周清武

中圖分類號(hào) R917；R979.5 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2018）08-1078-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.08.16

摘 要 目的：探討酶放大免疫測(cè)定技術(shù)（EMIT）檢測(cè)環(huán)孢素血藥濃度的動(dòng)態(tài)飄逸校正系數(shù)。方法：針對(duì)EMIT法檢測(cè)環(huán)孢素藥物濃度的動(dòng)態(tài)飄逸現(xiàn)象，以質(zhì)量濃度為100 ng/mL的環(huán)孢素定標(biāo)液為待測(cè)樣品，選擇其第58、101次檢測(cè)結(jié)果來(lái)進(jìn)行動(dòng)態(tài)飄逸相關(guān)系數(shù)的推擬；分別以上述系數(shù)對(duì)第1、20、45、77、106、115次檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行校正，考察校正質(zhì)量濃度與真實(shí)質(zhì)量濃度的差異。結(jié)果：推擬得動(dòng)態(tài)飄逸系數(shù)k=（1+0.001 235×n0.419 5）n，動(dòng)態(tài)飄逸校正系數(shù)k′ =1/[（1+0.001 235×n0.419 5）n]。各次檢測(cè)結(jié)果經(jīng)校正后，其校正質(zhì)量濃度與真實(shí)質(zhì)量濃度的相對(duì)誤差在±4%之內(nèi)。結(jié)論：推擬所得的動(dòng)態(tài)飄逸校正系數(shù)可用于環(huán)孢素質(zhì)控樣品濃度的動(dòng)態(tài)校正，有助于環(huán)孢素血藥濃度的準(zhǔn)確檢測(cè)。

關(guān)鍵詞 酶放大免疫測(cè)定技術(shù)；環(huán)孢素；血藥濃度；動(dòng)態(tài)飄逸；校正系數(shù)

ABSTRACT OBJECTIVE： To explore the dynamic upwarp state correction coefficient of cyclosporine blood concentration determined by EMIT. METHODS： The dynamic upwarp state of cyclosporine concentration was determined by EMIT. The cyclosporine calibration reagents with concentration of 100 ng/mL was used as the sample to be measured， the 58th and 101st test results were selected to simulate the dynamic upwarp state related coefficients， and the 1st， 20th， 45th， 77th， 106th， 115th test results were corrected by above coefficients. The difference of correction quality concentration with real quality concentration was investigated. RESULTS： The dynamic upwarp state coefficient [k=（1+0.001 235×n0.419 5）n] and dynamic upwarp state correction coefficient {k′ =1/[（1+0.001 235×n0.419 5）n} were obtained. After determination results were corrected， relative error of corrected quality concentration with real quality concentration was within ±4%. CONCLUSIONS： The obtained dynamic upwarp state correction coefficient can be used for dynamic calibration of cyclosporine quality control concentration， which contribute to correct determination of blood concentration of cyclosporine.

KEYWORDS EMIT； Cyclosporine； Blood concentretion； Dynamic upwarp state； Correction coefficient

環(huán)孢素是臨床常用的免疫抑制劑之一，主用于肝、腎、骨髓等器官/組織移植以及再生障礙性貧血、腎病綜合征、干燥綜合征等異常免疫性疾病的治療[1-6]。由于環(huán)孢素的生物利用度及肝消除等個(gè)體差異大、治療窗窄，容易導(dǎo)致治療無(wú)效或中毒[7-8]，故需通過(guò)治療藥物監(jiān)測(cè)（Therapeutic drug monitoring，TDM）來(lái)指導(dǎo)其臨床個(gè)體化合理用藥。

酶放大免疫測(cè)定技術(shù)（Enzyme multiplied immunoassay technique， EMIT）是目前臨床TDM的主要手段之一，具有自動(dòng)化程度高，可多品種、多樣本連續(xù)檢測(cè)，檢測(cè)時(shí)間短，樣品處理簡(jiǎn)單，規(guī)律性強(qiáng)等特點(diǎn)，且當(dāng)試劑瓶中的試劑較多時(shí)，相鄰質(zhì)控樣品檢測(cè)的重現(xiàn)性較好[9]。但該法所用試劑昂貴，且當(dāng)試劑瓶中的試劑較少時(shí)，檢測(cè)結(jié)果會(huì)出現(xiàn)偏差，重現(xiàn)性較差[10-12]。上述偏差的規(guī)律性很強(qiáng)，呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)飄逸現(xiàn)象（即EMIT法檢測(cè)環(huán)孢素全血樣品時(shí)，隨著檢測(cè)次數(shù)的增加、試劑瓶中試劑的揮發(fā)，其質(zhì)控樣品的實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度會(huì)持續(xù)向上飄逸，且試劑越少，飄逸值越大，特別是在批量檢測(cè)次數(shù)較少的試驗(yàn)中尤為突出）[12]。過(guò)去常用多次定標(biāo)或質(zhì)控來(lái)糾正偏差，但必然會(huì)造成大量的試劑浪費(fèi)，增加檢測(cè)成本。因此，為獲取準(zhǔn)確的環(huán)孢素血藥濃度檢測(cè)數(shù)據(jù)，本研究探討了EMIT法檢測(cè)人全血環(huán)孢素藥物濃度的動(dòng)態(tài)飄逸相關(guān)系數(shù)，以動(dòng)態(tài)校正環(huán)孢素實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料

