劉銀蘭，趙慧宇*，楊桂玲，黃茜斌，葉海萍

(1.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究所 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室(杭州)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥 殘留檢測(cè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 杭州 310021； 2.黃巖區(qū)農(nóng)業(yè)林業(yè)局，浙江 臺(tái)州 318020)

楊梅[Myricarubra(Lour.) S. et Zucc.]是我國(guó)特色水果之一，不僅具有觀賞價(jià)值和食用價(jià)值，而且富含纖維素、礦質(zhì)元素、維生素、糖類(lèi)、蛋白質(zhì)、脂肪、果膠，以及鈣、磷、鐵等元素，具有較好的藥用價(jià)值，深受消費(fèi)者喜愛(ài)[1-2]。楊梅在我國(guó)華東，以及湖南、貴州、廣東等地均有分布，我國(guó)總種植面積占全世界的99%[3]。楊梅采收前落果在較大程度上降低了果實(shí)的商品性和生產(chǎn)者的經(jīng)濟(jì)效益，影響了楊梅產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。楊梅果實(shí)自然脫落的內(nèi)在原因主要是脫落酸、吲哚乙酸、赤霉素等內(nèi)源激素的調(diào)控作用[4-5]，大風(fēng)、降雨[6]等天氣因素，以及果蠅和白腐病等病蟲(chóng)害因素[7-9]也是造成楊梅落果的重要原因。

2,4-滴鈉鹽，又名2,4-二氯苯氧乙酸鈉鹽，是一種選擇性?xún)?nèi)吸傳導(dǎo)激素型化學(xué)制劑，主要用作除草劑和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，是防止落果的常用農(nóng)藥。2,4-滴鈉鹽作為楊梅防落果劑使用已非常普遍，在成熟采收期噴施低濃度的2,4-滴鈉鹽，可以有效減輕采前落果造成的產(chǎn)量損失[10-11]。

對(duì)氯苯氧乙酸鈉是一種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，目前我國(guó)僅在番茄上登記。研究表明，對(duì)氯苯氧乙酸鈉可抑制作物體內(nèi)脫落酸的形成，致果柄間不易產(chǎn)生分離層，從而有效地減少落果、提高產(chǎn)量[12-13]。試驗(yàn)結(jié)果也顯示，對(duì)氯苯氧乙酸鈉處理可提高番茄坐果率[14-16]。

2016年，原農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室(杭州)從市場(chǎng)環(huán)節(jié)采集了來(lái)自云南、福建和浙江的共63批次的楊梅，監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示，2,4-滴鈉鹽和對(duì)氯苯氧乙酸鈉的檢出率分別為22.4%和25.4%，說(shuō)明2,4-滴鈉鹽和對(duì)氯苯氧乙酸鈉在楊梅主產(chǎn)區(qū)使用普遍。為此，特開(kāi)展2,4-滴鈉鹽和對(duì)氯苯氧乙酸鈉對(duì)楊梅防落果的藥效試驗(yàn)，旨在篩選出適用的防落果藥劑，并給出合理使用的準(zhǔn)則建議。

1 材料與方法

1.1 供試材料

LCMS 8050型液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀(LC-MS-MS)，GCMS 8040型氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀(GC-MS-MS)，日本島津公司；ST16R型離心機(jī)，賽默飛世爾公司；BSA2202S型電子天平，德國(guó)賽多利斯公司；漩渦混合器，美國(guó)Talboys公司；KQ5200E型超聲波清洗器，昆山舒美超聲儀器有限公司；MTN-5800型氮吹儀，天津奧特賽恩斯儀器有限公司。

2,4-D(純度98.6%)標(biāo)準(zhǔn)品(上海市農(nóng)藥研究所)、對(duì)氯苯氧乙酸鈉(純度98.0%)標(biāo)準(zhǔn)品(上海市農(nóng)藥研究所)，以甲醇為溶劑，將標(biāo)準(zhǔn)品配制成1 000 mg·L-1儲(chǔ)備液，置于0～4 ℃冰箱中保存。再將儲(chǔ)備液用甲醇配制成5.00 mg·L-1的工作液，置于0～4 ℃冰箱中保存。85% 2,4-滴鈉鹽可濕性粉劑、8%對(duì)氯苯氧乙酸鈉可濕性粉劑均購(gòu)自四川國(guó)光股份有限公司。

