蘇艷瑩 雷小小 桂卉 夏新華 周莉莉

中圖分類號 R350.35 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號 1001-0408（2018）19-2612-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.19.05

摘 要 目的：優(yōu)化山茱萸總環(huán)烯醚萜苷脂質(zhì)體的制備工藝，并對其進(jìn)行表征。方法：采用逆相蒸發(fā)法制備山茱萸總環(huán)烯醚萜苷脂質(zhì)體。采用高效液相色譜法測定山茱萸總環(huán)烯醚萜苷脂質(zhì)體中馬錢苷和莫諾苷含量。以總皂苷（以馬錢苷和莫諾苷總和計）包封率為指標(biāo)，通過單因素試驗篩選制備山茱萸總環(huán)烯醚萜苷脂質(zhì)體的主要工藝因素后，采用星點設(shè)計-效應(yīng)面法優(yōu)化藥物與磷脂的質(zhì)量比（藥脂比）、膽固醇與磷脂的質(zhì)量比（膽脂比）和水合介質(zhì)pH值。利用達(dá)爾文激光粒徑測定儀測定最優(yōu)處方下所制脂質(zhì)體的Zeta電位和粒徑，并在透射電鏡下觀察其形態(tài)。結(jié)果：確定最優(yōu)處方的藥脂比為0.026、膽脂比為0.107、水合介質(zhì)pH為5.78。所制3批脂質(zhì)體的平均包封率為11.63%（n=3），與預(yù)測值11.48%的相對誤差為1.29%；平均粒徑為（80.87±0.27） nm，Zeta電位為（-13.60±5.32） mV，脂質(zhì)體外觀呈球形或類球形。結(jié)論：優(yōu)化后山茱萸總環(huán)烯醚萜苷脂質(zhì)體制備工藝簡單，所制脂質(zhì)體粒徑較小。

關(guān)鍵詞 星點設(shè)計-效應(yīng)面法；山茱萸總環(huán)烯醚萜苷；脂質(zhì)體；逆相蒸發(fā)法；制備工藝

ABSTRACT OBJECTIVE： To optimize the preparation technology of Total iridoid glycosides liposome of Cornus officinalis， and to characterize it. METHODS： Total iridoid glycosides liposome of C. officinalis was prepared by reverse phase evaporation method. The contents of loganin and morroniside in Total iridoid glycosides liposome of C. officinalis were determined by HPLC. Using encapsulation rate of total saponins （total contents of loganin and morroniside） as index， main technology factors for the preparation of Total glycosides liposome of C. officinalis were screened by single factor test； the ratio of drug to phospholipid （drug-lipid ratio）， ratio of choline to phospholipid （choline-lipid ratio）， pH of hydration medium were optimized by central composite design-response surface methodology. The Zeta potential and particle size of liposome prepared by optimal prescription were determined by using Darwin laser particle size analyzer. The morphology of liposome was observed by TEM. RESULTS： The optimal prescription included that drug-lipid ratio was 0.026； cholesterol-lipid ratio was 0.107； pH of hydration medium was 5.78. The average encapsulation efficiency of liposome was 11.63% （n=3）， the relative error of prediction value 11.48% is 1.29%， the average particle size was （80.87±0.27） nm， and Zeta potential was （-13.60±5.32） mV. It was spherical or spherical-like. CONCLUSIONS： The optimized technology of Total iridoid glycosides liposome of C. officinalis is simple， and prepared liposome has small particle size.

KEYWORDS Central composite design-response surface methodology； Total iridoid glycosides of Cornus officinalis； Liposome； Reverse phase evaporation method； Preparation technology

山茱萸具有補益肝腎、收斂固澀的功效[1]，是常用的補肝腎中藥。環(huán)烯醚萜苷類成分是其主要活性成分，其中含量最高的是馬錢苷和莫諾苷[2-3]?，F(xiàn)代藥理研究證明，山茱萸總環(huán)烯醚萜苷可通過抑制Tau蛋白過度磷酸化而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用[4-5]，同時增強膽堿能系統(tǒng)功能，對阿爾茨海默病等神經(jīng)退行性疾病具有良好的治療效果[6]。但山茱萸總環(huán)烯醚萜苷水溶性大、血腦屏障透過率低，限制了其臨床應(yīng)用[7-8]。脂質(zhì)體（Liposome）由磷脂和膽固醇組成，可以提高水溶性藥物的穩(wěn)定性，改變藥物在體內(nèi)的分布，增強藥物的靶向性。本研究擬將山茱萸總環(huán)烯醚萜苷用脂質(zhì)體包載，通過星點設(shè)計-效應(yīng)面法優(yōu)化山茱萸總環(huán)烯醚萜苷脂質(zhì)體的制備工藝，為山茱萸總環(huán)烯醚萜苷的進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用提供參考。