1.1 儀器

Viva-E型全自動(dòng)生化儀（德國(guó)Siemens公司）；Vortex-5型漩渦混合器（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；Sorvall Legend Micro 21型高速臺(tái)式離心機(jī)（德國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）。

1.2 藥品與試劑

環(huán)孢素檢測(cè)試劑盒（包括環(huán)孢素抗體試劑A和酶試劑B，批號(hào)：6R079UL-J2、6R119UL-J2）、環(huán)孢素樣本預(yù)處理液（含硫酸銅、甲醇和乙二醇等蛋白沉淀劑，批號(hào)：6R719UL-J2）、環(huán)孢素定標(biāo)液（質(zhì)量濃度分別為0、50、100、200、350、500 ng/mL，批號(hào)：6R119UL-H2）；雷帕霉素/他克莫司/環(huán)孢素三合一質(zhì)控樣品（雷帕霉素與他克莫司的質(zhì)量濃度均為4.5、11、22 ng/mL，環(huán)孢素質(zhì)量濃度為80、200、350 ng/mL，批號(hào)：6019）均購(gòu)自美國(guó)Siemens Healthcare Diagnostics公司。

1.3 全血樣品來(lái)源

全血樣品來(lái)自于我院行環(huán)孢素TDM的門診及住院患者。

2 方法與結(jié)果

2.1 全血樣品的處理

將環(huán)孢素全血樣品上下顛倒10～15次，輕搖混勻，靜置10 s，備用。依次精密吸取環(huán)孢素樣本預(yù)處理液300 μL和環(huán)孢素全血樣品100 μL，置于1.5 mL聚氯乙烯（PVC）離心管中，渦旋15 s后，靜置2 min，以離心半徑5 cm、轉(zhuǎn)速14 000 r/min離心2 min。精密吸取上清液約250 μL，置于2 mL PVC試管中，上機(jī)檢測(cè)。

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取出貯存于2～8 ℃冰箱中的環(huán)孢素檢測(cè)試劑盒，置于26 ℃水浴中靜置5 min，平衡至室溫，按“2.1”項(xiàng)下方法處理環(huán)孢素定標(biāo)液，使用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)，按儀器操作規(guī)范進(jìn)行定標(biāo)。以吸光度（A）為縱坐標(biāo)、待測(cè)物血藥濃度（c）為橫坐標(biāo)，得環(huán)孢素回歸方程為A=0.271 692+0.080 597{1/[1+e（7.636 17-1.473 60lnc）]}。結(jié)果顯示，環(huán)孢素血藥濃度檢測(cè)線性范圍為40～500 ng/mL。

2.2.2 精密度和準(zhǔn)確度試驗(yàn) 分別取低、中、高質(zhì)量濃度（80、200、350 ng/mL）的環(huán)孢素質(zhì)控樣品各適量，按“2.1”項(xiàng)下方法處理后，進(jìn)樣分析。單日內(nèi)平行操作5次，連續(xù)測(cè)定5 d，考察精密度和準(zhǔn)確度。結(jié)果顯示，各質(zhì)控樣品的日內(nèi)、日間RSD均小于9%，相對(duì)誤差均低于3%，符合《中國(guó)藥典》對(duì)生物樣品定量分析的要求[13]，詳見表1。

2.2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取低、高質(zhì)量濃度（80、350 ng/mL）的環(huán)孢素質(zhì)控樣品各適量，在室溫條件下分別放置8、24 h后，按“2.1”項(xiàng)下方法處理，進(jìn)樣分析，考察其穩(wěn)定性（各質(zhì)量濃度平行操作5次）。結(jié)果顯示，各質(zhì)控樣品在室溫條件下放置8、24 h穩(wěn)定，相對(duì)誤差在±3%以內(nèi)（RSD<7%，n=5），詳見表2。

