的不同血清狀態(tài)和水浴時(shí)間的長(zhǎng)短對(duì)乙肝五項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果的影響并進(jìn)行分析，以此來(lái)提高臨床檢驗(yàn)質(zhì)量。具體結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取2016年11月至2017年12月在我中心進(jìn)行乙型肝炎病毒檢測(cè)的126例患者的血液標(biāo)本作為研究對(duì)象，其中男性66例，年齡20～75歲，平均年齡（40.86±11.12）歲，女性60例，年齡19～72歲，平均年齡（37.58±8.03）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者無(wú)相關(guān)肝炎病史。126個(gè)標(biāo)本在檢測(cè)前的一般情況無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

1.2 方法： 在早晨空腹情況下分別取每位患者10 mL靜脈血液，將這10 mL靜脈血均分為5等份，每份2 mL，依次注入5支玻璃試管中，其中一份標(biāo)本不做抗凝劑處理，一份標(biāo)本做抗凝劑處理，另外3份標(biāo)本分別放入37 ℃水浴箱中水浴加熱20 min、40 min、60 min，將所有標(biāo)本3000 r/min，離心10 min后待檢，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清中的HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc五項(xiàng)標(biāo)志物。乙肝五項(xiàng)酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)診斷試劑盒來(lái)自北京普贊生物技術(shù)有限公司，型號(hào)為PZ-KJ-HQMM01，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行規(guī)范操作[4-5]。

1.3 觀察指標(biāo)：觀察并記錄不同血清狀態(tài)下乙肝五項(xiàng)陽(yáng)性檢測(cè)情況；不同水浴時(shí)間乙肝五項(xiàng)的陽(yáng)性檢測(cè)情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析： 該研究所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料用表示，采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 標(biāo)本血清狀態(tài)不同時(shí)乙肝五項(xiàng)的檢測(cè)情況：利用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)不同血清狀態(tài)下的乙肝五項(xiàng)，抗凝劑處理過(guò)的標(biāo)本陽(yáng)性率為50.79%，未經(jīng)抗凝劑處理過(guò)的標(biāo)本陽(yáng)性率為28.57%，經(jīng)抗凝劑處理過(guò)的血液標(biāo)本的陽(yáng)性率明顯高于未經(jīng)抗凝劑處理過(guò)的血液標(biāo)本，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明使用抗凝劑導(dǎo)致假陽(yáng)性率增高。見(jiàn)表1。

表1 不同血清狀態(tài)乙肝五項(xiàng)檢測(cè)情況

2.2 標(biāo)本水浴時(shí)間不同時(shí)乙肝五項(xiàng)的檢測(cè)情況：利用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)經(jīng)不同水浴時(shí)間標(biāo)本的乙肝五項(xiàng)，標(biāo)本水浴加熱20 min的陽(yáng)性率為18.25%，水浴加熱40 min的陽(yáng)性率為7.94%，水浴60 min的陽(yáng)性率為0.00%，說(shuō)明血液標(biāo)本水浴加熱時(shí)間越長(zhǎng)其陽(yáng)性率越低。見(jiàn)表2。

表2 不同水浴時(shí)間乙肝五項(xiàng)檢測(cè)情況

3 討 論

乙型肝炎是一種常見(jiàn)的傳染病，如果不及時(shí)進(jìn)行治療，會(huì)逐漸發(fā)展成為肝硬化甚至是肝癌[6]，嚴(yán)重影響患者的生命健康，帶來(lái)嚴(yán)重后果。酶聯(lián)免疫吸附法快速可靠，在我國(guó)臨床上得到廣泛應(yīng)用，因而常用于乙肝五項(xiàng)的檢測(cè)，但是檢測(cè)過(guò)程中和標(biāo)本本身存在較多影響因素，會(huì)使檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)一定的誤差。

