高艷梅 谷俊峰 祿美云

【摘 要】 目的：研究超高效液相色譜法（簡稱UPLC法）在中成藥人參皂苷類成分含量測定中的應用效果。方法：以血栓通注射液為檢測樣品，分別采用高效液相色譜法（簡稱HPLC法）和UPLC法對其中的皂苷類成分進行測定，對比兩種測定方法下的測定結果，比較兩種檢測方法所用時間。結果：兩種檢測方法下，人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rd以及三七皂苷R1等5種皂苷成分平均含量的測定值以及RSD值一致，提示兩種檢測方法在血栓通注射液人參皂苷類成分含量測定中，均具有良好的應用效果；對比測定所需時間，UPLC法檢測平均用時（15.12±0.75）min，顯著短于HPLC法的（47.15±0.73）min，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結論： 應用HPLC法和UPLC法，均能準確有效地測定中成藥中人參皂苷類成分含量，而UPLC超高效液相色譜法測定更為高效，實踐應用中，可根據(jù)實際需要選定檢測方法。

【關鍵詞】 UPLC法；HPLC法；人參皂苷成分；含量測定

【中圖分類號】R284.1 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2018）07-0017-02

UPLC法，是在HPLC法上進一步開發(fā)得來的，較之傳統(tǒng)的HPLC法，UPLC法的主要突破表現(xiàn)在色譜分離上，色譜的解析度更高。高速度、高分離度和高靈敏度，是UPLC法的突出優(yōu)勢[1]。UPLC法目前還處于新興階段，實踐應用主要集中于生化領域，而在天然產(chǎn)物的成分和精度分析上的應用，也在逐漸興起。而對中成藥進行成分分析，是確定藥品安全性，指導臨床科學用藥的重要環(huán)節(jié)，所以，應用UPLC法進行中成藥中有關成分含量的測定，應用也逐漸廣泛[2]。本研究分析兩種方法在中成藥的人參皂苷類成分含量測定中的應用效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 樣品 血栓通注射液（廣西梧州制藥（集團）股份有限公司，批準文號：國藥準字Z45021769）為分析樣品，樣品來自本藥檢所留樣，為同一批次藥物；對照品來自中國食品藥品檢定研究院。

1.1.2 儀器 島津LC-20AT型號的高效液相色譜儀（SHIMADZU）；ACQuty Arc（2998PDA）型號的超高效液相色譜儀（Waters）；DV215CD型十萬分之一電子天平（OHAUS）；BS110S型萬分之一電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 樣品溶液制備 準確稱取樣品（0.50±001）g，加入50mL濃度為70%的甲醇溶液，嚴密稱重后，超聲提取30min（頻率設置為33kHz，功率設定為250W），再次嚴密稱重，用等濃度甲醇溶液補足減失的質(zhì)量，搖勻、濾過，經(jīng)0.22μm的有機濾膜濾過后，取續(xù)濾液即得，進行液相分析。

1.2.2 對照品溶液制備 用70%的甲醇溶液，將人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rd以及三七皂苷R1對照品配制成各含1mg·mL-1的混合標準貯備液，在4℃條件下保存待用，進行液相分析。

1.2.3 參數(shù)和色譜條件 兩種檢測方法的流動相條件相同，柱溫、檢測波長以及進樣量相同，操作差異主要表現(xiàn)在流速和梯度洗脫程序上，具體為：①UPLC法：以乙腈（A）與濃度為0.05%的磷酸（B）為流動相，進行梯度洗脫；將柱溫控制在30℃，流速為1.0 mL/min，檢測波長設定為203nm，每次進樣的樣品體積為2μL ；②HPLC法：流動相條件與UPLC法相同。進行梯度洗脫。將柱溫控制在30℃，流速為0.4mL/min，檢測波長設定為203nm，每次進樣的樣品體積為2μL。兩種方法下的梯度洗脫程序見表1。兩種方法下，均重復測量3次，取平均值。

1.3 觀察指標 觀察并對比兩種方法下，血栓通注射液樣品中人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rd以及三七皂苷R1等五種皂苷類成分的平均含量測定值，比較兩種測定方法所需時間。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS20.0軟件處理測量數(shù)據(jù)，相關測量資料中的計量資料用（x±s）表示，比較各類皂苷類成分的含量以及兩種方法所用時間的差異，應用t檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩種檢測方法下人參總皂苷類成分含量測定結果 本組研究針對同一批血栓通注射液樣本進行人參皂苷類成分含量的測定，結果顯示，在UPLC法和HPLC法檢測下，受檢樣品的人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rd以及三七皂苷R1這5種人參皂苷成分的含量和RSD值的測定結果無偏差，全部一致。詳見表2。

2.2 兩種檢測方法所用時間比較結果 兩種檢測方法在一起流速參數(shù)設置以及色譜條件上有所差異，UPLC法檢測下，其梯度洗脫程序得到優(yōu)化，因此，檢測的色譜分離度更高，其檢測的速率也得以顯著提升，UPLC法下，平均用時（15.12±0.75）min，顯著短于HPLC法下的（47.15±0.73）min，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

3 討論

3.1 UPLC法的優(yōu)勢 HPLC法是最早出現(xiàn)于20世紀60年代末的分離分析技術，在多年間，不斷發(fā)展，受益于科學技術的進步，色譜得到不斷完善，其分離速率、分離效率以及檢驗的靈敏度均逐年提升，已廣泛被應用于多個學科領域。而在突破了色譜這一瓶頸限制后，在此基礎上開發(fā)成功的UPLC法呈現(xiàn)出更多優(yōu)勢，尤其在檢測速率上，得到顯著提升，且能夠保證檢測結果的精確，在醫(yī)學領域的藥品分析和質(zhì)量測定中的應用，尤其受到重視，其中比較重要的應用方向即對藥物成分的含量測定[3]。

3.2 UPLC法進行成分測定的現(xiàn)實意義 應用UPLC法對合成類藥物及相關制劑進行成分含量的測定，能夠不受藥物本身帶有的雜質(zhì)、相關添加劑或者共存藥物的影響，測定結果更為精確，能夠為臨床用藥提供更為準確的指導，保證用藥劑量的科學性，提升用藥安全。吳立蓉等[4]曾經(jīng)應用UPLC法對復方丹參片中皂苷類的含量進行測定，并與HPLC法測定結果進行對比，證實UPLC法測定的速率更快。