劉亞　楊銳　陳葉雨　宋明江　顏其貴　龔全　李強(qiáng)　楊煥超　賴見生

摘要：【目的】查明引起達(dá)氏鱘（Acipenser dabryanus）發(fā)病死亡的病原菌及其耐藥性，為該病的臨床診斷和科學(xué)防治提供參考依據(jù)?！痉椒ā恳猿Ｒ?guī)方法對患病達(dá)氏鱘的鰓、心臟、肝臟和腸道等組織進(jìn)行病原菌分離純化，采用形態(tài)學(xué)觀察、生理生化特性鑒定與16S rRNA序列分析相結(jié)合的方法進(jìn)行鑒定，通過人工感染試驗(yàn)明確病原菌的致病性及其病理組織學(xué)特征，并以K-B紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)?！窘Y(jié)果】從患病達(dá)氏鱘的肝臟組織中分離獲得一株優(yōu)勢菌株（AD-AV201606），經(jīng)形態(tài)學(xué)觀察、生理生化特性鑒定及16S rRNA序列分析，最終鑒定為維氏氣單胞菌（Aeromonas veronii）。以維氏氣單胞菌人工感染達(dá)氏鱘，可復(fù)制出與自然發(fā)病相同的臨床癥狀，感染引起的死亡率為50%～80%，且病魚集中在感染后1～3 d死亡。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，達(dá)氏鱘維氏氣單胞菌對慶大霉素、鏈霉素、左氧氟沙星、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、阿奇霉素和頭孢呋辛等7種抗生素敏感，對青霉素和利福平已產(chǎn)生耐藥性。維氏氣單胞菌感染對達(dá)氏鱘造成的組織病理變化主要集中在肝臟、腸道及鰓組織?！窘Y(jié)論】維氏氣單胞菌對達(dá)氏鱘有較強(qiáng)的致病性，通過引起肝臟、腸道及鰓等器官組織的病理變化而造成機(jī)體損傷甚至死亡，生產(chǎn)上可選用慶大霉素、鏈霉素和四環(huán)素進(jìn)行防治。

關(guān)鍵詞： 達(dá)氏鱘；維氏氣單胞菌；分離鑒定；藥敏試驗(yàn)；病理組織學(xué)

中圖分類號(hào)： S941.42 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：2095-1191（2018）06-1235-07

Abstract：【Objective】The present experiment was conducted to investigate pathogenic bacteria that caused death of Acipenser dabryanus and its susceptibility in order to provide references for the clinical diagnosis and scientific prevention of the disease. 【Method】Bacterial isolates were collected from gill， heart， liver and intestines of diseased A. dabryanus by conventional methods. After being purified， the pathogen was identified based on morphological observation， biochemical characteristics together with 16S rRNA sequence analysis. The pathogenicity and histological characteristics of pathogenic bacteria were determined by artificial infection. Drug susceptibility was detected by Kirby-Bauer disk diffusion method. 【Result】A dominant strain（AD-AV201606） was isolated from the liver tissue of the diseased A. dabryanus. The pathogenic bacteria was finally identified as Aeromonas veronii after morphological observation. Biochemical characteristics test together with 16S rRNA sequence analysis. The infection symptoms of the fishes by artificial infection germs appeared the same as the natural infection， with mortality rate of 50%-80%. The infected A. dabryanus died 1-3 d after infection. Drug sensitivity test showed that the isolated bacterium was highly sensitive to seven kinds of antibiotics including gentamicin， streptomycin， levofloxacin， tetracycline， ciprofloxacin， azithromycin and cefuroxime. The bacterium had resistance to penicillin and rifampicin. The histological changes of sturgeon caused by A. veronii infection were mainly concentrated in the liver， intestinal tract and gill tissues. 【Conclusion】A. veronii had strong pathogenicity on A. dabryanus. It leads to body damage and even death of A. dabryanus by causing pathological changes in liver， intestine and gill. Gentamicin， streptomycin and tetracycline can be selected for prevention and treatment of the disease in production.