該研究結(jié)果顯示，經(jīng)抗凝劑處理過(guò)的標(biāo)本陽(yáng)性率為50.79%，未經(jīng)抗凝劑處理過(guò)的標(biāo)本陽(yáng)性率為28.57%，經(jīng)抗凝劑處理過(guò)的血液標(biāo)本陽(yáng)性率明顯高于未經(jīng)抗凝劑處理過(guò)的血液標(biāo)本，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明使用抗凝劑導(dǎo)致假陽(yáng)性率增高。導(dǎo)致這一結(jié)果的原因是在抗凝劑發(fā)揮作用時(shí)形成的結(jié)合物會(huì)促進(jìn)或抑制酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)中HRP（辣根過(guò)氧化物酶）的活性，使顯色出現(xiàn)異常結(jié)果產(chǎn)生誤差。利用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)經(jīng)過(guò)不同水浴時(shí)間處理的血液標(biāo)本的乙肝五項(xiàng)其結(jié)果不同，水浴加熱20 min的陽(yáng)性率為18.25%，水浴加熱40 min的陽(yáng)性率為7.94%，水浴60 min的陽(yáng)性率為0.00%，說(shuō)明血液標(biāo)本水浴加熱時(shí)間越長(zhǎng)其陽(yáng)性率越低。其原因是水浴加熱不同時(shí)間的離心血清標(biāo)本中所含的纖維蛋白和過(guò)氧化物酶細(xì)胞成分不等量，它們可以黏附在96孔板反應(yīng)孔中，然后非特異性的吸附酶標(biāo)物最后導(dǎo)致假陽(yáng)性的產(chǎn)生。除了以上兩種情況會(huì)影響ELISA的檢測(cè)結(jié)果外，在日常工作中筆者還總結(jié)了以下原因可以影響檢測(cè)結(jié)果：①標(biāo)本出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中的亞鐵血紅素有類(lèi)似過(guò)氧化物酶的活性，可以黏附在ELISA反應(yīng)孔中，若洗板時(shí)未將其洗掉則可催化底物顯色使結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性。②標(biāo)本被細(xì)菌污染。一些細(xì)菌具有內(nèi)源性酶或者分泌一些酶類(lèi)物質(zhì)能催化底物顯色，從而使結(jié)果產(chǎn)生誤差。③標(biāo)本放置時(shí)間過(guò)久。抗體或抗原的免疫活性會(huì)隨放置時(shí)間的延長(zhǎng)而減弱，使結(jié)果出現(xiàn)假陰性。④標(biāo)本中HBsAg或（和）HBeAg濃度過(guò)高時(shí)會(huì)產(chǎn)生鉤狀效應(yīng)，使強(qiáng)陽(yáng)性變?yōu)槿蹶?yáng)性或陰性。

為使酶聯(lián)免疫吸附法的檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確可以采取以下措施：在檢測(cè)時(shí)使用新鮮血清標(biāo)本；離心時(shí)，延長(zhǎng)離心時(shí)間，適當(dāng)增加離心速度；等血液標(biāo)本自然凝固后再進(jìn)行血清的分離，確保血液標(biāo)本中的活性物質(zhì)完全失活；在標(biāo)本采集和處理時(shí)要盡量避免溶血的發(fā)生；在采集和操作過(guò)程中要避免細(xì)菌的污染；標(biāo)本最好在20 min內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，如果不能馬上進(jìn)行測(cè)定要及時(shí)分離血清然后在低溫條件下進(jìn)行保存；可對(duì)抗原濃度過(guò)高的標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋?zhuān)缓笤龠M(jìn)行后續(xù)操作。

綜上所述，該研究結(jié)果說(shuō)明了標(biāo)本的不同血清狀態(tài)和水浴加熱的時(shí)間長(zhǎng)短都能影響酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)乙肝五項(xiàng)的結(jié)果，然而在ELISA檢測(cè)過(guò)程中還存在其他影響因素。在乙型肝炎的治療中，乙肝五項(xiàng)又作為一個(gè)重要的指標(biāo)，因此要求檢驗(yàn)人員要做到認(rèn)真負(fù)責(zé)，規(guī)范操作，減少失誤，做好室內(nèi)質(zhì)控，確保結(jié)果準(zhǔn)確可信，分析酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)乙肝五項(xiàng)結(jié)果中的影響因素，以此來(lái)提高臨床檢驗(yàn)質(zhì)量。