錢朋飛 黎冠宏 孫宇 鄒燕鵬 張樹平

乳腺癌是屬于腫瘤科中最為常見一類腫瘤疾病, 嚴(yán)重危害到現(xiàn)代患者生命狀況, 其疾病發(fā)病率并處于逐年上升階段,而臨床上腫瘤轉(zhuǎn)移主要途徑之一為外周血必經(jīng)途徑［1］。但是現(xiàn)臨床上仍然不清楚乳腺癌疾病臨床發(fā)病原因、發(fā)展以及轉(zhuǎn)移具體機(jī)制, 但是如果能在疾病早期找到相關(guān)指標(biāo), 對于其臨床治療、延長生存率具有重要臨床意義。臨床上早期進(jìn)行檢測, 有利于其臨床治療以及預(yù)后相應(yīng)判斷。本文就對于其外周血中乳腺組織特異性基因hMAM RNA以及CEA RNA表達(dá)情況進(jìn)行探究, 并為其疾病治療提供依據(jù), 具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年4月～2017年5月收入80例乳腺癌患者作為本次觀察組, 所有乳腺癌患者未實施手術(shù)治療；經(jīng)過本院專業(yè)醫(yī)師確診為原發(fā)乳腺癌；本次試驗經(jīng)過本院倫理委員會批準(zhǔn)；本次試驗收入對象均為女性。年齡36～70 歲 , 平均年齡 (45.4±8.2)歲 , 其中浸潤性導(dǎo)管癌 67 例 ,單純癌8例, 黏液癌4例, 乳頭派杰病1例。

1.2 方法

1.2.1 試劑盒引物設(shè)計 本次試驗使用逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)技術(shù)進(jìn)行檢測, 本次試驗使用試劑盒(Promega公司生產(chǎn)), 淋巴細(xì)胞分離液(上海恒信化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)),DNA標(biāo)志(Sangon公司生產(chǎn)), 溴化乙錠(EB)、瓊脂糖(華美公司生產(chǎn))。本次hMAM RNA 和CEA RNA引物按照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行設(shè)計處理(GIBICO公司合成)。

1.2.2 總RNA提取 抽取患者外周血5 ml, 并做好乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝, 整個操作過程按照無菌原則進(jìn)行, 防止出現(xiàn)污染情況發(fā)生。使用淋巴細(xì)胞分離液, 并且其密度梯度按照離心法進(jìn)行提取, 并提取單個核細(xì)胞層, 整個操作過程按照試劑盒相應(yīng)說明術(shù)進(jìn)行。使用RT-PCR整個檢測過程中應(yīng)當(dāng)按照試劑盒相應(yīng)說明書進(jìn)行。其中具體反應(yīng)條件為：反轉(zhuǎn)錄為 48℃ , 共計 45 min, 反轉(zhuǎn)錄酶變性為 94℃ , 2 min。并以 35 次循環(huán)擴(kuò)增 , 其中 hMAM RNA 檢測條件為 95℃ , 30 s變性處理 , 55℃ , 30 s延伸。CEA RNA 反應(yīng)條件為 ：退火溫度 69℃ , 其他條件如上 , 末次延伸 72℃ , 10 min。

1.2.3 PCR產(chǎn)物分析 并取擴(kuò)增反應(yīng)液hMAM RNA以及植物膽色素原脫氨酶 (PBGD)各 5 μl, 并予以上樣緩沖液 1 μl混勻 , 并取擴(kuò)增反應(yīng)液 CEA RNA 以及 PBGD 各 5 μl, 并予以上樣緩沖液1 μl混勻, 并以DNA標(biāo)志作為分子量標(biāo)志, 2%瓊脂糖凝膠電泳 , 條件為 80 mA, 15～20 min, EB 進(jìn)行染色 , 紫外檢測儀下進(jìn)行觀察。

1.3 觀察指標(biāo) 對不同腫瘤大小、TNM分期以及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者外周血中hMAM RNA 和CEA RNA表達(dá)情況進(jìn)行比較。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗；多組等級資料采用秩和檢驗。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

乳腺癌患者不同腫瘤大小、TNM分期以及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間外周血中hMAM RNA及CEA RNA表達(dá)陽性情況比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 80例乳腺癌患者外周血中hMAM RNA及CEA RNA檢測結(jié)果與臨床病理學(xué)特征關(guān)系［n(%)］

3 討論

臨床上早期檢測乳腺癌患者微轉(zhuǎn)移情況, 對于后期治療、疾病復(fù)發(fā)起著重要臨床意義。隨著我國生物技術(shù)不斷發(fā)展, 其相應(yīng)檢測技術(shù)不斷完善, RT-PCT是屬于臨床上重要檢測技術(shù), 現(xiàn)已經(jīng)是屬于外周血微轉(zhuǎn)移重要方式之一［2］。

hMAM是屬于近年才分離一類新型乳腺組織特異性蛋白水平, 其主要為①為僅限于成年人乳腺組織、乳腺癌細(xì)胞株。②在乳腺癌原發(fā)灶中其水平表達(dá)高于正常乳腺組織。而CEA則是主要表達(dá)于胚胎性腫瘤、肺、胃以及乳腺癌組織。CEA主要于大多數(shù)導(dǎo)管侵潤性乳腺癌組織中呈現(xiàn)陽性, 并且其原位癌以及小葉癌主要陽性率僅為30%, 對于其腫瘤轉(zhuǎn)移起著重要臨床意義［3-5］, 其是屬于上皮組織中最為標(biāo)志特異性標(biāo)志基因, 為外周血中轉(zhuǎn)移提供可能性。

本文研究表明, 乳腺癌患者不同腫瘤大小、TNM分期以及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間外周血中hMAM RNA及CEA RNA表達(dá)陽性情況比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。在檢測腫瘤患者靜脈血時, 對于其腫瘤細(xì)胞分型診斷起著重要臨床意義。如患者一旦在外周血中檢測出hMAM RNA以及CEA RNA,說明在患者外周血中已經(jīng)存在其微小轉(zhuǎn)移情況發(fā)生。乳腺癌是屬于現(xiàn)在臨床上常見一類全身系統(tǒng)性疾病, 即使是早期乳腺癌, 同樣也會存在早期隱匿性轉(zhuǎn)移。如果在患者亞臨床階段中檢測到微小轉(zhuǎn)移灶, 對于疾病分期、治療以及預(yù)后會產(chǎn)生重要臨床意義［6-8］。

綜上所述, 在乳腺癌患者疾病診斷之中, hMAM RNA以及CEA RNA能夠作為臨床上能夠有效反映轉(zhuǎn)移灶微轉(zhuǎn)移敏感指標(biāo), 對于臨床上疾病分期起著重要臨床意義?？梢宰鳛槟[瘤侵潤轉(zhuǎn)移指導(dǎo), 可以作為后期治療以及預(yù)后重要參考指標(biāo)。