Key words： Acipenser dabryanus； Aeromonas veronii； isolation and identification； drug sensitivity test； histopathology

0 引言

【研究意義】達(dá)氏鱘（Acipenser dabryanus）又稱長江鱘、沙臘子，隸屬于鱘形目（Acipenseriformes）鱘科（Acipenseridae）鱘屬（Acipenser），主要分布于長江中上游干流及金沙江下游，是我國的特有物種。達(dá)氏鱘種群資源在長江上游已嚴(yán)重衰退，野生數(shù)量極其稀少，于1988年被列為國家一級重點(diǎn)保護(hù)動(dòng)物（陳細(xì)華，2007）；按照世界自然保護(hù)聯(lián)盟（IUCN）（http：//www.iucnredlist.org/）的評估結(jié)果，達(dá)氏鱘已處于極度瀕危級（CR）。開展達(dá)氏鱘人工繁育及養(yǎng)殖是保護(hù)其物種資源的重要措施，但在達(dá)氏鱘的人工養(yǎng)殖過程中常因持續(xù)高溫、水質(zhì)惡化或病原菌感染等而極易引發(fā)疾?。ㄋ握駱s等，2003；張佐等，2016），不利于該物種的保護(hù)。因此，有針對性地開展病原菌研究并提出防治措施，對實(shí)現(xiàn)達(dá)氏鱘健康養(yǎng)殖及其物種資源保護(hù)均具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】由于達(dá)氏鱘分布的局限性，目前針對該物種的研究報(bào)道主要見于國內(nèi)，研究領(lǐng)域主要集中在人工繁殖（龔全等，2013）、親本鑒定（駱慧，2013；Liu et al.，2017）、相關(guān)基因的克隆與表達(dá)分析（單喜雙等，2015；杜浩等，2017）等，而有關(guān)達(dá)氏鱘疾病的研究報(bào)道甚少。宋振榮等（2003）對患病達(dá)氏鱘的組織器官進(jìn)行病理學(xué)研究，認(rèn)為持續(xù)高溫和水質(zhì)惡化與其心外膜囊腫癥的發(fā)生密切相關(guān)，運(yùn)用電子顯微鏡觀察各臟器的病灶組織，但未發(fā)現(xiàn)有細(xì)菌、病毒或寄生蟲等病原體。魯雪報(bào)等（2012，2013）對達(dá)氏鱘常見發(fā)病特征及防治措施進(jìn)行研究，認(rèn)為通過全面預(yù)防和及時(shí)治療能有效減少或減輕魚病的危害，但尚未開展相關(guān)病原菌的鑒定研究。張佐等（2016）從四川瀘州某養(yǎng)殖場的患病達(dá)氏鱘分離獲得嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila），該病原菌引起的臨床癥狀表現(xiàn)為病魚尾柄鱗基部有突出體外的充血泡，腹部腫脹，鰓絲腐爛，臟器有出血點(diǎn)等，生產(chǎn)上可選用頭孢曲松、恩諾沙星和氟苯尼考等抗生素進(jìn)行防治?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】2016年8月四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院水產(chǎn)研究所培育的一批達(dá)氏鱘幼魚發(fā)病死亡，病魚主要表現(xiàn)為食欲明顯減弱，緩慢游于水面或側(cè)翻，反應(yīng)遲鈍，部分病魚鰭條及腹部體表出血，鰓絲充血，肛門紅腫；剖檢可見病魚腸道出血，無內(nèi)容物，腸壁有較多黃色黏液，腹腔積水；發(fā)病后48 h的累積死亡率達(dá)70%，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。【擬解決的關(guān)鍵問題】對患病達(dá)氏鱘的鰓、心臟、肝臟和腸道等組織進(jìn)行病原菌分離純化，采用形態(tài)學(xué)觀察、生理生化特性鑒定與16S rRNA序列分析相結(jié)合的方法進(jìn)行鑒定，通過人工感染試驗(yàn)明確病原菌的致病性及其病理組織學(xué)特征，并以K-B紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，以期為該病的臨床診斷和科學(xué)防治提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

患病達(dá)氏鱘和健康達(dá)氏鱘均由四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院水產(chǎn)研究所提供。其中，患病達(dá)氏鱘共6尾，體重40～52 g/尾，體長21～25 cm；健康達(dá)氏鱘（用于人工感染試驗(yàn)）體重42～47 g/尾，體長22～26 cm，試驗(yàn)前隔離暫養(yǎng)觀察30 d，暫養(yǎng)期間正常投喂管理，隨機(jī)選取3尾以常規(guī)方法對其肝臟和心臟組織進(jìn)行病原菌檢測，結(jié)果均呈陰性。MH培養(yǎng)基瓊脂購自北京索萊寶科技有限公司，細(xì)菌微量生化反應(yīng)管和標(biāo)準(zhǔn)藥敏試紙購自杭州微生物試劑有限公司，細(xì)菌基因組DNA抽提試劑盒購自天根生化科技（北京）有限公司，DNA Marker購自寶生物工程（大連）有限公司，2×Taq PCR Master Mix購自成都擎科梓熙生物技術(shù)有限公司。

