黃楚燕 梁宏宇

摘要目的：探討淫羊藿葉的化學(xué)組成成分。方法：使用萃取、正相硅膠、溶劑法提取法、制備高效液相色譜分析法、Sephadex LH20、反相ODS等多種分離純化方法，來對淫羊藿葉化學(xué)成分進(jìn)行分離研究，綜合應(yīng)用磁共振成像、質(zhì)譜等方法鑒定各單體化合物結(jié)構(gòu)。結(jié)果：從淫羊藿干燥葉的95%乙醇提取物（V/V）中共分離鑒定7個(gè)化合物，分別為4羥基肉桂酸甲酯；4羥基3異戊二烯基苯甲酸；3，5，7，4′四甲氧基黃酮；2，3，4，6，7五甲氧基菲；5，7，4′三甲氧基4苯基香豆素；4羥基（2E）-2壬烯酸；4，5，-二羥基2，3，6三甲氧基9，10二氫菲。結(jié)論：化合物17均為首次從淫羊藿屬分離得到化合物。

關(guān)鍵詞化學(xué)成分；淫羊藿；結(jié)構(gòu)；鑒定

Isolation and Identification of Chemical Constituents of Herba Epimedii

Huang Chuyan1， Liang Hongyu2

（Department of Pharmacy， The First Affiliated Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine， Guangzhou 510405， China；

2 Second Department of Cardiovascular Diseases， Guangdong Hospital of Traditional Chinese Medicine， Guangzhou 510405， China）

AbstractObjective：To study chemical composition of Epimedium leaves. Methods：The extraction method， silica gel， extraction solvent， preparation of high performance liquid chromatography， Sephadex LH20， ODS and other purification methods were used to study the separation of chemical constituents of the leaves of epimedium. NMR and mass spectrometry were comprehensively applied to identify all the compounds. Results：7 compounds were isolated and identified from the 95% ethanol extract of Epimedium dry leaves （V/V）， including （1） 4hydroxy cinnamic acid methyl ester， （2） 4hydroxy3polyisoprenebenzoic acid， （3） 3，5，7，4′ tetramethoxflavone， （4） 2，3，4，6，7five methoxyPhilippines， （5） 5，7，4′trimethoxy4phenylcoumarin， （6） 4（2E）2hydroxynonenoic acid， （7） 4，5， dihydroxyl2，3，6trimethoxy9，10dihydrophenanthrene. Conclusion：Compound 17 is firstly isolated from Epimedium genus compounds.

Key WordsChemical constituents； Herba Epimedii； Structure identification

中圖分類號：R284文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.05.053

淫羊藿為小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicomu Maxim、箭葉淫羊藿Epimedium sagittatum（Siebet Zucc）Maxim、柔毛淫羊藿Epimedium pubescens Maxim或朝鮮淫羊藿Epimedium koreanum Nakai的干燥葉，其功能是強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕、補(bǔ)腎陽[1]。經(jīng)常被用于風(fēng)濕痹痛，腎陽虛衰，筋骨微軟，陽萎遺精，麻木拘攣等。主要化學(xué)成分為木脂素、黃酮、酚苷、紫羅酮類、菲等[2]。我們采用制備高效液相色譜、反相ODS、有機(jī)溶劑萃取法，結(jié)合Sephadex LH20、正相硅膠及等柱色譜法，從淫羊藿干燥葉體積分?jǐn)?shù)95%乙醇提取物中分離之后，并且鑒定了7個(gè)化合物主要成分，經(jīng)波譜方法鑒定其結(jié)構(gòu)分別為：1）4羥基肉桂酸甲酯；2）4羥基3異戊二烯基苯甲酸；3）3，5，7，4′四甲氧基黃酮；4）2，3，4，6，7五甲氧基菲；5）5，7，4′三甲氧基4苯基香豆素；6）4羥基（2E）-2壬烯酸；7）4，5，-二羥基2，3，6三甲氧基9，10二氫菲，其中化合物17均為都是從淫羊藿屬植物分離得到的[3]。

1材料與儀器

11材料淫羊藿藥材是在至信集團(tuán)玉林本草堂中藥飲片有限公司購買的，然后通過廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中藥鑒定專家組鑒定為小檗科淫羊藿屬植物淫羊藿（Epimedium brevicornu Maxim）的干燥葉，制作出的標(biāo)本（B223）現(xiàn)在存放在廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部中藥倉庫。

12試劑分析純甲醇、乙醇、石油醚（60～90 ℃）、乙酸乙酯及色譜純甲醇（廣州化學(xué)試劑廠）/分析純二氯甲烷、氯仿、丙酮（廣州化學(xué)試劑廠）；ODS反相色譜柱（50 μm，120 ，日本YMC公司）；柱層析硅膠（青島海洋化工廠分廠）；薄層層析板（德國默克公司）；Sephadex LH20（美國GE公司）[4]。

