蘭慧 左強(qiáng) 陽敬 劉韜 賓婕

【摘 要】 目的：優(yōu)選清咽口服液水提醇沉工藝，為企業(yè)規(guī)模化生產(chǎn)提供依據(jù)。方法：以次野鳶尾黃素轉(zhuǎn)移率和總皂苷轉(zhuǎn)移率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用L9（34）正交試驗(yàn)優(yōu)選清咽口服液水提醇沉最佳制備工藝。結(jié)果：最佳水提工藝采用10倍量的水，藥材浸泡0.5 h，提取3次，每次1.5 h。最佳醇沉工藝為濃縮藥液生藥含量1.5 g/mL，藥液含醇量為70%，15 ℃靜置12 h。結(jié)論：優(yōu)選出的水提醇沉工藝與企業(yè)規(guī)?；a(chǎn)相結(jié)合，具有理論和實(shí)際意義，可用于清咽口服液的精制工藝。

【關(guān)鍵詞】 清咽口服液；次野鳶尾黃素；總皂苷；正交設(shè)計(jì)

【中圖分類號(hào)】R284.2 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2018）06-0017-05

Abstract：Objective The research on water extraction and alcohol precipitation process of qingyan oral liquid in order to provide the basis for large-scale of enterprise.Methods The transfer rate of irisflorentin and total glycosides were chosen as the assessment index. The optimum conditions were selected by the L9 （34） of orthogonal experiment.Results The optimal water extraction conditions were 10 times water of the amount of herb and immerse 0.5 h， extracted 3 times and 1.5 h per time. The optimum alcohol precipitation technology was extraction solution to concentrate income 1.5g/mL， solution containing methanol was 70%， standing 12 h with 15℃.Conclusion The extraction and alcohol precipitation process combined with enterprise-scale production， which owns theoretical and practical significance in purification technology of qingyan oral liquid.

Keywords：Qingyan Oral Liquid； Irisflorentin； Total Glycosides； Orthogonal Experiment

清咽口服液處方來源于臨床使用的經(jīng)驗(yàn)方射干豆根桔梗湯，主要由射干、山豆根、桔梗、甘草等組成，臨床用于預(yù)防和治療上呼吸道感染及流感，療效較好。處方中君藥為射干，文獻(xiàn)資料[1-2]表明，含射干的復(fù)方制劑多具有清利咽喉功能，常被用來預(yù)防或治療上呼吸道感染感染及流感。由于湯劑服用量大，不方便攜帶，在使用上有一定的局限性，因此特將射干豆根桔梗湯開發(fā)成院內(nèi)制劑清咽口服液。根據(jù)藥材成分、藥理作用、中藥用藥習(xí)慣和臨床療效，為最大限度提取和保留該經(jīng)驗(yàn)處方的活性成分，實(shí)驗(yàn)采用水提醇沉工藝制備清咽口服液。在前期工藝研究中，對(duì)影響水提工藝的影響因素（浸泡時(shí)間、提取次數(shù)、提取時(shí)間、加水量）和醇沉的影響因素（藥液濃度、醇沉?xí)r間、醇沉濃度、醇沉溫度）進(jìn)行單因素考察，在此前提下進(jìn)行正交設(shè)計(jì)，考察各影響因素的交互作用，實(shí)驗(yàn)以處方中君藥射干的主要活性成分次野鳶尾黃素的轉(zhuǎn)移率和總皂苷轉(zhuǎn)移率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)清咽口服液的制備工藝進(jìn)行優(yōu)化，為下一步申報(bào)醫(yī)院制劑提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Waters e2695-2489高效液相色譜儀（美國Waters公司），AUW220型電子天平（日本島津），C18色譜柱（Agilent ZORBAX SB-C18， 4.6 mm×250 mm， 5 μm， 美國安捷倫公司），F(xiàn)A1004型電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 材料 射干（批號(hào)：20110403）、山豆根（批號(hào)：20110206）、桔梗（批號(hào)：20110711）、蟬蛻（批號(hào)：20110523）、甘草（批號(hào)：20120605）等均購置云南白藥天紫紅飲片廠。次野鳶尾黃素對(duì)照品（批號(hào)：111557-200610，中國藥品生物制品檢定所），甲醇為色譜純，水為純凈水，其余所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 水提工藝研究

2.1.1 正交試驗(yàn)優(yōu)選 通過前期單因素考察結(jié)果，在清咽口服液的提取過程中，影響提取效果的主要因素有浸泡時(shí)間（因素A）、加水量（因素B）、提取次數(shù)（因素C）、提取時(shí)間（因素D），每個(gè)因素各選3個(gè)水平，各因素水平見表1。每次取處方量藥材100 g，按表2安排正交試驗(yàn)，并定容至100 mL進(jìn)行含量測(cè)定，選擇次野鳶尾黃素轉(zhuǎn)移率和總皂苷轉(zhuǎn)移率進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，其中次野鳶尾黃素轉(zhuǎn)移率權(quán)重系數(shù)0.7，總皂苷轉(zhuǎn)移率權(quán)重系數(shù)0.3。