2.3 動(dòng)態(tài)飄逸現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)

筆者在采用EMIT法檢測(cè)環(huán)孢素血藥濃度的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，隨著檢測(cè)次數(shù)（n）的增加，試劑瓶中的試劑逐漸減少，質(zhì)控樣品的實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度會(huì)逐漸升高，且初始升高的幅度較小，隨后幅度逐漸增大，呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)飄逸現(xiàn)象，具有非常穩(wěn)定的規(guī)律性，即“試劑瓶底效應(yīng)”[12，14]。故擬用恰當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)函數(shù)式來(lái)表示，以有助于獲取更為準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果。

2.4 動(dòng)態(tài)飄逸相關(guān)系數(shù)的推擬

2.4.1 相關(guān)假設(shè)及公式推導(dǎo) 設(shè)定動(dòng)態(tài)飄逸系數(shù)為k，得：

該式中，c測(cè)定為實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度，c真實(shí)為真實(shí)質(zhì)量濃度（即標(biāo)示質(zhì)量濃度）。

設(shè)定每次實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度與上次實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度比較（首次檢測(cè)即為其實(shí)測(cè)結(jié)果與真實(shí)質(zhì)量濃度比較）增加的平均系數(shù)為a，那么第1次檢測(cè)的動(dòng)態(tài)飄逸系數(shù)為（1+a），第2次檢測(cè)的動(dòng)態(tài)飄逸系數(shù)為（1+a）2，第3次檢測(cè)的飄逸系數(shù)為（1+a）3，第n次檢測(cè)的動(dòng)態(tài)飄逸系數(shù)為：

研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，a值也同樣存在動(dòng)態(tài)飄逸現(xiàn)象，且呈現(xiàn)出先小后大的上翹拋物線，可用指數(shù)函數(shù)來(lái)表示。設(shè)定指數(shù)函數(shù)的變量為n（即檢測(cè)次數(shù)），系數(shù)為b，指數(shù)為c，得a的指數(shù)函數(shù)為：

2.4.2 a、b、c值的計(jì)算 當(dāng)n值較小時(shí)，實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度的飄逸值也較小，故本研究以真實(shí)質(zhì)量濃度為100 ng/mL的環(huán)孢素定標(biāo)液為待測(cè)樣品（環(huán)孢素有效治療濃度為100～200 ng/mL[7]），選擇其第58次和第101次的檢測(cè)結(jié)果（前期試驗(yàn)顯示，當(dāng)n為50、100左右時(shí)，其k值突躍明顯且適中）來(lái)計(jì)算a、b、c值。其中，第58、101次的實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度分別為c58=148.0 ng/mL，c101=236.5 ng/mL。由式③解得：a58=e[ln（148.0/100）/58]-1=0.006 78，a101=e[ln（236.5/100）/101]-1=0.008 56；由a58、a101、式④解得：b=0.001 235，c=0.419 5。

2.4.3 k的推擬 將b、c值代入式⑥，即得環(huán)孢素血藥濃度檢測(cè)的動(dòng)態(tài)飄逸系數(shù)k=（1+0.001 235×n0.419 5）n。檢測(cè)次數(shù)（n）與動(dòng)態(tài)飄逸系數(shù)（k）的關(guān)系圖見圖1。

2.4.4 k′ 的推擬 由式⑦可知，環(huán)孢素標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控檢測(cè)的動(dòng)態(tài)飄逸校正系數(shù)k′ =1/[（1+0.001 235×n0.419 5）n]。

2.5 驗(yàn)證試驗(yàn)

以真實(shí)質(zhì)量濃度為100 ng/mL的環(huán)孢素定標(biāo)液作為待測(cè)樣品，以k′ 對(duì)其第1、20、45、77、106、115次檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行校正。結(jié)果顯示，各校正質(zhì)量濃度與真實(shí)理論濃度的相對(duì)誤差在±4%之內(nèi)，詳見表3。