1. 2 試驗(yàn)方法

1. 2. 1 病原菌分離 無菌操作采集患病達(dá)氏鱘的病料組織，取樣接種于MH固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，28 ℃培養(yǎng)18～24 h，觀察病原菌的生長情況；再挑取單菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)，純化所得菌株轉(zhuǎn)接到斜面營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，28 ℃培養(yǎng)24 h后觀察菌落形態(tài)特征，并進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢；部分純化菌株4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1. 2. 2 生理生化特性鑒定 挑取純化的單個(gè)菌落接種于MH液體培養(yǎng)基，然后將培養(yǎng)物接種于細(xì)菌微量生化反應(yīng)管中，28 ℃培養(yǎng)24 h后，對乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖、鳥氨酸脫羧酶和精氨酸雙水解酶等生理生化指標(biāo)進(jìn)行測定，并參照《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊》及黎炯等（2011）、楊移斌等（2014）的方法對病原菌進(jìn)行初步判定。

1. 2. 3 16S rRNA序列分析 選取純化的單個(gè)菌落接種于MH液體培養(yǎng)基以獲得菌懸液，以細(xì)菌基因組DNA抽提試劑盒提取其DNA，采用16S rRNA通用引物（16S-F：5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'，16S-R：5'-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3'）進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系50.0 μL，其中2×Taq PCR Master Mix 25.0 μL，上、下游引物各2.0 μL，DNA模板2.0 μL，ddH2O 19.0 μL。擴(kuò)增程序：95 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃ 30 S，56 ℃ 30 s，72 ℃ 50 S，進(jìn)行35個(gè)循環(huán)；最后72 ℃延伸10 min。取5.0 μL PCR產(chǎn)物進(jìn)行1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測，陽性產(chǎn)物送至成都擎科梓熙生物技術(shù)有限公司測序。測序結(jié)果在NCBI數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行BLAST比對分析，選取相似度較高的同種菌株及相關(guān)同屬菌株序列，采用ClustalX 2.0進(jìn)行多序列比對分析，再以MEGA 7.0中Neighbour-Joi-ning法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹，通過1000次Bootstrap檢驗(yàn)置信度。

1. 2. 4 人工感染回歸試驗(yàn) 將純化菌株接種于MH固體培養(yǎng)基上，28 ℃培養(yǎng)18～24 h后用滅菌的0.65%生理鹽水洗下菌落制成菌懸液，采用平板計(jì)數(shù)法測定菌懸液濃度。健康達(dá)氏鱘隨機(jī)分成4組，每組10尾。其中3組于胸鰭下注射菌懸液（0.2 mL/尾），對應(yīng)的菌懸液濃度分別為1.0×107、1.0×108和1.0×109 CFU/mL，另一組于胸鰭下注射等量的0.65%生理鹽水作為對照（CK）。試驗(yàn)期間連續(xù)充氣供氧，水溫保持在（20±1）℃，每日正常投喂餌料并清污，定期觀察魚的活動(dòng)情況，連續(xù)觀察1周并記錄達(dá)氏鱘的發(fā)病及死亡情況。無菌采集人工感染死亡達(dá)氏鱘的鰓、心臟、肝臟和腸組織，再次進(jìn)行病原菌分離鑒定。

1. 2. 5 藥敏試驗(yàn) 菌懸液用滅菌0.65%生理鹽水稀釋為0.5倍麥?zhǔn)蠞舛群螅妹奘米诱喝【鷳乙壕鶆蛲坎糓H培養(yǎng)基，然后用鑷子將各藥敏紙片緊貼在MH培養(yǎng)基表面。每張藥敏紙片間距≥24 mm，藥敏紙片中心距平皿邊緣≥15 mm。28 ℃培養(yǎng)18～24 h后觀察細(xì)菌生長情況，測量抑菌圈直徑（mm），并根據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所（CLSI）的抗菌藥物敏感性試驗(yàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)判定菌株對抗生素的敏感性。

1. 2. 6 病理組織切片觀察 無菌采集人工感染死亡達(dá)氏鱘的鰓、肝臟、胃、鰾及腸道組織，用10%中性福爾馬林溶液固定，經(jīng)石蠟包埋、切片和HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察達(dá)氏鱘的組織病理學(xué)變化，并對其進(jìn)行圖像采集和描述。