試驗(yàn)用楊梅品種系兩種代表性楊梅品種，東魁楊梅和荸薺楊梅。

1.2 處理設(shè)計(jì)

試驗(yàn)組1，2016年在浙江黃巖以東魁楊梅作為試驗(yàn)對(duì)象，噴藥后通過(guò)統(tǒng)計(jì)施藥前后每個(gè)枝條的果實(shí)數(shù)量(個(gè))計(jì)算落果率。具體地：選擇長(zhǎng)勢(shì)相同的楊梅樹(shù)，每3棵作為一組處理，分別在采收前40、30、15 d噴施3.3 mg·L-1的85% 2,4-滴鈉鹽或250 mg·L-1的8%對(duì)氯苯氧乙酸鈉，另在采收前15 d分別噴施5、10 mg·L-1的85% 2,4-滴鈉鹽，以及375、125 mg·L-1的8%對(duì)氯苯氧乙酸鈉，共10組處理。另取3棵作為空白對(duì)照組(CK)，噴施相同體積的水。分別在東南西北4個(gè)方向標(biāo)定側(cè)枝進(jìn)行調(diào)查，每側(cè)枝坐果枝條數(shù)不應(yīng)少于10個(gè)，分別于施藥前和采收前調(diào)查標(biāo)定枝上面的果實(shí)數(shù)量。每個(gè)處理隨機(jī)采集上、中、下、里、外等不同部位的生長(zhǎng)正常、無(wú)病害、成熟的樣品(不少于1 kg)，每個(gè)處理采集3個(gè)平行樣品，計(jì)算不同施藥條件下楊梅的落果率。

試驗(yàn)組2，2015年在江西峽江采用荸薺種楊梅作為試驗(yàn)對(duì)象，噴藥后通過(guò)統(tǒng)計(jì)單位面積(1 m2)的落果數(shù)量(個(gè))計(jì)算落果率。具體地：選擇長(zhǎng)勢(shì)相同的楊梅樹(shù)，每3棵作為一組處理，處理設(shè)計(jì)同試驗(yàn)1。另取3棵作為空白對(duì)照組(CK)，噴施相同體積的水。采收時(shí)統(tǒng)計(jì)每個(gè)處理組地面每平方米的落果數(shù)量(個(gè))。

1.3 殘留分析

1.3.1 樣品提取凈化

稱(chēng)取楊梅樣品15 g(精確到0.01 g)于50 mL離心管中，加入15 mL乙腈，用多管振蕩器2 500 r·min-1渦漩1 min，超聲提取20 min。向50 mL離心管中加入1.00 g氯化鈉、4.00 g無(wú)水硫酸鎂，渦旋1 min，8 000 r·min-1離心3 min。提前稱(chēng)取C180.30 g、PSA(前列腺特異抗原)0.30 g、無(wú)水硫酸鎂0.9 g于15 mL的離心管中，移取約5 mL上述提取液至15 mL凈化管中，渦漩1 min，8 000 r·min-1離心3 min，取1.00 mL凈化液過(guò)0.22 μm濾膜，待進(jìn)LC-MS-MS。準(zhǔn)確移取3 mL凈化液于10 mL刻度管中，氮吹至近干，用正己烷定容至3.0 mL，過(guò)0.22 μm濾膜，待進(jìn)GC-MS-MS。

1.3.2 高效液相色譜-質(zhì)譜條件

色譜柱：Kinetex 2.6 μm XB-C18100 A(100 mm×2.1 mm)；流動(dòng)相：0.1%甲酸、0.1%甲酸乙腈，二者體積比20∶80；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：2 μL；流動(dòng)相流速：0.25 mL·min-1。

質(zhì)譜條件：毛細(xì)管電壓4.0 kV(+)/3.0 kV(-)，霧化氣流量3.0 L·min-1，加熱氣流量10.0 L·min-1，加熱塊溫度400 ℃，進(jìn)樣口溫度250 ℃，接口溫度300 ℃，定量模式為MRM(多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式)，電離方式為負(fù)離子電噴霧電離(ESI)。離子條件(m/z)：2，4-D，定量離子對(duì)219.00/161.15，定性離子對(duì)219.00/125.10；對(duì)氯苯氧乙酸鈉，定量離子對(duì)185.00/126.95，定性離子對(duì)185.00/91.00。