1 材料

1.1 儀器

1525-Breeze2高效液相色譜（HPLC）儀（美國Waters公司）；Scientz -ⅡD新芝超聲波細(xì)胞粉碎機（寧波市上海京工實業(yè)有限公司）；HH-4智能數(shù)顯恒溫水浴鍋、RE- 20000B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）；CP114電子天平[奧豪斯儀器（上海）有限公司]；Mastersizer 3000E馬爾文激光粒徑測定儀（英國馬爾文公司）；JEM-F200透射電鏡（日本電子株式會社）。

1.2 藥品與試劑

山茱萸藥材[湖南三湘中藥飲片有限公司，批號：2016062806，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室周日寶教授鑒定為山茱萸科植物山茱萸（Cornus officinalis Sieb. etZucc）的干燥成熟果肉]；馬錢苷對照品、莫諾苷對照品（上海源葉生物科技有限公司，批號：R23D7F27552、Y08N7Y155，純度：經(jīng)HPLC測定分別≥98%、≥97%）；大豆卵磷脂Lipoid S100（德國Lipoid公司）；膽固醇（上?；瘜W(xué)試劑有限公司）；聚乙二醇辛基苯基醚（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，表面活性劑）；甲醇為色譜純，水為蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 山茱萸總環(huán)烯醚萜苷的提取與純化

稱取山茱萸藥材粉末（過80目篩） 5 g，置于圓底燒瓶中，加入適量10%乙醇，在95 ℃條件下加熱回流提取2 h，收集提取液。將提取液用石油醚、乙醚依次萃取數(shù)次后，取水部位，再用水飽和的正丁醇萃取水部位數(shù)次，收集正丁醇部分，經(jīng)大孔樹脂純化后，測得提取物中馬錢苷和莫諾苷的含量分別為24.70、73.50 mg/g。

2.2 脂質(zhì)體混懸液的制備

2.2.1 山茱萸總環(huán)烯醚萜苷脂質(zhì)體混懸液 采用逆相蒸發(fā)法。取適量磷脂與膽固醇，精密稱定，置于250 mL茄瓶中，加入適量三氯甲烷，在40 kHz、200 W的條件下超聲溶解30 min，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在設(shè)定的溫度下減壓除去有機溶劑，至茄型瓶內(nèi)壁形成脂質(zhì)薄膜（作為油相），確保磷脂和膽固醇緊密接觸后，加入乙醚3 mL、純化后的山茱萸總環(huán)烯萜苷適量及相應(yīng)pH值的磷酸鹽緩沖液（PBS，作為水相），超聲水合一定時間，直到形成穩(wěn)定的水包油（W/O）乳劑。將該W/O乳劑于室溫下減壓除去有機溶劑，至形成混懸液，通氮氣進(jìn)一步除去有機溶劑后，探頭超聲（超聲時間2 s、停2 s、功率為100 W）處理10 min，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，即得山茱萸總環(huán)烯醚萜苷脂質(zhì)體混懸液。

2.2.2 空白脂質(zhì)體混懸液 同“2.2.1”項下方法制備不加山茱萸總環(huán)烯萜苷的空白脂質(zhì)體混懸液。

2.3 馬錢苷、莫諾苷含量測定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：Kromasil 100-5-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：0.1%磷酸溶液-甲醇（72 ∶ 28， V/V）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：240 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2.3.2 溶液的制備 （1）對照品溶液的制備：取馬錢苷對照品11.50 mg、莫諾苷對照品11. 80 mg，精密稱定，分別置于不同25 mL量瓶中，用80%甲醇溶液溶解并定容，搖勻， 用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，即得馬錢苷對照品溶液（0.46 mg/mL）和莫諾苷對照品溶液（0.47 mg/mL）。（2）供試品溶液的制備：精密量取載藥脂質(zhì)體混懸液1.0 mL至10 mL量瓶中，加10%聚乙二醇辛基苯基醚無水乙醇溶液破乳并定容至刻度，振搖，即得。