2 結(jié)果與分析

2. 1 病原菌分離結(jié)果

從患病達(dá)氏鱘的肝臟組織中分離獲得一株優(yōu)勢菌株，將純化后的菌株命名為AD-AV201606。該菌株在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上生長形成的菌落呈圓形，邊緣整齊，表面光滑，灰白色，不透明，中央稍隆起；革蘭氏染色呈陰性。

2. 2 分離菌株的生理生化特性

對菌株AD-AV201606進(jìn)行生理生化特性鑒定，結(jié)果（表1）顯示，該分離菌株可利用葡萄糖而產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，能利用半乳糖并水解明膠，鳥氨酸脫羧酶、精氨酸雙水解酶、賴氨酸脫羧酶及V-P試驗(yàn)均呈陽性，但阿拉伯糖、乳糖、硫化氫、枸櫞酸鹽、丙二酸、甘露醇和D-山梨醇等7項(xiàng)檢測結(jié)果呈陰性。該分離菌株的大部分生理生化特性與維氏氣單胞菌（Aeromonas veronii）相符，初步判定為維氏氣單胞菌。

2. 3 分離菌株的16S rRNA序列分析結(jié)果

擴(kuò)增得到菌株AD-AV201606的16S rRNA序列長度為1385 bp，其GenBank登錄號(hào)為MG736237。將該序列在NCBI數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行BLAST比對分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其與維氏氣單胞菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC 35624的同源性達(dá)100%。選取相似度高的同種菌株及相關(guān)同屬菌株序列進(jìn)行多序列比對分析，再基于16S rRNA序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹（圖1），結(jié)果顯示菌株AD-AV201606與維氏氣單胞菌先聚為一個(gè)分支。綜合分離菌株的形態(tài)特征及生理生化特性，可確定該分離菌株即為維氏氣單胞菌。

2. 4 人工感染回歸試驗(yàn)結(jié)果

以菌株AD-AV201606的菌懸液人工感染健康達(dá)氏鱘，其臨床癥狀主要表現(xiàn)為魚體反應(yīng)較遲鈍，鰓絲充血，鰭條及腹部體表出血，肛門紅腫（圖2-A）；剖檢發(fā)現(xiàn)其腹腔積液（圖2-B），腸道內(nèi)充滿黃色黏液（圖2-C）。對照組達(dá)氏鱘的攝食、活動(dòng)正常，外觀體表未見異常（圖2-D），連續(xù)觀察1周未發(fā)現(xiàn)死亡現(xiàn)象。再次取樣進(jìn)行病原菌分離鑒定，其菌落形態(tài)特征、生理生化特性及16S rRNA序列與菌株AD-AV201606一致，即菌株AD-AV201606是引起達(dá)氏鱘發(fā)病死亡的致病菌。由表2可看出，菌株AD-AV201606對達(dá)氏鱘有較強(qiáng)的致病性，于胸鰭下注射不同濃度（1.0×107、1.0×108和1.0×109 CFU/mL）菌懸液感染引起的死亡率為50%～80%，且病魚集中在感染后1～3 d死亡，第4 d后未見病魚死亡。

2. 5 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

由表3可知，菌株AD-AV201606對慶大霉素、鏈霉素、左氧氟沙星、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、阿奇霉素和頭孢呋辛等7種抗生素敏感，但對青霉素和利福平已產(chǎn)生耐藥性。

2. 6 病理組織切片觀察結(jié)果

光學(xué)顯微鏡下觀察人工感染死亡達(dá)氏鱘的鰓、肝臟、胃、鰾及腸道等病理組織切片，結(jié)果發(fā)現(xiàn)病理損傷部位主要集中在肝臟、腸道及鰓組織。其中，肝臟組織中可見大量黑色素巨噬細(xì)胞（圖3-A），肝血竇瘀血，紅細(xì)胞充盈，狄氏間隙增寬（圖3-B）。腸道病理特征表現(xiàn)為腸黏膜下層細(xì)胞增多，部分區(qū)域的腸黏膜壞死脫落，腸腔內(nèi)有脫落的上皮組織（圖3-C）；腸黏膜層及黏膜下層的毛細(xì)血管充血擴(kuò)張，大量紅細(xì)胞充盈，腸黏膜上皮層變薄，大量上皮細(xì)胞脫落（圖3-D）。鰓小片的呼吸上皮極度浮離（圖3-E），鰓小片呼吸上皮及基部細(xì)胞大量壞死，脫落（圖3-F）。

