買(mǎi)占海,盧亞賓,沙婭?奴爾蘭,齊文靜,王德超,崔耀成,于維浩,況 玲
(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué),烏魯木齊830052;2.昭蘇縣西域馬業(yè)有限公司伊犁馬研究繁育中心,昭蘇 835600)
馬腺疫是由馬鏈球菌(Equine strangles streptococcus)馬亞種引起馬屬動(dòng)物的一種急性接觸性傳染病,屬于三類(lèi)動(dòng)物疫病,呈現(xiàn)散發(fā)性或地方流行性[1-3]。該病呈世界性分布,在新疆幾乎每年都要流行一次,其中馬駒最為易感,感染馬駒發(fā)病率達(dá)100%,直接影響幼駒生長(zhǎng)發(fā)育[4]。臨床常見(jiàn)有一過(guò)型腺疫、典型腺疫和惡性腺疫三種病型。臨床典型性癥狀為鼻黏膜急性卡他、體溫突然升高和頜下淋巴結(jié)急性炎性腫脹、化膿等。一過(guò)型腺疫病程1~3 d可自愈,典型腺疫患病馬初期體溫上升到39℃~40℃,頜下淋巴結(jié)急性炎性腫脹較硬,隨病情的發(fā)展表現(xiàn)為漿液性、膿性變化,病程為7~14 d[5]。而惡性腺疫患病馬病原菌由頜下淋巴結(jié)的化膿灶經(jīng)淋巴管或血液轉(zhuǎn)移到其他淋巴結(jié)及內(nèi)臟器官,造成全身癥狀?lèi)夯R驑O度衰弱或繼發(fā)膿毒敗血癥而引起死亡[6]。本研究采用病史調(diào)查、臨床檢查以及實(shí)驗(yàn)室診斷相結(jié)合的方式對(duì)2例患病馬匹進(jìn)行了確診,并采用中西醫(yī)結(jié)合的治療方法對(duì)其進(jìn)行治療。為今后馬腺疫臨床診斷和防治提供依據(jù)。
1.1 病例及藥品來(lái)源 2例患病馬匹來(lái)自新疆伊犁州昭蘇縣某牧民馬場(chǎng);馬的品種為純血馬與伊犁馬的雜交改良母馬駒。中草藥購(gòu)自昭蘇縣安泰平價(jià)大藥房;獸用常規(guī)西藥均購(gòu)自天馬獸藥店。
1.2 主要試劑與材料 淀粉培養(yǎng)基、THB培養(yǎng)基、3%H2O2試劑購(gòu)自北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司;快速革蘭氏染液、鏈球菌細(xì)菌生化編碼鑒定管A203購(gòu)自杭州天和微生物有限公司;胎牛血清購(gòu)自Hyclone公司。
1.3 病例診斷
1.3.1 病史調(diào)查及臨床檢查 病案一:2014年4月10日某牧民一匹9月齡雜交改良母馬駒,肌肉注射4支160萬(wàn)IU青霉素鈉,1次/d,連用3 d,治療無(wú)效。問(wèn)診:得知該患病馬所居馬舍曾有馬腺疫疫情,發(fā)病率及感染率較高,與其同舍飼喂的8匹馬駒也陸續(xù)出現(xiàn)流鼻涕,下頜淋巴結(jié)腫大等癥狀。視診:精神沉郁,食欲不振,流膿性鼻涕(圖1a)。觸診:左側(cè)下頜淋巴結(jié)腫大,堅(jiān)硬如雞蛋大小,右側(cè)肩前淋巴結(jié)腫大硬而呈鵝蛋大(圖1b),腹股溝淋巴結(jié)腫脹(圖1c),右后肢大腿外側(cè)腫脹(圖1d),如拳頭大小,較硬。常規(guī)檢查:體溫升高至39.9℃,呼吸10次/min,脈搏33次/min。
病案二:2014年1月18日某馬場(chǎng)一匹7月齡雜交改良公駒患病,160萬(wàn)IU青霉素鈉4支,磺胺嘧啶鈉注射液10 mL,靜脈推注,1次/d,連用2 d,但是治療效果不佳。問(wèn)診:得知病馬體質(zhì)較差,瘦弱,曾反復(fù)4次復(fù)發(fā)馬腺疫,每次發(fā)病間隔時(shí)間約2~3 w左右,最長(zhǎng)間隔時(shí)間為40 d均用西藥抗生素治療且治愈,但治愈后又復(fù)發(fā),與該馬同舍飼喂的32匹斷奶公馬駒中也出現(xiàn)患病癥狀。視診:精神沉郁,流黃色膿性鼻涕(圖1e),呼吸困難,食欲正常、體型偏瘦。觸診:左側(cè)下頜淋巴結(jié)腫大呈拳頭大小,咽下淋巴結(jié)及頸部腫大呈皮球大小,且堅(jiān)硬(圖1f)。常規(guī)檢查:體溫升高至40.3℃,呼吸11次/min,脈搏32次/min。