2.1.2 次野鳶尾黃素含量測(cè)定

2.1.2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性[3] 以十八烷基反向鍵合硅膠為填充劑，C18色譜柱（AgilentXDB-C18，4.6 mm×150 mm，5 μm）；甲醇-0.2%磷酸（50∶50）為流動(dòng)相；流速1.0 mL/min；柱溫30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：266 nm。理論板數(shù)按次野鳶尾黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于8000。

2.1.2.2 測(cè)定方法 取處方量藥材100 g，采用上述水提工藝進(jìn)行提取，藥液濃縮，定容至100 mL，從中精密量取25 mL藥液于分液漏斗中，加乙酸乙酯萃取4次，每次25 mL，搖勻，合并乙酸乙酯萃取液，用25 mL 2%的鹽酸溶液洗滌1次，回收乙酸乙酯萃取液，甲醇定容至25 mL，以微孔濾膜（0.45 μm）過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另精密稱取次野鳶尾黃素對(duì)照品2.1 mg，加甲醇溶解并定容至10 mL得濃度為0.21 mg/mL的對(duì)照品溶液。精密吸取上述供試品溶液各10 μL注入液相色譜儀，按“2.1.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。計(jì)算結(jié)果見表2～4。

注：射干藥材中次野鳶尾黃素含量為0.13%。次野鳶尾黃素最高轉(zhuǎn)移率+總皂苷最高含量=100，次野鳶尾黃素轉(zhuǎn)移率=水提藥液中次野鳶尾黃素苷的量/藥材中次野鳶尾黃素的量×100%，次野鳶尾黃素轉(zhuǎn)移率評(píng)分=次野鳶尾黃素轉(zhuǎn)移率/次野鳶尾黃素最高轉(zhuǎn)移率×70%；總皂苷提取率評(píng)分=水提總皂苷提取率/總皂苷最高含量×30%；綜合評(píng)分=次野鳶尾黃素轉(zhuǎn)移率評(píng)分+總皂苷含量評(píng)分[4]。

2.1.3 總皂苷提取率測(cè)定[5] 精密量取供試品溶液25 mL，用等倍量的乙醚（25 mL）萃取2次，棄去乙醚萃取液，下層藥液再用水飽和正丁醇萃取3次，每次25 mL，回收正丁醇萃取液后，105 ℃烘干至恒重?？傇碥展┰嚻窚y(cè)定：采用重量分析法，分析天平精密稱量其重量。

2.1.4 射干藥材中次野鳶尾黃素的含量測(cè)定 精密稱取射干粉末（過四號(hào)篩）0.1202 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.5 結(jié)果分析 從表2～5可知，各因素影響順序?yàn)椋篊>B>D>A，經(jīng)方差分析，提取時(shí)間、提取次數(shù)、加水量對(duì)提取均有顯著影響。并經(jīng)水提驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，結(jié)果穩(wěn)定、可靠。即最佳水提工藝為：A1B3C3D3。

2.1.6 水提工藝驗(yàn)證 按清咽口服液處方稱取藥材1000 g，選擇最佳水提工藝進(jìn)行提取，即加10倍量水，浸泡0.5 h，提取3次，每次2 h，濾過，合并濾液，減壓濃縮，蒸餾水定容至1 L。結(jié)果見表5。

2.2 醇沉工藝優(yōu)選[6-7]2.2.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 為最大限度除去雜質(zhì)，保留有效成分，減少患者的服用量，在濃縮的水提液中加適量的乙醇除去樹膠、淀粉、蛋白等雜質(zhì)。通過前期單因素考察結(jié)果，選擇醇沉溫度（A）、藥液濃度（B）、乙醇濃度（C）、靜置時(shí)間（D）四個(gè)主要影響因素進(jìn)行考察，每個(gè)因素各選擇3個(gè)水平，各因素水平見表6。按清咽口服液上述優(yōu)選最佳水提工藝進(jìn)行提取、濃縮，表7安排醇沉正交試驗(yàn)，靜置后的藥液過濾，醇沉藥液減壓回收至無乙醇味，蒸餾水定容。評(píng)價(jià)指標(biāo)次野鳶尾黃素含量測(cè)定、總皂苷的測(cè)定見“2.1.2.1、2.1.3”，醇沉供試品測(cè)定方法見2.2.2，結(jié)果見表7～9。

2.2.2 醇沉供試品制備方法 取處方量藥材1000 g，加10倍量水，浸泡0.5 h，提取3次，每次2 h，濾過，合并濾液，減壓濃縮，蒸餾水定容至1 L。按照表7醇沉工藝正交設(shè)計(jì)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，回收乙醇至無醇味，蒸餾水定容至100 mL，從中精密量取25 mL藥液，置分液漏斗中，加乙酸乙酯萃取4次，每次25 mL，搖勻，合并乙酸乙酯萃取液，用2%的鹽酸溶液25 mL洗滌1次，回收乙酸乙酯，甲醇定容至25 mL，以微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。按“2.1.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。計(jì)算結(jié)果見表6～8。