3 討論

維氏氣單胞菌隸屬氣單胞菌科（Aeromonadaceae）氣單胞菌屬（Aeromonas），也稱為維羅納氣單胞菌和威（維）隆氣單胞菌，廣泛分布于水環(huán)境、土壤及動(dòng)物消化道中，可引起人類腹瀉、胃腸炎及呼吸道感染（許少洪和李映霞，2010；王惠，2014）。田小龍等（2015）從豬—魚立體養(yǎng)殖魚塘的池塘水、養(yǎng)殖魚類及池塘底泥樣品中分離出維氏氣單胞菌，并證實(shí)苯扎溴銨對其殺菌效果良好。近年來，維氏氣單胞菌多次在水產(chǎn)動(dòng)物疾病中被報(bào)道，可感染中華絨螯蟹（房海等，2008）、斑點(diǎn)叉尾鮰（黃小麗等，2010）、羅非魚（黎炯等，2011）、大鯢（王旭等，2011）、鰻鱺（楊求華等，2012）、白緣?（楊澤曉等，2012）、黃顙魚（朱成科等，2013）及鯽魚（張冬星等，2017）等多種水產(chǎn)動(dòng)物，主要引起出血和腹水等癥狀，對水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)危害較大。有關(guān)維氏氣單胞菌感染鱘魚的研究報(bào)道較少，馬志宏等（2009）首次在患病西伯利亞鱘體內(nèi)分離獲得鱘源維氏氣單胞菌，并通過人工感染試驗(yàn)確認(rèn)該菌的致病性；楊移斌等（2014）從患病西伯利亞鱘和施氏鱘中均分離得到維氏氣單胞菌，人工感染試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)96 h內(nèi)的累計(jì)死亡率分別高達(dá)70%和80%，說明維氏氣單胞菌對西伯利亞鱘和施氏鱘具有很強(qiáng)的致病性；田照輝等（2015）研究了西伯利亞鱘對維氏氣單胞菌感染的生理免疫反應(yīng)，證實(shí)血清皮質(zhì)醇含量和溶菌酶活力升高可作為機(jī)體免疫狀態(tài)的參考指標(biāo)。本研究從患病達(dá)氏鱘肝臟組織分離獲得維氏氣單胞菌，人工感染試驗(yàn)結(jié)果表明，維氏氣單胞菌對達(dá)氏鱘有較強(qiáng)的致病性，感染引起的病理損傷部位主要集中在肝臟、腸道和鰓組織，發(fā)病死亡率在50%～80%，且病魚集中在感染后1～3 d死亡。

目前，水產(chǎn)動(dòng)物養(yǎng)殖生產(chǎn)上主要采用抗生素控制病原菌的發(fā)生和流行。因此，針對病原菌開展藥敏試驗(yàn)，準(zhǔn)確篩選出病原菌的敏感藥物，對科學(xué)指導(dǎo)生產(chǎn)用藥、有效防治疾病及保障水產(chǎn)品質(zhì)量安全均具有重要意義。本研究的藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，達(dá)氏鱘源維氏氣單胞菌對慶大霉素、鏈霉素、左氧氟沙星、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、阿奇霉素和頭孢呋辛等7種抗生素敏感，對青霉素和利福平已產(chǎn)生耐藥性。其中，達(dá)氏鱘維氏氣單胞菌對阿奇霉素、慶大霉素及鏈霉素敏感，對青霉素耐受的結(jié)果與楊澤曉等（2012）、朱成科等（2013）的研究報(bào)道一致，但對四環(huán)素和環(huán)丙沙星的敏感性在不同研究報(bào)道中存在一定差異，可能與菌株的來源及地區(qū)間的用藥差異有關(guān)，具體原因有待進(jìn)一步探究。由于環(huán)丙沙星、氧氟沙星等抗生素屬于水產(chǎn)禁用藥物或禁止在飼料和動(dòng)物飲水中使用的添加劑，生產(chǎn)上用藥原則既要考慮藥物的敏感性，又要嚴(yán)格遵守水產(chǎn)用藥的規(guī)定，因此建議選用慶大霉素、鏈霉素和四環(huán)素進(jìn)行防治。