2.6 不同批次環(huán)孢素檢測(cè)試劑盒k與k′ 值的比較

以近期使用的2個(gè)不同批次的環(huán)孢素檢測(cè)試劑盒為研究對(duì)象，采用上述方法測(cè)定其k和k′ 。當(dāng)n=120時(shí)，得2個(gè)批次環(huán)孢素檢測(cè)試劑盒的k分別為3.002（k1）和3.223（k2），k′ 分別為0.333（k′ 1）、0.310（k′ 2）；采用上述2種檢測(cè)試劑盒檢測(cè)環(huán)孢素全血樣品得實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度為300.2 ng/mL（n=120），分別經(jīng)k′ 1、k′ 2校正得校正質(zhì)量濃度分別為100.0、93.1 ng/mL，兩者的相對(duì)誤差為-6.90%，提示其差異較小。

3 討論

3.1 EMIT法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程及注意事項(xiàng)

EMIT法為臨床環(huán)孢素TDM的常用方法之一。全血樣品中的環(huán)孢素與酶試劑中標(biāo)記的重組酶葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（rG6PDH）的環(huán)孢素發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，有活性的rG6PDH將抗體試劑中的氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸轉(zhuǎn)化為還原型，從而導(dǎo)致酶活性下降，引起吸光度的改變。EMIT法具有專屬性強(qiáng)、自動(dòng)化程度高、可連續(xù)檢測(cè)、檢測(cè)時(shí)間短、樣品處理簡(jiǎn)單等特點(diǎn)，其必要的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程及注意事項(xiàng)如下[9]：

3.1.1 儀器系統(tǒng) 定期清洗比色盤及進(jìn)樣針，可以減少比色盤的污染程度，減緩比色盤空白值的上升速度，棄用空白值偏差較大的比色杯；應(yīng)確保系統(tǒng)液體管路不漏氣，系統(tǒng)用純化水電導(dǎo)率<10 μS/cm；將新制純化水裝滿系統(tǒng)用水專用塑料桶后，立即加蓋密封，并靜置24 h以上以排盡桶內(nèi)空氣，從而降低微生物污染和生長(zhǎng)的概率。

3.1.2 環(huán)境溫度、濕度 EMIT法檢測(cè)溫度要求在18～25 ℃內(nèi)，室溫變化對(duì)檢測(cè)結(jié)果會(huì)有較大影響[11，15]。因此，為減少溫度變化對(duì)檢測(cè)的影響，本研究將室溫控制在21～23 ℃內(nèi)波動(dòng)，溫差<2 ℃，以減少溫度對(duì)檢測(cè)的不良影響[11-12]；將相對(duì)濕度保持在50%左右，以減少試劑揮發(fā)量的波動(dòng)。

3.1.3 環(huán)孢素標(biāo)準(zhǔn)樣品的分裝 將環(huán)孢素定標(biāo)液和質(zhì)控品置于-20℃冰箱中貯存；使用前應(yīng)將其置于26 ℃水浴中靜置10 min，平衡至室溫，顛倒輕搖10～15次使之混勻，靜置10 s后，精密吸取100 μL至1.5 mL PVC管中，密封貯存于-20 ℃的冰箱中，并在有效期內(nèi)使用，以確保環(huán)孢素定標(biāo)液和質(zhì)控樣品質(zhì)量濃度的穩(wěn)定。

3.1.4 環(huán)孢素檢測(cè)試劑盒 將環(huán)孢素檢測(cè)試劑盒放置于2～8 ℃冰箱中貯存；使用前將其置于26 ℃水浴中靜置5 min，平衡至室溫；檢測(cè)結(jié)束時(shí)，立即封蓋并放回冰箱中，盡量縮短室溫放置時(shí)間，以有助于保持試劑穩(wěn)定。

3.2 動(dòng)態(tài)飄逸現(xiàn)象的原因分析

（1）單個(gè)樣品檢測(cè)需用時(shí)14 min；當(dāng)進(jìn)行多個(gè)樣品批量檢測(cè)時(shí)，每增加1個(gè)樣品，耗時(shí)需增加0.5 min。試劑瓶口內(nèi)徑為1.4 cm，且瓶底伴有冷風(fēng)（溫度：16.5 ℃）。隨著檢測(cè)時(shí)間的延長(zhǎng)，試劑瓶中的溶劑揮發(fā)導(dǎo)致試劑濃縮，是引起EMIT法動(dòng)態(tài)飄逸現(xiàn)象的根本原因。（2）由于臨床檢測(cè)需要，會(huì)對(duì)檢測(cè)試劑進(jìn)行分裝，因此多次出現(xiàn)“試劑瓶底效應(yīng)”，從而影響檢測(cè)結(jié)果，加速試劑揮發(fā)，造成動(dòng)態(tài)飄逸現(xiàn)象。（3）檢測(cè)儀器同樣也會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成影響，現(xiàn)有儀器尚無(wú)法解決檢測(cè)過(guò)程中廣口試劑瓶溶劑揮發(fā)的問(wèn)題，仍有待于生產(chǎn)廠商的進(jìn)一步研發(fā)。