2.2.2 結(jié)果分析 從表7～9可知，各影響因素順序?yàn)椋篊>B>D>A，方差分析結(jié)果表明，B因素對(duì)醇沉結(jié)果有顯著性影響，A因素、C因素和D因素對(duì)結(jié)果無顯著影響，故最佳醇沉工藝為A2B1C3D1。

2.3 驗(yàn)證試驗(yàn) 按清咽口服液處方稱取藥材，最佳水提工藝進(jìn)行提取，即浸泡0.5 h，加10倍量水，提取3次，每次2 h，濾過，合并濾液，減壓濃縮，再按最佳醇沉工藝：藥液濃度1.0 g/mL，乙醇濃度為70%，15 ℃靜置12 h。結(jié)果見表10。

3 討論

咽炎屬于上呼吸道感染范疇，多為病毒感染，而現(xiàn)代醫(yī)學(xué)主要使用抗生素進(jìn)行治療，資料[8-9]表明，抗菌素既不能改變本病的病程和轉(zhuǎn)歸，也不能因此而有效地預(yù)防普通感冒的細(xì)菌性并發(fā)癥。隨著中醫(yī)藥現(xiàn)代化進(jìn)程的推進(jìn)，在傳統(tǒng)中藥基礎(chǔ)上研發(fā)的中藥新藥具有臨床療效好、起效時(shí)間快、服用方便、不良反應(yīng)少、價(jià)格優(yōu)廉等優(yōu)勢(shì)，同時(shí)體現(xiàn)了中醫(yī)辨證論治、同病異治的特色，發(fā)揮了中醫(yī)藥的特色優(yōu)勢(shì)。同時(shí)，由于中藥復(fù)方成分非常復(fù)雜，同一藥材在不同復(fù)方中可能作用不同。研究在工藝設(shè)計(jì)時(shí)根據(jù)組方的功能主治，針對(duì)每味中藥在組方中君臣佐使的地位，查閱文獻(xiàn)分析其所含的有效成分、藥理作用，充分考慮其合理性，再根據(jù)提取原理和預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，選擇適宜的準(zhǔn)備工藝路線。

清咽口服液處方中射干為君藥，含有次野鳶尾黃素，具有抗病毒、抗菌、消炎的作用[10]。通過控制君藥中的次野鳶尾黃素轉(zhuǎn)移率來考察制備工藝的可行性。此外，結(jié)合總皂苷轉(zhuǎn)移率（有效部位）進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，其原因在于中藥復(fù)方制劑是多方位、多靶點(diǎn)共同作用的藥物，通過射干中次野鳶尾黃素和有效部位總皂苷進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，使制劑的藥效和質(zhì)量得到保證。同時(shí)，增加對(duì)有效部位的控制，對(duì)企業(yè)的質(zhì)量檢查、質(zhì)量控制，降低經(jīng)濟(jì)成本。

在水提工藝和醇沉過程中，首先對(duì)影響提取、純化的各個(gè)因素進(jìn)行了單因素考察，確定各個(gè)因素的水平范圍，再采用正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)對(duì)各個(gè)因素的交互作用進(jìn)行考察，篩選出清咽口服液的最佳水提工藝為10倍量水，浸泡0.5 h，提取3次，每次2 h；最佳醇沉工藝為藥液濃度1.0 g/mL，乙醇濃度為70%，15 ℃靜置12 h。

參考文獻(xiàn)

[1]朱月香.評(píng)價(jià)射干麻黃湯加減治療慢性阻塞性肺疾病合并急性上呼吸道感染的效果[J].大家健康（中旬版），2016，10（9）：96.

[2]秦國偉.清解利感合劑主要藥效學(xué)研究[D].昆明：云南中醫(yī)學(xué)院，2012：1-45.

[3]國家藥典委員會(huì). 中華人民共和國藥典（一部） [M]. 北京： 中國醫(yī)藥科技出版社， 2010：267.

[4]王澤鋒，侯安國，李甲英，等. ZTC1+1Ⅲ絮凝澄清劑用于防感噴霧劑精制工藝的優(yōu)選研究[J]. 兒科藥學(xué)雜志，2011， 17（6）：44-46.

[5]侯安國，王澤鋒，李甲英，等. 水溶性殼聚糖用于防感噴霧劑的澄清工藝研究[J]. 兒科藥學(xué)雜志，2011， 17（5）：50-52.

[6]陳凌云，方波，陳兆蕊，等. 健脾止瀉顆粒水提醇沉工藝研究[J]. 云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)， 2010， 33（1）： 38-40.

[7]蔣掬月，蒙連瓊. 柴胡鎮(zhèn)咳片水提醇沉工藝考察[J].中國藥師， 2011， 14（8）： 1213-1215.

[8]趙偉，錢靜.慢性咽炎的中醫(yī)治療[J].中國民間療法，2010，18（10）：62.

[9]魏漢林，馬建偉，支艷，等.清咽湯治療急性咽炎療效觀察[J].湖北中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，14（2）：57.

[10]張蔭杰.射干現(xiàn)代藥理研究概況[C]//四川省生理科學(xué)會(huì)第十屆代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集，2011：1-6.