維氏氣單胞菌對達(dá)氏鱘造成的組織病理變化與其感染斑點(diǎn)叉尾鮰（黃小麗等，2010）、齊口裂腹魚（謝光美等，2015）、虹鱒（王興麗等，2016）等魚類引起的組織病理變化特征相似，病理損傷多集中在重要的功能器官組織，如肝臟、腸道及鰓組織，主要引起這些器官組織發(fā)生衰退性病變及壞死。從達(dá)氏鱘的組織病理變化也可看出，維氏氣單胞菌具有較強(qiáng)的致病性。肝血竇淤血?jiǎng)t阻礙肝細(xì)胞與血液間的物質(zhì)交換，最終影響肝臟的解毒、防御及分泌等功能；腸黏膜壞死脫落，則對其營養(yǎng)吸收等造成影響；鰓小片呼吸上皮及基部細(xì)胞的大量死亡，可致使呼吸功能減弱，甚至缺氧窒息。說明維氏氣單胞菌是通過引起多個(gè)器官組織發(fā)生病理變化，進(jìn)而造成機(jī)體損傷甚至死亡。

4 結(jié)論

維氏氣單胞菌對達(dá)氏鱘有較強(qiáng)的致病性，通過引起肝臟、腸道及鰓等器官組織的病理變化而造成機(jī)體損傷甚至死亡，生產(chǎn)上可選用慶大霉素、鏈霉素和四環(huán)素進(jìn)行防治。

參考文獻(xiàn)：

陳細(xì)華. 2007. 鱘形目魚類生物學(xué)與資源現(xiàn)狀[M]. 北京：海洋出版社：53-57. [Chen X H. 2007. Biology and Resources of Acipenseriformes Fishes[M]. Beijing：China Ocean Press： 53-57.]

杜浩，冷小茜，張書環(huán)，葉歡，沈麗，劉志剛，陳細(xì)華，危起偉. 2017. 達(dá)氏鱘gdf11基因cDNA的克隆及組織表達(dá)特征分析[J]. 淡水漁業(yè)，47（1）：30-34. [Du H，Leng X Q，Zhang S H，Ye H，Shen L，Liu Z G，Chen X H，Wei Q W. 2017. Cloning and expression pattern of gdf11 cDNA in Acipenser dabryanus[J]. Freshwater Fisheries，47（1）：30-34.]

房海，陳翠珍，張曉君，鞏元芳，葛慕湘. 2008. 中華絨螯蟹病原維氏氣單胞菌的檢驗(yàn)[J]. 中國人獸共患病學(xué)報(bào)，24（1）：45-49. [Fang H，Chen C Z，Zhang X J，Gong Y F，Ge M X. 2008. Examination of the pathogenic Aeromonas veronii isolated from crab Eriocheir sinensis[J]. Chinese Journal of Zoonoses，24（1）：45-49.]

龔全，劉亞，杜軍，趙剛，陳先均，李軍，李強(qiáng)，李禾，凡磊. 2013. 達(dá)氏鱘全人工繁殖技術(shù)研究[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，26（4）：1710-1714. [Gong Q，Liu Y，Du J，Zhao G，Chen X J，Li J，Li Q，Li H，F(xiàn)an L. 2013. Study on artificial reproduction of cultured Acipenser dabryanus Dumeril[J]. Southwest China Journal of Agricultural Sciences，26（4）：1710-1714.]

黃小麗，吳春燕，鄧永強(qiáng)，汪開毓，耿毅，趙金全. 2010. 斑點(diǎn)叉尾鮰維氏氣單胞菌病的病理組織學(xué)觀察[J]. 中國獸醫(yī)科學(xué)，40（7）：738-742. [Huang X L，Wu C Y，Deng Y Q，Wang K Y，Geng Y，Zhao J Q. 2010. Pathohistological observation of Ictalurus punctatus infected with Aeromonas veronii[J]. Chinese Veterinary Science，40（7）：738-742.]

黎炯，葉星，盧邁新，鄧國成，遲妍妍，黃樟翰. 2011. 羅非魚維氏氣單胞菌的分離鑒定和藥敏試驗(yàn)[J]. 水生態(tài)學(xué)雜志，32（3）：132-136. [Li J，Ye X，Lu M X，Deng G C，Chi Y Y，Huang Z H. 2011. Isolation and identification of Aeromonas veronii from infected tilapia fry and analysis of its drug sensitivity[J]. Journal of Hydroecology，32（3）：132-136.]

魯雪報(bào)，倪勇，饒軍，唐大明. 2012. 小水體流水養(yǎng)殖達(dá)氏鱘的常見病防治[J]. 科學(xué)養(yǎng)魚，（11）：60. [Lu X B，Ni Y，Rao J，Tang D M. 2012. Prevention and control of Dabrys sturgeon common diseases in small water aqualture[J]. Scientific Fish Farming，（11）：60.]