2.3.3 專屬性考察 精密吸取馬錢苷對照品溶液、莫諾苷對照品溶液、破乳后的載藥脂質(zhì)體混懸液（加10%聚乙二醇辛基苯基醚無水乙醇溶液破乳）和破乳后的空白脂質(zhì)體溶液（加10%聚乙二醇辛基苯基醚無水乙醇溶液破乳）各10 μL，按“2.3.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定，并記錄色譜。結(jié)果，馬錢苷和莫諾苷對照品溶液峰型較好，供試品溶液中雜質(zhì)峰與馬錢苷、莫諾苷峰的分離度>1.5，分離較好，雜質(zhì)不影響主要成分的檢測，提示色譜條件滿足供試品分析，專屬性較好。色譜圖見圖1。

2.3.4 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.3.2（1）”項下馬錢苷對照品溶液0.10、0.50、1.00、5.00、10.00 mL，分別置于不同10 mL量瓶中，加80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別按“2.3.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定，并記錄色譜。以峰面積為縱坐標(biāo)（y）、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x）進(jìn)行線性回歸，并同法繪制莫諾苷標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果，馬錢苷回歸方程為y=2×107x+396 628（r=0.999 9）；莫諾苷回歸方程為y=2×107x+116 931（r=0.999 9）。結(jié)果表明，馬錢苷在質(zhì)量濃度為4.60～460 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，莫諾苷在質(zhì)量濃度為4.70～470 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.3.5 精密度考察 分別精密吸取馬錢苷對照品溶液（0.46 μg/mL）和莫諾苷對照品溶液（0.47 μg/mL）各0.1 mL，置于不同10 mL量瓶中，分別用80%甲醇溶液稀釋并定容，備用。精密吸取稀釋后馬錢苷對照品和莫諾苷對照品溶液各10 μL，按“2.3.1”項下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜。結(jié)果，馬錢苷峰面積的RSD為1.6%（n=6），莫諾苷峰面積的RSD為1.6%（n=6），說明儀器的精密度良好。

2.3.6 穩(wěn)定性考察 分別精密移取馬錢苷對照品溶液（0.46 mg/mL）、莫諾苷對照品溶液（0.47 mg/mL）和供試品溶液適量，過0.45 μm微孔濾膜，在室溫條件下放置0、2、4、8、12 h后，按“2.3.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定，并記錄色譜。結(jié)果，馬錢苷和莫諾苷對照品峰面積的RSD分別為1.0%、1.7%（n=5），供試品中馬錢苷和莫諾苷峰面積的RSD分別為2.5%、2.5%（n=5），表明對照品溶液和供試品溶液均在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，能滿足測定需要。

2.3.7 加樣回收試驗 精密量取空白脂質(zhì)體混懸液0.4 mL，共9份，置于不同10 mL量瓶中，分別加入質(zhì)量濃度為0.46 mg/mL的馬錢苷對照品溶液和質(zhì)量濃度為0.47 mg/ mL的莫諾苷對照品溶液各0.6、0.5、0.4 mL，每個濃度平行3份，用10%聚乙二醇辛基苯基醚無水乙醇溶液破乳并定容至刻度，然后按“2.3.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定，并計算加樣回收率。結(jié)果，馬錢苷高、中、低加樣量的平均回收率分別為98.93%、100.36%、99.55%，RSD分別為1.84%、2.01%、3.33%（n=3）；莫諾苷高、中、低加樣量的平均回收率分別為99.99%、98.97%、97.64%，RSD分別為1.69%、1.24%、0.62%（n=3），表明試驗的準(zhǔn)確度較好。

2.4 山茱萸總環(huán)烯醚萜苷脂質(zhì)體包封率的測定

采用高速離心法分離脂質(zhì)體及游離藥物后計算包封率。精密量取山茱萸總環(huán)烯醚萜苷脂質(zhì)體混懸液1 mL，置于10 mL量瓶中，加10%聚乙二醇辛基苯基醚無水乙醇溶液破乳并稀釋至刻度，過0.45 μm微孔濾膜，然后按“2.3.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定馬錢苷和莫諾苷含量即加入的總的藥物含量（c0）。另精密量取1 mL載藥脂質(zhì)體混懸液至離心管中，離心（16 000 r/min，30 min），分離上清液和沉淀，沉淀加10%聚乙二醇辛基苯基醚無水乙醇溶液溶解破乳并定容至10 mL，過0.45 μm微孔濾膜，得到破乳后的載藥脂質(zhì)體溶液，然后按“2.3.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定其中馬錢苷和莫諾苷含量，即為包封在脂質(zhì)體中藥物的含量（c1）。根據(jù)下式計算包封率（EE，%）：EE（%）=c1/c0×100%。