圖1 患病馬匹臨床癥狀Fig.1 Clinical symptoms of diseased horses
1.3.2 實(shí)驗(yàn)室診斷
1.3.2.1 細(xì)菌的分離鑒定 采集患病馬匹的膿汁、馬鼻拭子、陰道分泌物、全血樣品分別接種于10%犢牛血清 THB 培養(yǎng)基和含5%羊鮮血 THB 固體培養(yǎng)基上,37℃溫箱培養(yǎng) 24 h。
1.3.2.2 掃描電鏡檢測(cè) 分離純化的菌落形態(tài)穩(wěn)定,在電鏡下觀察菌株的具體形態(tài)。
1.3.2.3 PCR 檢測(cè) 使用細(xì)菌通用引物和常規(guī)PCR體系對(duì)病案1中病馬的鼻試子、下頜膿汁及病案2中病馬的鼻試子樣品菌株進(jìn)行細(xì)菌16S rDNA PCR檢測(cè),并對(duì)獲得的序列進(jìn)行克隆測(cè)序。
1.3.2.4 初步生化鑒定 將PCR鑒定陽(yáng)性菌株按照鏈球菌生化編碼鑒定手冊(cè)(GYZ-12ST)操作,對(duì)分離菌進(jìn)行生化試驗(yàn)驗(yàn)證[8,9],觀察鑒定管顏色變化,結(jié)合鑒定手冊(cè)判定結(jié)果。
1.4 治療 治療原則:抗菌消炎,清熱解毒、散瘀消腫、托里排膿、補(bǔ)虛健脾、利咽喉。 病案一,西藥治療:青霉素80萬(wàn)IU×10支、磺胺嘧啶鈉注射液10~20 mL,靜脈注射,連續(xù)用藥3 d;西藥停用后,采用中藥透膿散加減:黃芪12 g、川芎10 g、當(dāng)歸5 g、皂角刺5 g、金銀花10 g、茯苓5 g、陳皮5 g、黨參5 g、山甲(炒末)3 g進(jìn)行治療,一劑/d內(nèi)服,外敷用魚(yú)石脂軟膏涂抹腫脹處,連用5 d至膿破潰。病案二,西藥治療:一次性靜脈注射(0.9%氯化鈉注射液500 mL、頭孢曲松鈉4 g、10%葡萄糖注射液500 mL,磺胺嘧啶鈉、維生素B12、復(fù)合維生素B各10 mL,10%葡萄糖酸鈣注射液500 mL,)并再安乃近10 mL肌肉注射,體溫恢復(fù)正常38.7℃;停用西藥7 d后,中藥用透膿散加減:黃芪12 g、川芎10 g、當(dāng)歸5 g、皂角刺2 g、金銀花10 g、茯苓10 g、陳皮10 g、黨參5 g、山甲(炒末)3 g,連喂7 d,全身膿腫均破潰,此后未見(jiàn)病情復(fù)發(fā)。
2.1 細(xì)菌的分離鑒定結(jié)果 采集的樣品接種在含10%犢牛血清的THB固體培養(yǎng)基中細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢,而在含5%綿羊血的THB固體培養(yǎng)基中分別出現(xiàn)型溶血現(xiàn)象,呈露珠狀小菌落,周?chē)纬赏耆该鞯娜苎h(huán)(圖2A,圖2B)。挑取單個(gè)菌落經(jīng)革蘭氏染色,顯微鏡下觀察到革蘭氏陽(yáng)性鏈球菌,呈長(zhǎng)鏈狀排列(圖2C)。
圖2 馬鏈球菌的分離培養(yǎng)與鑒定Fig.2 Identification and culture of Equine strangles strepotococcus
2.2 電鏡掃描檢測(cè) 純化的菌株在電鏡下呈現(xiàn)長(zhǎng)鏈狀(圖3A),長(zhǎng)橢圓形,無(wú)鞭毛(圖3B)。
2.3 PCR 檢測(cè)結(jié)果 使用細(xì)菌通用引物和常規(guī)PCR體系對(duì)病案1中病馬的鼻試子、下頜膿汁及病案2中病馬的鼻試子樣品進(jìn)行細(xì)菌16S rDNA PCR檢測(cè)。結(jié)果顯示,在1500 bp左右均出現(xiàn)明顯的目的條帶,見(jiàn)圖4。經(jīng)測(cè)序鑒定感染菌株為馬鏈球菌,并將鑒定陽(yáng)性的菌株命名為ZS-1、ZS-2、ZS-3。