13儀器Agilent 6410三重四級桿質(zhì)譜儀（美國安捷倫公司）；制備色譜柱：Agilent Eclipse XDBC18柱（250 mm×212 mm，7 μm）；制備高效液相色譜儀為Agilent 1200 series（美國安捷倫公司）；BRUKER AVANCE Ⅲ 500超導(dǎo)核磁共振波譜儀（瑞士布魯克公司，TMS為內(nèi)標(biāo)）。

2方法

選用20 kg淫羊藿干燥葉粗粉，然后使用比干燥葉多8倍量體積分?jǐn)?shù)為95%乙醇提取3次，每次提取過程都必須嚴(yán)格控制用量，提取一次的時(shí)間為2 h，然后過濾，回收，最后放到真空條件干燥回收[5]。之后取3 000 g樣品，向樣品中加入離子水10 000 mL混懸，使用等體積的乙酸乙酯萃取回收3次，合并乙酸乙酯層，干燥收集得乙酸乙酯萃取物約1 000 g。最后對萃取物進(jìn)行硅膠柱層析分離，二氯甲烷丙酮（1∶0→10∶1→5∶1，2∶1→1∶1→0∶1）梯度洗脫，薄層（TLC）檢識，合并相同流分，得8個(gè)流分（Fr18）[6]。

Fr2（100 g）在硅膠柱色譜，通過石油醚丙酮（100∶0→0∶100）梯度洗脫，TLC鑒別檢識，然后回流得到12個(gè)流分，其中Fr112（620 mg）經(jīng)ODS開放在柱色譜與制備高效液相色譜制備得到了化合物1（23 mg）[7]。Fr4（112 g）經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚丙酮（100∶0→0∶100）梯度洗脫，從而得到了8個(gè)流分，其中Fr47（1 120 mg）通過ODS開放在柱色譜和制備高效液相色譜分離得到了化合物2（34 mg）和化合物4（90 mg）；Fr8（130 g）經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷甲醇（100∶0→0∶100）梯度洗脫，TLC檢識，合并處理回收得到15個(gè)流分，F(xiàn)r815（620 mg）經(jīng)sephadex LH20及ODS開放柱色譜和制備高效液相色譜分離，從而得到了化合物6（35 mg）[8]；其中Fr88（510 mg）經(jīng)sephadex LH20（甲醇洗脫）及ODS開放柱色譜和制備高效液相色譜分離得到了化合物5（65 mg）；Fr6（160 g）經(jīng)ODS開放柱色譜和制備高效液相色譜分離得到了化合物7（20 mg）；Fr48（935 mg）經(jīng)ODS開放在柱色譜與制備高效液相色譜分離得到了化合物3（10 mg）。

3結(jié)果

化合物1：顏色是白色，形狀是無定形，狀態(tài)是粉末，可以在甲醇中溶解。在正離子ESIMS譜中，可以觀測到準(zhǔn)分子離子峰m/z：3129[M+H]+，推測其分子量為312。在中高場區(qū)可以觀測到3個(gè)甲氧基質(zhì)子信號：δ 399（3H，s，7OCH3），388（3H，s，5OCH3），381（3H，s，4′OCH3）。在13CNMR（125 MHz，CD3OD）譜上出現(xiàn)1個(gè)內(nèi)酯羰基信號：δ1789（C2）；14個(gè)相應(yīng)的芳香碳信號：δ1243（C1′），1081（C3），1624（C4），942（C8），1622（C8a），1630（C5），994（C6），1668（C7），1156（C3′，5′），1091（C4a），1291（C2′，6′）和1643（C4′）；還可觀測到3個(gè)孤立的芳香質(zhì)子信號：δ 651（1H，s，H6），666（1H，s，H8），656（1H，s，H3）。碳譜中還可觀測到3個(gè)甲氧基信號：δ560（5OCH3），576（7OCH3）和565（4′OCH3）。1H、13CNMR譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)中出現(xiàn)化合物的成分一樣，由此可得該化合物1為5，7，4′三甲氧基4苯基香豆素[9]。