魯雪報(bào)，倪勇，唐大明，饒軍. 2013. 達(dá)氏鱘蛻皮病的防治[J]. 水產(chǎn)養(yǎng)殖，（6）：46-47. [Lu X B，Ni Y，Tang D M，Rao J. 2013. The prevention of molt on Acipenser dabryanus[J]. Journal of Aquaculture，（6）：46-47.]

駱慧. 2013. 達(dá)氏鱘微衛(wèi)星分離及其親子鑒定研究[D]. 武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué). [Luo H. 2013. Isolation of microsatellite makers of Dabrys sturgeon and application in its parentage identification[D]. Wuhan：Huazhong Agricultural University.]

馬志宏，楊慧，李鐵梁，羅琳，高俊蓮. 2009. 西伯利亞鱘（Acipenser baerii）致病性維氏氣單胞菌的分離鑒定[J]. 微生物學(xué)報(bào)，49（10）：1289-1294. [Ma Z H，Yang H，Li T L，Luo L，Gao J L. 2009. Isolation and identification of pathogenic Aeromonas veronii isolated from infected Siberian sturgeon（Acipenser baerii）[J]. Acta Microbiologica Sinica，49（10）：1289-1294.]

單喜雙，岳華梅，陳細(xì)華，葉歡，楊曉鴿，李創(chuàng)舉. 2015. 達(dá)氏鱘生長激素基因cDNA克隆、表達(dá)及免疫熒光定位研究[J]. 水生生物學(xué)報(bào)，39（2）：307-314. [Shan X S，Yue H M，Chen X H，Ye H，Yang X G，Li C J. 2015. cDNA cloning，expression and immunolocalization of growth hormone gene in Acipenser dabryanus[J]. Acta Hydrobio-logica Sinica，39（2）：307-314.]

宋振榮，霍振華，董朝基. 2003. 南方人工養(yǎng)殖達(dá)氏鱘心外膜囊腫癥的組織病理研究[J]. 福建水產(chǎn)，（4）：57-62. [Song Z R，Huo Z H，Dong C J. 2003. Studies on histopathology of epicardium cys in cultured sturgeon in the southern[J]. Journal of Fujian Fisheries，（4）：57-62.]

田小龍，張瑞泉，姜蘭，鄧玉婷，譚愛萍，羅理，王偉利. 2015. 水產(chǎn)源氣單胞菌對苯扎溴銨的藥物敏感性分析[J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，46（10）：1903-1908. [Tian X L，Zhang R Q，Jiang L，Deng Y T，Tan A P，Luo L，Wang W L. 2015. Susceptibility of Aeromonas spp. from aquaculture against benzalkonium bromide[J]. Journal of Southern Agriculture，46（10）：1903-1908.]

田照輝，徐紹剛，朱華，胡紅霞，王巍，董穎. 2015. 維氏氣單胞菌感染對西伯利亞鱘血清指標(biāo)和hsp70基因表達(dá)的影響[J]. 大連海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，30（1）：6-12. [Tian Z H，Xu S G，Zhu H，Hu H X，Wang W，Dong Y. 2015. Changes in serum index and hsp70 gene expression in Siberian sturgeon Acipenser baerii challenged with Aeromonas veronii[J]. Journal of Dalian Ocean University，30（1）：6-12.]

王惠. 2014. 不同動(dòng)物源性維氏氣單胞菌的生物特性及四種毒力基因比較研究[D]. 吉林：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué). [Wang H. 2014. Comparative study between biological characteristics of the different animal species Aeromonas veronii and four virulence genes[D]. Jilin：Jilin Agricultural University.]

王興麗，汪開毓，陳德芳，朱劼垚，楊倩，賀揚(yáng)，王二龍. 2016. 一株虹鱒源維氏氣單胞菌的分離鑒定及組織病理學(xué)觀察[J]. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，38（11）：879-883. [Wang X L，Wang K Y，Chen D F，Zhu J Y，Yang Q，He Y，Wang E L. 2016. Isolation and identification of Aeromonas veronii from rainbow trout and histopathology study of the diseased fish[J]. Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine，38（11）：879-883.]

王旭，顏其貴，陳玥，雷燕，左蘭，王志彪，萬莉. 2011. 中國大鯢維氏氣單胞菌病的組織病理學(xué)觀察[J]. 中國獸醫(yī)科學(xué)，41（7）：737-740. [Wang X，Yan Q G，Chen Y，Lei Y，Zuo L，Wang Z B，Wan L. 2011. Histopathological observation of Andrias davidianus infected with Aeromonas veronii[J]. Chinese Veterinary Science，41（7）：737-740.]

