周美潔 吳軍軍 吳敏珍 祝文堅(jiān) 梁宇

（廣西梧州市中心血站 廣西 梧州 543002）

2010年6月開始，國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委在全國(guó)進(jìn)行核酸檢測(cè)試點(diǎn)工作，以持續(xù)提高我國(guó)血站的血液篩查技術(shù)，確保臨床輸血的安全。2016年3月1日實(shí)施的《血站技術(shù)操作規(guī)程》（2015版）規(guī)定，核酸檢測(cè)正式納入到無(wú)償獻(xiàn)血者血液篩查的檢測(cè)方法中。作為ELISA法血液檢測(cè)的有益補(bǔ)充，NAT有效縮短了病毒檢測(cè)窗口期，降低輸血傳播傳播病原體的殘余風(fēng)險(xiǎn)，特別是對(duì)于隱匿性乙型肝炎病毒感染（OBI）的檢出發(fā)揮了重要作用[1]。我站于2014年12月開始對(duì)部分獻(xiàn)血者血液標(biāo)本進(jìn)行核酸檢測(cè)，2015年10月全面對(duì)獻(xiàn)血者血液進(jìn)行核酸篩查，本文對(duì)梧州地區(qū)2015年1月至2017年8月38496份無(wú)償獻(xiàn)血者血液核酸檢測(cè)HBV篩查結(jié)果進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

1.材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

收集2015年1月至2017年8月梧州市中心血站無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本38496人份，每次獻(xiàn)血者同時(shí)留取兩份血液標(biāo)本，分別用于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）和核酸檢測(cè)（NTA）。根據(jù)《血站技術(shù)操作規(guī)程》要求，核酸標(biāo)本需要在采集4h內(nèi)3500×g離心15min，2～8℃冰箱保存，72小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)，如因特殊情況72小時(shí)內(nèi)不能完成檢測(cè)的，離心后24小時(shí)內(nèi)在-20℃以下凍存。血液標(biāo)本的標(biāo)識(shí)、包裝和運(yùn)輸過(guò)程符合國(guó)家相關(guān)要求。

1.2 儀器與試劑酶免檢測(cè)儀器

TECAN SCHWEIZ公司全自動(dòng)酶免工作站TECAN FREEDOM EVOLYZER-2200；瑞士HAMILITON公司Microlab FAME全自動(dòng)酶聯(lián)檢測(cè)分析儀；核酸檢測(cè)儀器：美國(guó)諾華公司Procleix TIGRIS SYSTEM核酸檢測(cè)系統(tǒng)（轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的擴(kuò)增技術(shù)-TMA），美國(guó)CHIRON公司試劑孵育儀RPI，ELGA純處理水系統(tǒng)。ELISA檢測(cè)試劑：北京萬(wàn)泰乙肝表面抗原診斷試劑盒，珠海麗珠乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒；NAT試劑：美國(guó)諾華公司的HBV、HCV、HIV-1NAT試劑盒（TMA法）。所有試驗(yàn)試劑經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)，每批試劑經(jīng)過(guò)質(zhì)量抽檢，并進(jìn)行確認(rèn)合格后使用。

1.3 方法

對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者的標(biāo)本同步進(jìn)行酶免試驗(yàn)和核酸檢測(cè)。ELISA試驗(yàn)：由酶免實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員嚴(yán)格遵照實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程，采用2種不同的試劑對(duì)樣本進(jìn)行HBSAg檢測(cè)，結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：S/CO≥1為陽(yáng)性，判斷結(jié)果為不合格，對(duì)血液進(jìn)行隔離報(bào)廢；NAT檢測(cè)：由核酸實(shí)驗(yàn)室工作人員采用全自動(dòng)核酸檢測(cè)系統(tǒng)及配套試劑盒（TMA-化學(xué)發(fā)光法）對(duì)血液同步進(jìn)行HBV、HCV、HIV-1核酸聯(lián)合檢測(cè)，若血樣核酸聯(lián)合檢測(cè)呈陽(yáng)性反應(yīng)，且ELISA檢測(cè)HBSAg陽(yáng)性，則認(rèn)為核酸檢測(cè)HBV-DNA呈反應(yīng)性，不需繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)的核酸鑒別試驗(yàn)。對(duì)核酸聯(lián)合檢測(cè)呈反應(yīng)性而ELISA檢測(cè)HBSAg陰性的標(biāo)本進(jìn)行HBV、HCV、HIV-1核酸鑒別檢測(cè)，任一項(xiàng)呈反應(yīng)性，判斷為陽(yáng)性。留取HBV-DNA陽(yáng)性標(biāo)本血清1ml，送梧州市某三級(jí)醫(yī)院進(jìn)行乙肝血清標(biāo)志物五項(xiàng)檢測(cè)。對(duì)HBsAg陰性而HBV-DNA陽(yáng)性獻(xiàn)血者進(jìn)行隨訪，2個(gè)月后采集其血樣進(jìn)行HBsAg和HBV-DNA復(fù)檢，留取血清送檢乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物五項(xiàng)。在后續(xù)檢測(cè)中HBV-DNA持續(xù)陽(yáng)性，HBsAg發(fā)生陽(yáng)性轉(zhuǎn)化則定為HBV免疫“窗口期”；后續(xù)檢測(cè)HBsAg仍為陰性，而HBV-DNA持續(xù)陽(yáng)性和/或抗-HBc和/或抗-HBs陽(yáng)性，則定為“隱匿性”HBV感染。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