化合物2：顏色是白色，形狀是無定形，形態(tài)是粉末，在甲醇中可以溶解。在正離子MS譜中，可以觀察到到準(zhǔn)分子離子峰m/z：3291[M+H]+，推測其分子量為328。在1HNMR（500 MHz，CD3OD）譜低場區(qū)，可以在中高場區(qū)可以觀測到5個(gè)甲氧基質(zhì)子信號δ401（3H，s，6OCH3），δ 397（3H，s，7OCH3），398（3H，s，2OCH3），397（3H，s，3OCH3），399（3H，s，4OCH3）。看到5個(gè)芳香氫質(zhì)子信號：δ903（1H，s，H5）；757（1H，d，J=85 Hz，H9），752（1H，d，J=85 Hz，H10），δ 719（1H，s，H1），730（1H，s，H8），觀察到5個(gè)甲氧基信號：δ 563（7OCH3），617（3OCH3），562（2OCH3），564（6OCH3），611（4OCH3）。13CNMR（125 MHz，CD3OD）譜上出現(xiàn)14個(gè)相應(yīng)的芳香碳信號：δ 1312（C10a），1066（C1），1273（C9），1532（C2），1438（C3），1097（C8）1496（C7），1527（C4），1289（C8a），1089（C5），1502（C6），1260（C10），1197（C4a），1256（C4b），以及1H、13CNMR譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對照，結(jié)果基本一致，鑒定化合物2為2，3，4，6，7五甲氧基菲[10]。

化合物3：顏色是黃色，形狀是無定形，形態(tài)是粉末，在甲醇中可以溶解。在正離子ESIMS譜中，觀察到準(zhǔn)分子離子峰m/z：3429[M+H]+，推測其分子量為342。低場區(qū)可觀測到B環(huán)的一組AA′BB′芳香氫信號：δ809（2H，d，J=90 Hz，H2′，6′），715（2H，d，J=90 Hz，H3′，5′），提示B對位取代；在13CNMR（125 MHz，CD3OD）譜上出現(xiàn)黃酮苷元相應(yīng)的碳信號：δ 1230（C1′），1555（C2），1609（C9），1161（C3′，5′），1652（C4′），1311（C2′，6′），1489（C3），1760（C4），1663（C5），991（C6），1664（C7），918（C8），1128（C10），以及4個(gè)甲氧基信號：δ 603（3OCH3），576（5OCH3），596（7OCH3）和561（4′OCH3）[11]。還可觀測到4個(gè)甲氧基質(zhì)子信號：δ 392（3H，s，7OCH3），379（3H，s，3OCH3），388（3H，s，4′OCH3）和391（3H，s，5OCH3）。除此之外，還可觀測到4個(gè)甲氧基質(zhì)子信號：δ 399（3H，s，7OCH3），389（3H，s，3OCH3），387（3H，s，4′OCH3），391（3H，s，5OCH3）。1H、13CNMR譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)中出現(xiàn)化合物的成分一樣，由此可得該化合物是3，5，7，4′四甲氧基黃酮[12]。

化合物4：顏色是白色形狀是無定形粉末，可以在甲醇溶解。在測定正離子ESIMS譜中，可以觀察到準(zhǔn)分子離子峰m/z：3050[M+H]+，推測其分子量為302。在1HNMR（500 MHz，CD3OD）譜低場區(qū)，可以在高場區(qū)觀測到一組脂肪氫質(zhì)子信號：δ 261（4H，br s，H9，10）和3個(gè)甲氧基質(zhì)子信號δ 381（3H，s，3OCH3），389（3H，s，6OCH3），388（3H，s，2OCH3）。觀測到3個(gè)芳香氫質(zhì)子信號：δ 668（1H，s，H1），670（1H，d，J=80 Hz，H8），684（1H，d，J=80 Hz，H7）；在13CNMR（125 MHz，CD3OD）譜上出現(xiàn)12個(gè)相應(yīng)的芳香碳信號：δ 1056（C1），1426（C2），1338（C8a），1534（C3），1378（C4），1493（C5），1499（C6），1101（C7），1202（C8），1164（C4a），1244（C4b）和1387（C10a），可以觀察到2個(gè)脂肪碳和3個(gè)甲氧基信號：δ566（6OCH3），315（C9），569（2OCH3），327（C10），612（3OCH3），可以在13CNMR（125 MHz，CD3OD）譜上出現(xiàn)12個(gè)相應(yīng)的芳香碳信號：δ 1056（C1），1202（C2），1108（C3），1534（C4），1378（C5），1252（C6），1264（C4a），1483（C7），1426（C8），1490（C9），1154（C4b），1368（C8a）和1387（C10a）。1H、13CNMR譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)出現(xiàn)的化合物成分一樣，由此可得化合物4為4，5，-二羥基2，3，6三甲氧基9，10二氫菲[13]。