謝光美，賈丹，葉華. 2015. 感染維氏氣單胞菌后齊口裂腹魚主要器官組織的病理變化[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，43（20）：117-121. [Xie G M，Jia D，Ye H. 2015. Histopathological changes of Schizothorax prenanti infected with Aeromonas veronii[J]. Journal of Anhui Agricultural Sciences，43（20）：117-121.]

許少洪，李映霞. 2010. 從疑似霍亂病人標(biāo)本中檢出一株維隆氣單胞菌[J]. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，20（7）：1821. [Xu S H，Li Y X. 2010. A strain of Aeromonas veronii was detected from a specimen of a suspected cholera patient[J]. Chinese Journal of Health Laboratory Technology，20（7）：1821.]

楊求華，郭松林，關(guān)瑞章，鄒文政，劉藝華，王甜毅. 2012. 鰻鱺病原性維氏氣單胞菌的分離與鑒定[J]. 生物技術(shù)通報(bào)，（7）：134-139. [Yang Q H，Guo S L，Guan R Z，Zou W Z，Liu Y H，Wang T Y. 2012. Isolation and identification of pathogenic Aeromonas veronii from Anguilla japonica[J]. Biotechnology Bulletin，（7）：134-139.]

楊移斌，夏永濤，邱軍強(qiáng)，曹海鵬，肖艷翼，胡鯤，楊先樂. 2014. 鱘源維氏氣單胞菌分離鑒定及藥敏特性研究[J]. 四川動(dòng)物，33（3）：414-418. [Yang Y B，Xia Y T，Qiu J Q，Cao H P，Xiao Y Y，Hu K，Yang X L. 2014. Isolation and identification of Aeromonas veronii from sturgeon and its antibiotic sensitivity[J]. Sichuan Journal of Zoolo-gy，33（3）：414-418.]

楊澤曉，周亞，任冉陽，王印，姚學(xué)萍，楊水仙，汪開毓. 2012 白緣（?）維氏氣單胞菌的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)[J]. 中國畜牧獸醫(yī)；39（2）：92-95. [Yang Z X，Zhou Y， Ren R Y，Wang Y，Yao X P，Yang S X，Wang K Y. 2012. Isolation，identification and drug susceptibility test of Aeromonas veronii from Liobagrus marginatus Günther[J]. China Animal Husbandry and Veterinary Medicine，39（2）：92-95.]

張冬星，康元環(huán)，田佳鑫，鞠安琪，費(fèi)亦東，賈俊鵬，孫武文，吳同壘，單曉楓，錢愛東. 2017鯽魚源致病性維氏氣單胞菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J]. 中國獸醫(yī)科學(xué)，47（3）：366-374. [Zhang D X，Kang Y H，Tian J X，Ju A Q，F(xiàn)ei Y D，Jia J P，Sun W W，Wu T L，Shan X L，Qian A D. 2017. Isolation，identification and drug susceptibility of the pathogenic Aeromonas veronii from Carassius aumtus[J]. Chinese Veterinary Science，47（3）：366-374.]

張佐，任勝杰，朱龍，袁文清，陳蘭. 2016. 達(dá)氏鱘鰓霉病及細(xì)菌性敗血癥防治一例[J]. 科學(xué)養(yǎng)魚，（2）：63-64. [Zhang Z，Ren S J，Zhu L，Yuan W Q，Chen L. 2016. A case of prevention and treatment of gills disease and bacterial sepsis of Dabrys sturgeon[J]. Scientific Fish Farming，（2）：63-64.]

朱成科，向楨，葉華，鄭曙明，鄭永華. 2013. 黃顙魚致病性維氏氣單胞菌的分離鑒定[J]. 西南大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），35（5）：37-42. [Zhu C K，Xiang Z，Ye H，Zheng S M，Zheng Y H. 2013. Isolation and identification of pathogenic Aeromonas veronii from yellow catfish，Pelteobagrus fulvidraco[J]. Journal of Southwest University（Natural Science Edition），35（5）：37-42.]

Liu Y，Chen Y Y，Gong Q，Lai J S，Du J，Deng X C. 2017. Paternity assignment in the polyploid Acipenser dabryanus based on a novel microsatellite marker system[J]. PLoS One，12（9）：e0185280.

（責(zé)任編輯 蘭宗寶）