2.5 單因素試驗

根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報道[9-10]，在脂質(zhì)體制備過程中，藥物與磷脂的質(zhì)量比（簡稱藥脂比）、膽固醇與磷脂的質(zhì)量比（簡稱膽脂比）、油相與水相體積比（簡稱油水比）、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度、水合介質(zhì)pH和水合時間等因素會影響藥物的包封率。因此，本研究對上述6個因素進(jìn)行單因素考察。并采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件對包封率結(jié)果進(jìn)行方差分析，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.5.1 藥脂比 固定油水比為3，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度30 ℃，膽脂比為0.062 5，水合介質(zhì)pH 6.5，PBS水合時間1.0 h，考察不同藥脂比（0.01、0.02、0.04、0.08）對山茱萸總環(huán)烯醚萜苷包封率的影響。結(jié)果，當(dāng)藥脂比為0.01、0.02、0.04、0.08時，山茱萸總環(huán)烯醚萜苷的包封率分別為8.4%、10.3%、6.3%、2.9%（P<0.001），說明藥脂比對包封率的影響顯著，且以藥脂比為0.02時包封率最高。故以藥脂比0.02為中心點設(shè)計星點設(shè)計-效應(yīng)面試驗進(jìn)一步優(yōu)化。

2.5.2 膽脂比 固定藥脂比為0.02，油水比為3，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度為30 ℃，水合介質(zhì)pH為6.5，PBS水合時間為1.0 h，考察不同膽脂比（0.062 5、0.125、0.25、0.5）對山茱萸總環(huán)烯醚萜苷包封率的影響。結(jié)果，當(dāng)膽脂比為0.062 5、0.125、0.25、0.5時，山茱萸總環(huán)烯醚萜苷包封率分別為10.2%、9.8%、6.8%、4.3%（P<0.01），說明膽脂比對包封率的影響顯著，且以膽脂比為0.125時包封率最高。故以膽脂比0.125為中心點設(shè)計星點設(shè)計-效應(yīng)面試驗進(jìn)一步優(yōu)化。

2.5.3 油水比 固定藥脂比為0.02，旋蒸溫度為30 ℃，膽脂比為0.062 5，水合介質(zhì)pH為6.5，PBS水合時間為1.0 h，考察不同油水比（0.5、1、2、3）對山茱萸總環(huán)烯醚萜苷包封率的影響。結(jié)果，當(dāng)油水比為0.5、1、2、3時，山茱萸總環(huán)烯醚萜苷包封率分別為3.2%、3.3%、3.3%、3.5%（P=0.043），說明油水比對包封率也有一定影響，但暫不納入星點設(shè)計-效應(yīng)面試驗中。

2.5.4 水合介質(zhì)pH 固定藥脂比為0.02，油水比為3，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度為30 ℃，膽脂比為0.062 5，PBS水合時間為1.0 h，考察不同水合介質(zhì)pH值（5、6.5、8、9.5）對山茱萸總環(huán)烯醚萜苷包封率的影響。結(jié)果，當(dāng)水合介質(zhì)pH為5、6.5、8、9.5時，測得的山茱萸總環(huán)烯醚萜苷包封率分別為6.3%、9.3%、3.4%、1.2%（P<0.001），說明水合介質(zhì)pH值對包封率的影響顯著，且以pH為6.5時包封率最高。故以pH 6.5為中心點設(shè)計星點設(shè)計-效應(yīng)面試驗進(jìn)一步優(yōu)化。

2.5.5 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度 固定藥脂比為0.02，油水比為3，膽脂比為0.062 5，水合介質(zhì)pH為6.5，PBS水合時間為1.0 h，考察不同旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度（20、30、40、50 ℃）對山茱萸總環(huán)烯醚萜苷包封率的影響。結(jié)果，當(dāng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度為20、30、40、50 ℃時，山茱萸總環(huán)烯醚萜苷的包封率分別為2.9%、3.1%、2.9%、2.8%（P>0.05），說明旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度對包封率的影響較小。

