吳娟

摘 要：對放線菌來源的棘白霉素脫酰基酶產(chǎn)生菌ECBN的轉(zhuǎn)化工藝進行研究，通過單菌篩選和轉(zhuǎn)化時間兩個方面的優(yōu)化，確定最佳的轉(zhuǎn)化條件，從而提高轉(zhuǎn)化效率。

關(guān)鍵詞：棘白霉素；阿尼芬凈；轉(zhuǎn)化效率；優(yōu)化

棘白霉素類抗生素是21世紀初開發(fā)的新型藥物，具有全新的作用機理，抗真菌譜較廣，對念珠菌屬以及曲霉菌屬均有效，無交叉耐藥性，無因其本身作用機制而引發(fā)的明顯不良反應(yīng)，是迄今為止安全性最高的一種抗真菌藥物，也是目前用于治療全身性真菌感染的新型藥物。

近年來，棘白霉素類抗真菌藥發(fā)展迅猛，已有卡泊芬凈、米卡芬凈、阿尼芬凈等多個廣譜、低毒、高效的新化合物進入了臨床研究 ，[1-3]作為棘白霉素類抗真菌藥物阿尼芬凈和米卡芬凈，它們的合成過程是將其對應(yīng)的棘白菌素類母核鏈接不同的側(cè)鏈形成，其母核的形成是有對應(yīng)的前體物質(zhì)棘白霉素B和脫去側(cè)鏈產(chǎn)生，因此脫?；^程對于合成該類藥物至關(guān)重要，化學方法反應(yīng)條件劇烈，選擇性又差，幾乎沒辦法實現(xiàn)，文獻報道可以通過微生物轉(zhuǎn)化完成，所使用的轉(zhuǎn)化菌株有游動放線菌屬的菌株，尤其以猶他游動放線菌居多，和鏈霉菌屬的菌株，包括環(huán)圈鏈霉菌與一些未確定種的鏈霉菌屬菌株。

以阿尼芬凈中間體ECB為底物，對篩選放線菌來源的棘白霉素脫?；府a(chǎn)生菌ECBN的轉(zhuǎn)化工藝進行研究，通過單菌篩選和轉(zhuǎn)化時間兩個方面優(yōu)化，確定最佳的轉(zhuǎn)化條件，從而提高轉(zhuǎn)化效率。

1 實驗與方法

1.1 供試菌來源

供試菌來源于本實驗室菌種庫。

1.2 培養(yǎng)基

種子培養(yǎng)基：蔗糖2%，玉米淀粉2%（糊化），棉籽餅粉1%，酵母粉1%，碳酸鈣0.2%，pH6.5。

發(fā)酵培養(yǎng)基：蔗糖3%，棉籽餅粉2%，酵母粉2%，磷酸氫二鉀0.05%，氯化鉀0.1%，硫酸鎂0.1%，碳酸鈣0.2%，pH6.5。

1.3 方法

通過單菌分篩，轉(zhuǎn)涂斜面，挑選優(yōu)勢單菌進行搖瓶試驗。分別將單菌接種瓶，種瓶裝量60mL/500mL瓶，30℃，250rpm搖床培養(yǎng)48h。按10%接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基，30℃，250 rpm，搖床培養(yǎng)4天。按2000u添加重含40.8%的ECB底物進行轉(zhuǎn)化試驗，定時取樣，采用HPLC法測定發(fā)酵液效價來判斷轉(zhuǎn)化效率的高低。

1.4 HPLC檢測

高效色譜儀：Agilent Technologies 1260 Infinity，色譜柱：xBridge Amide3.5um，流動相：乙腈-水（含7.8g L-1 NaH2PO4，pH3.0），波長：210 nm，進樣量：10μL，流速：1mL min-1，柱溫：40℃

2 結(jié)果與討論

將保藏的棘白霉素脫酰基酶產(chǎn)生菌ECBN，涂平板，自然分篩，挑選出30株單菌進行斜面培養(yǎng)，再通過斜面外觀，菌液，鏡檢，選出斜面外觀比較飽滿，菌液掛壁良好，鏡檢形態(tài)比較舒展的單菌共8株進行轉(zhuǎn)化試驗，結(jié)果可見表1。由表1可見通過菌種分篩試驗，在轉(zhuǎn)化時間相同的情況下，1號單菌與8號單菌轉(zhuǎn)化效率較高。

選取1號單菌進行不同轉(zhuǎn)化時間試驗，控制轉(zhuǎn)化18h、21h、24h檢測效價，結(jié)果可見表2。由表2可見轉(zhuǎn)化時間在21h時，轉(zhuǎn)化效率最高。

通過單菌篩選獲得優(yōu)勢單菌1號和8號，通過對1號單菌轉(zhuǎn)化時間的考察，確定最佳轉(zhuǎn)化時間為21小時，從而提高了轉(zhuǎn)化效率。

參考文獻：

[1]陳由頁，曹國穎，傅得興，等.棘白霉素類抗真菌藥的研究進展[J].中國新藥雜志，2007，16（14）：1082-1087.

[2]葉麗娟，朱輝，田敏.微生物來源的真菌細胞壁抑制劑的研究進展[J].國外醫(yī)藥抗生素分冊，2005，26（1）：34-41.

[3]蔣正立，林建群，陳文紅.棘白霉素類抗真菌藥的研究新進展[J].天津藥學，2005，17（5）：62-64.