2 結(jié)果與分析

2.1 防落果效果

如圖1所示，采前15 d施用10 mg·L-12,4-滴鈉鹽或250 mg·L-1對(duì)氯苯氧乙酸或375 mg·L-1對(duì)氯苯氧乙酸，對(duì)防治楊梅落果效果較好，單位面積落果數(shù)量分別為4、2和2個(gè)，明顯優(yōu)于對(duì)照區(qū)(11個(gè))。2016年在浙江黃巖開(kāi)展試驗(yàn)的結(jié)果(圖2)顯示，采前15 d施用10 mg·L-12,4-滴鈉鹽或375 mg·L-1對(duì)氯苯氧乙酸，防落果效果較好，落果率分別為13.4%和17.6%，明顯優(yōu)于對(duì)照區(qū)的34.0%。綜合2 a的試驗(yàn)結(jié)果，采前15 d施用10 mg·L-12,4-滴鈉鹽或375 mg·L-1對(duì)氯苯氧乙酸對(duì)防治楊梅落果效果較好。

圖1 2015年不同藥劑處理單位面積楊梅的落果數(shù)

圖2 2016年不同藥劑處理?xiàng)蠲返穆涔?/p>

2.2 生長(zhǎng)安全性

試驗(yàn)結(jié)果表明，采收前15 d施用375 mg·L-1的8%對(duì)氯苯氧乙酸鈉，具有理想的防楊梅落果的作用，且試劑消解迅速(3.1 d)，15 d后采收的楊梅均未檢出對(duì)氯苯氧乙酸鈉。采前15 d施用10 mg·L-1的85% 2,4-滴鈉鹽對(duì)防治楊梅落果同樣具有良好的效果，但當(dāng)施用劑量超過(guò)20 mg·L-1時(shí)，會(huì)對(duì)新葉片造成卷曲藥害(圖3)。

圖3 高劑量2,4-滴鈉鹽對(duì)楊梅新稍葉片的 藥害效果

2.3 殘留風(fēng)險(xiǎn)

根據(jù)“第四次中國(guó)總膳食研究”發(fā)布的不同年齡人群體重和水果消費(fèi)量數(shù)據(jù)[17]，和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 2763—2014中對(duì)2,4-滴、對(duì)氯苯氧乙酸鈉ADI(每日容許攝入量)的規(guī)定，基于文獻(xiàn)[18]中的方法，測(cè)算2,4-滴鈉鹽和對(duì)氯苯氧乙酸鈉的慢性膳食暴露風(fēng)險(xiǎn)。根據(jù)本試驗(yàn)確定的推薦施藥劑量，測(cè)算結(jié)果顯示：當(dāng)2,4-滴鈉鹽的施用濃度為10 mg·L-1、采收間隔期為15 d時(shí)，平均殘留量為0.05 mg·kg-1，慢性風(fēng)險(xiǎn)商為0.033 9%，顯示對(duì)兒童和成年人無(wú)慢性膳食暴露風(fēng)險(xiǎn)；當(dāng)對(duì)氯苯氧乙酸鈉的施用濃度為375 mg·L-1、采收間隔期為15 d時(shí)，樣品中未檢出試劑殘留，對(duì)兒童和成年人無(wú)慢性膳食暴露風(fēng)險(xiǎn)。

3 小結(jié)

針對(duì)楊梅落果問(wèn)題，開(kāi)展不同藥劑及其使用方法的篩選試驗(yàn)，結(jié)果顯示，采收前15 d施用375 mg·L-1的8%對(duì)氯苯氧乙酸鈉可溶性粉劑1次，具有理想的防落果作用，采收間隔期15 d時(shí)，楊梅上未檢出對(duì)氯苯氧乙酸鈉，對(duì)兒童和成年人無(wú)慢性膳食暴露風(fēng)險(xiǎn)，值得在生產(chǎn)中推廣應(yīng)用。采收前15 d施用2,4-滴鈉鹽對(duì)防治楊梅也具有較好的效果，但當(dāng)劑量超過(guò)20 mg·L-1時(shí)，容易造成新稍葉片藥害，因此在使用過(guò)程中應(yīng)該嚴(yán)格控制劑量(5～10 mg·L-1)，施用次數(shù)不超過(guò)1次。