對(duì)本站38496份無(wú)償獻(xiàn)血者血液HBV篩查結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 同步進(jìn)行ELISA和NAT篩查的38496份無(wú)償獻(xiàn)血者血液中，采用血清學(xué)ELISA法檢測(cè)HBsAg陽(yáng)性，且HBV、HCV、HIV-1核酸聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性樣本共132例，占全部樣本的0.34%（132/38496），即血清學(xué)檢測(cè)乙型肝炎病毒的陽(yáng)性檢出率為0.34%；對(duì)271例ELISA結(jié)果為陰性、NAT聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的樣本進(jìn)行鑒別實(shí)驗(yàn)，HBV-DNA陽(yáng)性樣本數(shù)101例，占全部樣本的0.26%(101/38496)，即ELISA檢測(cè)乙型肝炎病毒的漏檢率2.6‰，病毒核酸檢測(cè)乙型肝炎病毒的陽(yáng)性檢出率為0.61%(233/38496)。兩種檢測(cè)方法HBV陽(yáng)性率比較見表1。

表1 兩種檢測(cè)方法HBV陽(yáng)性率比較

2.2 82 例初次酶免實(shí)驗(yàn)HBsAg陰性而核酸檢測(cè)HBV-DNA陽(yáng)性標(biāo)本送醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行乙型肝炎五項(xiàng)檢測(cè)（化學(xué)發(fā)光法），其中抗-HBc陽(yáng)性64例（占78.04%），抗-HBs陽(yáng)性34例（占41.46%），抗-HBe陽(yáng)性21例（25.61%占），HBeAg均為陰性，結(jié)果見表2。

表2 82例HBV-DNA陽(yáng)性標(biāo)本初次送檢乙肝五項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果

2.3 對(duì)22例初次酶免實(shí)驗(yàn)HBsAg陰性而核酸檢測(cè)HBV-DNA陽(yáng)性的獻(xiàn)血者進(jìn)行隨訪，2個(gè)月后追蹤檢測(cè)的結(jié)果顯示：16例追蹤樣本仍為HBV-DNA陽(yáng)性，判定為隱匿性乙肝；6例追蹤樣本檢測(cè)HBV-DNA陰性，懷疑初檢HBV-DNA假陽(yáng)性或病毒載量過(guò)低未檢出；未發(fā)現(xiàn)后續(xù)檢測(cè)中發(fā)生HBsAg陽(yáng)性轉(zhuǎn)化標(biāo)本。

3.討論

隱匿性乙肝感染是酶免檢測(cè)主要的漏檢原因之一[2]，大量證據(jù)表明，隱匿性HBV感染的血液可引起HBV經(jīng)輸血傳播[3]。目前，NAT技術(shù)在我國(guó)已經(jīng)全面覆蓋應(yīng)用到無(wú)償獻(xiàn)血者血液篩查中。通過(guò)本次研究發(fā)現(xiàn)：（1）我站完成38496份獻(xiàn)血者樣本中，血清學(xué)檢測(cè)乙型肝炎病毒的陽(yáng)性檢出率為0.34%，病毒核酸檢測(cè)乙型肝炎病毒的陽(yáng)性檢出率為0.61%；ELISA檢測(cè)乙型肝炎病毒的漏檢率2.6‰。核酸檢測(cè)HBV陽(yáng)性率與ELISA檢測(cè)陽(yáng)性率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），證實(shí)了核酸檢測(cè)可以很大程度上提高HBV的檢出率，降低了ELISA方法檢測(cè)漏洞的風(fēng)險(xiǎn)。（2）根據(jù)HBsAg陰性、核酸檢測(cè)HBV-DNA陽(yáng)性標(biāo)本乙型肝炎五項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果顯示，大多數(shù)抗-HBc為陽(yáng)性，建議在獻(xiàn)血者血液篩查中，血清學(xué)檢測(cè)增加抗-HBc項(xiàng)目，這樣可以在一定程度上降低乙肝病毒漏檢的風(fēng)險(xiǎn)。（3）在追蹤隨訪的樣本中，6例HBV-DNA后續(xù)檢測(cè)呈陰性反應(yīng)，懷疑部分標(biāo)本初次核酸檢測(cè)為假陽(yáng)性，也可能因?yàn)椴《緩?fù)制和表達(dá)水平過(guò)低或宿主方面等的因素導(dǎo)致病毒未能檢出；未發(fā)現(xiàn)后續(xù)檢測(cè)中發(fā)生HBsAg陽(yáng)性轉(zhuǎn)化標(biāo)本，即未發(fā)現(xiàn)HBV“窗口期”感染，可能酶免試劑的靈敏度、本次研究樣本量大小等因素有關(guān)，需持續(xù)提高檢測(cè)質(zhì)量，繼續(xù)對(duì)以后檢出陽(yáng)性樣本進(jìn)行追蹤檢測(cè)。

綜上所述，病毒核酸檢測(cè)應(yīng)用于無(wú)償獻(xiàn)血者乙型肝炎病毒篩查，可以提高不合格標(biāo)本的檢出率，有效降HBV經(jīng)輸血傳播的風(fēng)險(xiǎn)，進(jìn)一步保障了臨床輸血的安全性。