3.3 檢測(cè)時(shí)長(zhǎng)與批量檢測(cè)

由前期試驗(yàn)可知，試劑揮發(fā)量與檢測(cè)時(shí)長(zhǎng)有關(guān)。對(duì)于相同數(shù)量的待測(cè)樣品，批量檢測(cè)越多，所需檢測(cè)時(shí)長(zhǎng)越短，試劑揮發(fā)量越少，動(dòng)態(tài)飄逸系數(shù)則越小。本研究所用儀器的樣品盤中共51個(gè)樣本位，若使用環(huán)孢素檢測(cè)試劑盒測(cè)定120個(gè)全血樣本（額定檢測(cè)量），單獨(dú)檢測(cè)所需的最大時(shí)長(zhǎng)為1 680 min；而批量檢測(cè)所需的最小時(shí)長(zhǎng)僅為101 min，相當(dāng)于單獨(dú)檢測(cè)8次（n=8），由“2.4.3”項(xiàng)下公式計(jì)算可知，動(dòng)態(tài)飄逸系數(shù)k8=1.024，比k0（k0=1）增加了2.4%，檢測(cè)偏差<3%。因此，筆者建議盡可能批量檢測(cè)，以有效縮短檢測(cè)時(shí)間及動(dòng)態(tài)飄逸系數(shù)；此外，為減少試劑揮發(fā)，檢測(cè)完畢后應(yīng)盡快密封試劑瓶。

3.4 k與k′ 值的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值

（1）使用k值，可預(yù)知環(huán)孢素實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度的動(dòng)態(tài)飄逸倍數(shù)，由k=（1+0.001 235×n0.419 5）n可知，當(dāng)n=29時(shí)，動(dòng)態(tài)飄逸系數(shù)k29=1.158，k29比k0增加了15.8%，檢測(cè)偏差會(huì)超過(guò)2015年版《中國(guó)藥典》（四部）對(duì)生物樣品定量分析準(zhǔn)確度的要求（15%之內(nèi)）[13]，應(yīng)引起TDM工作者的注意。此外，由于EMIT法測(cè)定環(huán)孢素血藥濃度的定量上限為500 ng/mL，而當(dāng)n=87時(shí)，k87=2.007，其實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度會(huì)增加1倍，故第87次以后的檢測(cè)，預(yù)估環(huán)孢素質(zhì)量濃度>250 ng/mL的全血樣品應(yīng)先用空白全血稀釋1倍后再行檢測(cè)；該法的定量下限為40 ng/mL，當(dāng)k>3時(shí)，檢測(cè)全血樣品的真實(shí)質(zhì)量濃度可低至14 ng/mL。（2）使用k′ 值，可將環(huán)孢素實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度換算為真實(shí)質(zhì)量濃度，有助于獲取更為準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果。

3.5 EMIT法檢測(cè)環(huán)孢素藥物濃度的校正方法比較

（1）定標(biāo)法：當(dāng)實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度與真實(shí)質(zhì)量濃度存在較大偏差時(shí)，首先考慮的是重新定標(biāo)，優(yōu)點(diǎn)是重新獲得定標(biāo)曲線，且短期內(nèi)準(zhǔn)確度較高；但會(huì)造成昂貴試劑的大量浪費(fèi)，且使用不久后便會(huì)再次出現(xiàn)較大偏差，不得不重新定標(biāo)，對(duì)于批量檢測(cè)較少的實(shí)驗(yàn)室而言，勢(shì)必會(huì)增加檢測(cè)成本。（2）質(zhì)控法：即每做10次樣品檢測(cè)，便進(jìn)行1次質(zhì)控檢測(cè)，用所得的校正系數(shù)來(lái)校正環(huán)孢素全血樣品的實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度；或者在批量檢測(cè)的樣品盤中放置1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控樣品，行同法校正，以解決同批次樣品檢測(cè)的準(zhǔn)確性問(wèn)題[12]。該法的優(yōu)點(diǎn)是短期內(nèi)準(zhǔn)確度好，但不適用于以單個(gè)樣品檢測(cè)為主的實(shí)驗(yàn)室。（3）動(dòng)態(tài)飄逸校正法：采用本研究所推擬的動(dòng)態(tài)飄逸校正系數(shù)，只需不定期進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控驗(yàn)證檢測(cè)，即可清楚了解儀器系統(tǒng)檢測(cè)的準(zhǔn)確程度，且經(jīng)校正后的實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度準(zhǔn)確度較高，有效地減少了試劑的浪費(fèi)。上述3種校正方法均有助于獲取更為真實(shí)的實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)，但與前兩者比較，動(dòng)態(tài)飄逸校正法在減少試劑浪費(fèi)、提高檢測(cè)效率等方面更具有優(yōu)勢(shì)。