2.5.6 PBS水合時間 固定藥脂比為0.02，油水比為3，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度為30 ℃，膽脂比為0.062 5，水合介質(zhì)pH為6.5，考察不同PBS水合時間（0.5、1.0 、1.5、2.0 h）對山茱萸總環(huán)烯醚萜苷包封率的影響。結(jié)果，當(dāng)水合時間為0.5、1.0 、1.5、2.0 h時，山茱萸總環(huán)烯醚萜苷的包封率分別為3.0%、3.3%、3.0%、2.9%（P=0.07），說明PBS水合時間對包封率的影響較小。

2.6 星點設(shè)計-效應(yīng)面法優(yōu)化山茱萸總環(huán)烯醚萜苷脂質(zhì)體的制備工藝

2.6.1 星點試驗設(shè)計 根據(jù)單因素試驗結(jié)果，設(shè)定藥脂比（X1）、膽脂比（X2）、水合介質(zhì)pH（X3）為變量，以山茱萸總環(huán)烯醚萜苷包封率（Y）為指標(biāo)進(jìn)行3因素5水平（-α、 -1、0、+1、+α）的設(shè)計（α=1.732）。因素與水平見表1，試驗安排及結(jié)果見表2。

2.6.2 方程擬合 采用Design-Expert 10.0軟件對各因素進(jìn)行回歸分析，得到多元二次回歸模型為Y=10.16+1.59X1-0.73X2-2.13X3-0.47X1X2-0.57X1X3+0.05X2X3- 1.85X12-1.85X22-1.73X32（R2=0.958 6），計算出模型Y失擬項的平方和為1.84，P=0.721 9>0.05，表明本模型沒有失擬現(xiàn)象，可用于山茱萸環(huán)烯醚萜苷脂質(zhì)體處方的分析和預(yù)測。方差分析結(jié)果見表3。

由表3可知，試驗?zāi)Ｐ途哂懈叨蕊@著性（P<0.001），X1、X2、X3對山茱萸總苷包封率影響均顯著（P<0.05），交互項X1X2、X1X3、X2X3的P值均大于0.05，說明這3個因素間的交互作用不大。

2.6.3 效應(yīng)面分析 設(shè)定1個因素為中值，以Design- Expert 10.0軟件分別繪制其他2個因素對脂質(zhì)體包封率的3D效應(yīng)圖。結(jié)果顯示，包封率隨著藥脂比的增加而變大，隨著膽脂比的增加而變小，隨著水合介質(zhì)pH的增加而變小，各因素對包封率的響應(yīng)面圖見圖2。

2.6.4 效應(yīng)面優(yōu)化和預(yù)測 在滿足脂質(zhì)體包封率最大化條件下，利用Design-Expert 10.0軟件優(yōu)化處方，得到最優(yōu)處方為藥脂比為0.026、膽脂比為0.107、水合介質(zhì)pH為5.78。

2.6.5 驗證試驗 按最優(yōu)處方制備3批山茱萸總環(huán)烯醚萜苷納米脂質(zhì)體，測定山茱萸總環(huán)烯醚萜苷的包封率。結(jié)果，3批脂質(zhì)體包封率分別為11.35%、11.69%、11.86%（RSD=2.23%），平均包封率為11.63%，與預(yù)測值11.48%的相對誤差為1.29%，低于5%，說明采用效應(yīng)面分析得到的工藝準(zhǔn)確可靠。

2.7 山茱萸總環(huán)烯醚萜苷脂質(zhì)體的表征

2.7.1 粒徑與Zeta電位 取最優(yōu)處方制備的山茱萸總環(huán)烯醚萜苷脂質(zhì)體混懸液40 μL，加水稀釋，用激光粒徑分析儀測定其粒徑和Zeta電位。結(jié)果，脂質(zhì)體平均粒徑為（80.87±0.27） nm，Zeta電位為（-13.60±5.32） mV。

2.7.2 透射電鏡下形態(tài)觀察 取山茱萸總環(huán)烯醚萜苷脂質(zhì)體混懸液，滴加于銅片上，在透射電鏡下觀察其形態(tài)。結(jié)果，所制脂質(zhì)體多為球形及類球形，外觀圓整，粒徑較小，分布均勻。透射電鏡圖見圖3。