化合物5：顏色是白色，形態(tài)是粉末，在氯仿中可以溶解。在正離子ESIMS譜中，觀察到準(zhǔn)分子離子峰m/z：2071[M+H]+，推測其分子量為206。13CNMR（125 MHz，CD3OD）譜上出現(xiàn)6個(gè)相應(yīng)的芳香碳信號：δ1315（C1），1143（C2），1215（C3），1861（C4），1315（C5），1194（C6）；1個(gè)羰基碳信號δ1705（C7），及一組異戊二烯基信號δ250（C1′），291（C2′），1233（C3′），179（C4′），1337（C5′）。在1HNMR（500 MHz，CD3OD）譜低場區(qū)，可以詳細(xì)觀察到一組ABX芳香氫質(zhì)子信號：δ764（1H，d，J=20Hz，H2），677（1H，d，J=80 Hz，H5），779（1H，dd，J=20，811 Hz，H6）；還可以觀測到1個(gè)烯氫信號：δ533（1H，t，J=75Hz，H2′）；另外，在高場區(qū)可以觀察到一組脂肪氫質(zhì)子信號：δ 329（2H，m，H1′）及2個(gè)甲基質(zhì)子信號δ 171（3H，s，H5′），175（3H，s，H4′）。1H、13CNMR譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]對照，結(jié)果基本一致，鑒定化合物5為4羥基3異戊二烯基苯甲酸。

化合物6：顏色是白色，形狀是無定形，形態(tài)是粉末，在甲醇中可以溶解。在正離子ESIMS譜中，觀察到準(zhǔn)分子離子峰m/z：1731[M+H]+，推測其分子量為172。氫譜中還可觀測到：δ，155（2H，m，H5），113（4H，m，H6，8）；419（1H，dd，J=50，110Hz，H4），099（3H，t，J=70 Hz，H9），135（2H，m，H7）；在1HNMR（500 MHz，CD3OD）譜低場區(qū)，也可以觀察到一組反式烯氫質(zhì)子信號：δ 596（1H，dd，J=15，170 Hz，H2），691（1H，dd，J=51，160 Hz，H3）。碳譜中還有1個(gè)羰基碳信號δ1702（C1）。在13CNMR（125 MHz，CD3OD）譜上出現(xiàn)2個(gè)相應(yīng)的烯碳信號：δ319（C8），1221（C2），234（C6），144（C9），1517（C3），718（C4），386（C5），229（C7）；1H、13CNMR譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)中出現(xiàn)的化合物成分一樣，由此可得化合物6為4羥基（2E）-2壬烯酸[15]。

化合物7：顏色是白色，形狀是無定形，形態(tài)是粉末，在甲醇中可以溶解[16]。在正離子ESIMS分析光譜中，可以觀察到準(zhǔn)分子離子峰m/z：1791[M表17種物質(zhì)顏色形狀等比較項(xiàng)四甲氧基黃酮4，5，-二羥基2，3，6三甲氧基9，10二氫菲。4羥基3異戊二烯基苯甲酸4羥基（2E）-2壬烯酸4羥基肉

桂酸甲酯顏色白色白色白色白色白色黃色白色形狀無定型粉末無定型粉末無定型粉末無定型粉末粉末粉末粉末是否溶于甲醛是是是是否是是

+H]+，推測其分子量為178。在1HNMR（500 MHz，CD3OD）譜低場區(qū)，可以清楚觀察到一組AA′BB′芳香氫質(zhì)子信號：δ 346（3H，s，9OCH3）；在14CNMR（126 MHz，CD3OD）譜上出現(xiàn)6個(gè)相應(yīng)的芳香碳信號：δ1623（C4），1283（C1），1119（C3，5），1312（C2，6）[17]；在1HNMR（500 MHz，CD3OD）譜低場區(qū)，也可以清楚觀察到一組AA′BB′芳香氫質(zhì)子信號：δ728（2H，d，J=91Hz，H2′，6′），685（2H，d，J=90Hz，H3′，5′），一對烯碳信號：δ1478（C7），1194（C8），1個(gè)羰基碳信號δ1677，以及1個(gè)甲氧基信號δ 489；及一對反式烯氫信號：δ 630（1H，d，J=160 Hz，H8），769（1H，d，J=160 Hz，H7）；1H、13CNMR譜數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)出現(xiàn)的數(shù)據(jù)結(jié)果一樣，由此可得該化合物是4羥基肉桂酸甲酯[18]。

5，7，4′三甲氧基4苯基香豆素。2，3，4，6，7五甲氧基菲。3，5，7，4′四甲氧基黃酮。4，5，-二羥基2，3，6三甲氧基9，10二氫菲。4羥基3異戊二烯基苯甲酸。4羥基（2E）-2壬烯酸。4羥基肉桂酸甲酯，7種物質(zhì)顏色形狀等比較見表1。

4討論

在淫羊藿葉樣品中通過分離得到了7個(gè)化合物，分別為：5，7，4′三甲氧基4苯基香豆素；2，3，4，6，7五甲氧基菲；3，5，7，4′四甲氧基黃酮；4，5，-二羥基2，3，6三甲氧基9，10二氫菲；4羥基肉桂酸甲酯；4羥基（2E）-2壬烯酸；4羥基3異戊二烯基苯甲酸（7）[19]?；衔?7為首次從淫羊藿屬分離得到化合物。

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（2017-05-17收稿責(zé)任編輯：楊覺雄）