4 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，EMIT法檢測(cè)環(huán)孢素藥物濃度存在動(dòng)態(tài)飄逸現(xiàn)象，可采用本研究推擬所得的動(dòng)態(tài)飄逸校正系數(shù)對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行動(dòng)態(tài)校正，有助于環(huán)孢素血藥濃度的準(zhǔn)確檢測(cè)，可為臨床TDM工作的順利開展提供技術(shù)支持。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] 楊晨，黃海. 環(huán)孢素A與他克莫司應(yīng)用于肝移植受者的藥物經(jīng)濟(jì)學(xué)評(píng)價(jià)[J]. 實(shí)用藥物與臨床，2012，15（12）：784-786.

[ 2 ] 王慶娥. 腎移植患者環(huán)孢素A血藥濃度監(jiān)測(cè)及結(jié)果分析[J]. 臨床合理用藥雜志，2011，4（9B）：144-145.

[ 3 ] 賈暖，孫成春，董玉波. 骨髓移植患者術(shù)后環(huán)孢素血藥濃度監(jiān)測(cè)[J]. 中國(guó)醫(yī)院用藥評(píng)價(jià)與分析，2012，12（5）：436-437.

[ 4 ] 朱愿超，梁良，趙明，等. 再生障礙性貧血患者環(huán)孢素A血藥濃度監(jiān)測(cè)的回顧性分析[J].臨床藥物治療雜志，2015，13（5）：20-24.

[ 5 ] 賈暖，張莉，劉洋，等. 難治性腎病綜合征環(huán)孢素A血藥濃度監(jiān)測(cè)結(jié)果分析[J]. 臨床藥物治療雜志，2015，13（3）：72-74.

[ 6 ] 陳莉瑩，孫華瑜，巫斌，等. 環(huán)孢素A治療原發(fā)性干燥綜合征并難治性血小板減少癥[J]. 中國(guó)臨床醫(yī)學(xué)，2008，15（6）：902-903.

[ 7 ] 陳國(guó)寧，祁峰. 676例環(huán)孢素A血藥濃度影響因素分析[J]. 黑龍江醫(yī)藥，2016，29（6）：1080-1084.

[ 8 ] 崔彥，周金玉，孫增先，等. 酶放大免疫法與熒光偏振免疫法檢測(cè)環(huán)孢素A血藥濃度對(duì)比研究[J].中國(guó)藥業(yè)，2013，22（19）：17-18.

[ 9 ] 楊艷，張婉婷，姚曉東，等. 均相酶擴(kuò)大免疫法與高效液相色譜法測(cè)定癲癇患兒丙戊酸鈉血藥濃度比較研究[J].中國(guó)生化藥物雜志，2015，35（4）：169-172.

[10] 喬小云，王羽，王璐璐，等. 均相酶擴(kuò)大免疫分析法監(jiān)測(cè)地高辛血藥濃度的質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)[J].中國(guó)藥師，2010，13（3）：387-389.

[11] 喬小云，朱懷軍，王羽. 酶放大免疫分析法監(jiān)測(cè)萬(wàn)古霉素血藥濃度的質(zhì)控評(píng)估[J].藥學(xué)與臨床研究，2013，21（5）：516-519.

[12] 張麗娟，陳璐. 酶增強(qiáng)免疫分析法測(cè)定環(huán)孢素A和他克莫司血藥濃度的質(zhì)量控制[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2014，11（36）：79-82、107.

[13] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：四部[S].2015年版. 北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：363-368.

[14] 張君仁.體內(nèi)藥物分析[M]. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2002：92.

[15] 喬小云，陳沖，蔣俊毅. 用酶增強(qiáng)免疫分析法監(jiān)測(cè)他克莫司血藥濃度的質(zhì)控評(píng)估[J].藥學(xué)服務(wù)與研究，2010，10（1）：40-43.

（收稿日期：2017-05-13 修回日期：2018-02-28）

（編輯：張?jiān)拢?/p>