3 討論

脂質(zhì)體有多種制備方法，如薄膜分散法、乙醇注入法、逆相蒸發(fā)法等。其中，薄膜分散法對脂溶性藥物往往有較高的包封率，但所制脂質(zhì)體粒徑較大；乙醇注入法的影響因素不可控，較難產(chǎn)業(yè)化[9，11]；逆相蒸發(fā)法適合包裹親水性藥物[12-13]。前期預(yù)試驗發(fā)現(xiàn)，采用薄膜分散法和乙醇注入法制備的山茱萸總環(huán)烯醚萜苷脂質(zhì)體穩(wěn)定性較差，易出現(xiàn)沉淀，且山茱萸總環(huán)烯醚萜苷為親水性藥物，故最終本研究選擇逆相蒸發(fā)法制備山茱萸總環(huán)烯醚萜苷脂質(zhì)體。

筆者在研究過程中發(fā)現(xiàn)，通過逆相蒸發(fā)法制備的脂質(zhì)體，其粒度與分布與其處方組成和工藝條件密切相關(guān)。故在制備油相時，先將脂質(zhì)溶于三氯甲烷中，后旋蒸將其除盡，目的是為了確保磷脂與膽固醇緊密結(jié)合。在加入有機溶劑成乳時，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的真空度對成功制備脂質(zhì)體至關(guān)重要，通過控制旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的真空度避免氣泡或沸騰，可制備較小粒徑的脂質(zhì)體。此外，有機溶劑的殘留也會影響脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，故旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收有機溶劑后采取通入惰性氣體氮氣除去痕量的有機溶劑。

在藥物制劑的處方和制劑工藝的篩選中，常常需要考察多個影響因素并進(jìn)行優(yōu)化。當(dāng)因素和水平較多時，需要考慮采用次數(shù)較少、精度較高的試驗設(shè)計優(yōu)化方案。其中以正交試驗設(shè)計、均勻設(shè)計最為常用，基本能滿足一般試驗要求，但試驗精度不高，最佳點的取值僅僅限定于試驗所設(shè)定的水平值，不能很好地考察各因素之間的相互作用，而星點設(shè)計可以克服上述缺點。本研究在前期山茱萸提取純化工藝的基礎(chǔ)上，將得到的有效成分山茱萸總環(huán)烯醚萜苷制成脂質(zhì)體，通過透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，所制脂質(zhì)體的外觀圓整，且粒徑較小、分布均勻，然而本研究所制脂質(zhì)體的包封率不夠高，筆者分析可能存在如下原因：磷脂頭部具有磷酸根離子和季銨鹽離子，由于山茱萸總環(huán)烯醚萜苷的穩(wěn)定性不好，導(dǎo)致其在磷脂雙分子內(nèi)相不易保留，在儲藏或高速離心過程中可能存在泄露現(xiàn)象，最終導(dǎo)致實際測量的包封率降低。對此，筆者認(rèn)為有以下幾種解決辦法：第一，可通過加入兩相調(diào)節(jié)劑（如膽固醇等）以提高脂質(zhì)體的穩(wěn)定性；第二，可采用冷凍干燥法和反復(fù)凍融法進(jìn)行樣品處理，以利于水溶性藥物的包裹；第三，可通過調(diào)節(jié)脂質(zhì)體內(nèi)外水相的pH值，使內(nèi)外水相之間形成一定的pH梯度差，根據(jù)山茱萸總環(huán)烯醚萜苷在不同pH值中存在的狀態(tài)不同，產(chǎn)生分子型或離子型藥物濃度差，從而使藥物以離子形態(tài)包封在內(nèi)水相中。

綜上所述，本研究通過星點設(shè)計-效應(yīng)面法優(yōu)化了山茱萸總環(huán)烯醚萜苷納米脂質(zhì)體的制備工藝，將優(yōu)化出的最佳工藝數(shù)據(jù)代入最佳模擬方程后，獲得的理論預(yù)測值與實際值相接近，表明所建立的數(shù)學(xué)模型具有較好的預(yù)測性。在最優(yōu)制備工藝條件下，應(yīng)用逆相蒸發(fā)法制備的山茱萸總環(huán)烯醚萜苷脂質(zhì)體粒徑較小，工藝簡單，但是本研究所制脂質(zhì)體的包封率較低，后續(xù)研究中將在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步分析其原因。

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（收稿日期：2018-05-09 修回日期：2018-08-27）

（編輯：林 靜）