圖3 電鏡下菌株形態(tài)Fig.3 Electron microscopic observation on the morphology of strain
圖4 16S rDNA PCR 鑒定結(jié)果Fig.4 PCR results for 16S rDNA
2.4 生化鑒定結(jié)果 根據(jù)細(xì)菌生化GYZ-12st編碼鑒定手冊(cè)鑒定鏈球菌,認(rèn)定指數(shù)接近100%,證實(shí)結(jié)果可靠。由此,進(jìn)一步證實(shí)病案1和病案2中的馬均患惡性馬腺疫。
2.5 治療效果 病案一:西藥停用后,內(nèi)服中藥,用藥d3時(shí),下頜淋巴結(jié)及肩前淋巴結(jié)膿腫破潰,體溫40.1℃;用藥d4時(shí)大腿處膿腫破潰,體溫39.5℃;用藥d5時(shí),腹股溝淋巴結(jié)處膿腫破潰,體溫38.9℃,病情基本恢復(fù),食欲增強(qiáng)。病案二:治療d3時(shí),馬駒精神恢復(fù)正常,食欲增強(qiáng);治療d5,體溫恢復(fù)正常(38.7℃),左側(cè)下頜淋巴結(jié)膿腫破潰,咽部膿腫變軟;d7時(shí),后咽下淋巴結(jié)破潰;d15時(shí)后傷口愈合,此后未見(jiàn)病情復(fù)發(fā)。
表1 鏈球菌GYZ-12st編碼鑒定結(jié)果Table 1 Streptococcus GYZ-12st code identification results
在昭蘇縣,馬腺疫一般發(fā)生于秋末及寒冬季節(jié),春夏兩季偶爾也會(huì)發(fā)生,其主要感染當(dāng)歲馬駒,尤其是 6 月齡 ~ 1 歲馬駒,斷奶后多發(fā),舍飼馬發(fā)病率高于放牧或散養(yǎng)馬匹,主要侵蝕馬駒免疫系統(tǒng),造成全身感染,感染后的馬駒產(chǎn)生抗體后一般不會(huì)復(fù)發(fā),體質(zhì)較差,未產(chǎn)生抗體的馬匹容易反復(fù)發(fā)作,影響馬駒生長(zhǎng)發(fā)育。
病案一和病案二中馬駒均在斷奶后發(fā)病,臨床表現(xiàn)精神沉郁,體溫升高,流膿性鼻涕,下頜淋巴結(jié)腫大,咽下淋巴結(jié),肩前淋巴結(jié),腹股溝淋巴結(jié)呈不同程度的腫大。由于應(yīng)用抗生素治療藥物劑量不足,導(dǎo)致治療效果不理想。本病案中,將磺胺嘧啶鈉和青霉素鈉劑量加大治療,其效果作為確診的診斷依據(jù)之一。這實(shí)際上是治療性診斷的一種,也是獸醫(yī)臨床實(shí)踐中常用的方法?;前粪奏もc為磺胺類(lèi)抗生素藥物,馬腺疫爆發(fā)時(shí)短期應(yīng)用,效果較好。長(zhǎng)期應(yīng)用會(huì)出現(xiàn)磺胺藥中毒癥狀,因此只能按推薦濃度連用 3 d,最多不得超過(guò)5 d。本研究發(fā)現(xiàn)中草藥透膿散對(duì)于治療馬腺疫具有很好的療效?!锻改撋ⅰ肥侵耐饪仆蟹ㄖ械闹尾鲎悦鞔t(yī)家陳實(shí)功的《外科正宗》[10]。使用復(fù)方托里透膿散,具有托毒排膿功效,其復(fù)方中草藥具有補(bǔ)益氣血的作用,主要醫(yī)治癰疽內(nèi)膿已經(jīng)形成了但是其不能迅速破潰的患者,其中方劑中的穿山甲和皂角刺兩味藥相同功效在于攻堅(jiān)消腫和透膿外達(dá),歸尾與川芍兩味藥相配伍具有養(yǎng)血活血以及扶助正氣的功效[11]。本研究采用托里透膿散進(jìn)行治療,膿腫部位迅速成熟破潰,創(chuàng)口迅速愈合達(dá)到了患馬治療效果,預(yù)后良好,為今后治療馬腺疫提供參考依據(jù)。