劉寰宇， 王 瑩， 嚴(yán)文平， 劉 勇， 蘭 衛(wèi)

(新疆醫(yī)科大學(xué)1中醫(yī)學(xué)院， 烏魯木齊 830011; 2附屬中醫(yī)醫(yī)院， 烏魯木齊 830002; 3新疆鴻德堂永盛藥業(yè)有限公司， 烏魯木齊 830011)

小枝玫瑰為薔薇科植物玫瑰(RosarugosaThunb)中紫紅花重瓣玫瑰(R.rugosaf.plenaByhouwer)中的小枝玫瑰(BranchletRose)干燥花蕾，為中華人民共和國藥典收載品種[1]。 玫瑰具有抗心肌缺血[2]、抑菌[3]、調(diào)節(jié)血脂[4]、抗抑郁[5]等作用。小枝玫瑰具有芳香開竅、安神止痛、軟腸通便、滋補腸胃、改善消化、驅(qū)風(fēng)消炎、潤膚生輝功能[6]。主要含有木犀草素、槲皮素和沒食子酸等成分[7]。本研究以乙醇體積分?jǐn)?shù)、乙醇用量和提取時間為考察因素，以蘆丁為對照品，通過單因素試驗和正交試驗，最后確定小枝玫瑰總黃酮最佳提取工藝，為小枝玫瑰黃酮的質(zhì)量控制和工業(yè)化生產(chǎn)提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1儀器DHG-9240A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實驗設(shè)備有限公司)，UV2550型紫外分光光度計(日本島津公司)，EYELA SB-1000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海愛朗儀器有限公司) ，UV-2550型紫外光譜儀(日本島津) ，AL 104型電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)，SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)。

1.2試劑蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(上海源葉生物科技有限公司，批號：20160530)， 95%乙醇(天津富宇化工廠，批號：20160826)，硝酸鋁(天津富宇化工廠，批號：20151009)、氫氧化鈉(天津富宇化工廠，批號：20160415)、亞硝酸鈉(天津富宇化工廠，批號：20160823)，試劑均為分析純；蒸餾水為去離子水。

1.3藥材小枝玫瑰2017年3月購買于新疆鴻德堂永盛藥業(yè)有限公司(批號：20161012)，經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院中藥資源教研室主任盛萍教授鑒定為薔薇科植物玫瑰(RosarugosaThunb)中紫紅花重瓣玫瑰(R.rugosaf.plenaByhouwer)中的小枝玫瑰(branchlet rose)的干燥花蕾。

2 方法與結(jié)果

2.1對照品溶液的制備稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品2.95 mg，用乙醇定容至25 mL容量瓶中，得到濃度為0.118 mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.2線性關(guān)系考察吸取“2.1”項下蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液1、2、3、4、5 mL，分別加入5%亞硝酸鈉0.3 mL，反應(yīng)6 min，加入10%硝酸鋁0.3 mL，反應(yīng)6 min，加入4%氫氧化鈉3 mL，充分搖勻，定容至10 mL容量瓶中反應(yīng)15 min，測定500 nm處吸光度。以濃度為縱坐標(biāo)(Y)，吸光度值為橫坐標(biāo)(X)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=9.449 2X-0.005 1，r=0.999 3，蘆丁濃度在0.011 8～0.059 0 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3單因素試驗

2.3.1 乙醇濃度對玫瑰總黃酮含量的影響 稱取小枝玫瑰粉5份，每份1 g，溫度80℃ ，次數(shù)1次，料液比1∶12，時間60 min，加熱回流提取，提取溶劑分別為30%、40%、50%、70%、90%乙醇，測定500 nm處吸光度，吸光度(A) 分別為0.288、0.427、0.517、0.485、0.187，總黃酮含量分別為37.24、54.91、66.35、62.28、24.40 mg/g。選擇40%、50%、70%乙醇作為正交試驗考察因素。

2.3.2 料液比對玫瑰總黃酮含量的影響 稱取小枝玫瑰粉5份，每份1 g，溫度80℃，提取次數(shù)1次，乙醇濃度50%，時間60 min，加熱回流提取，料液比分別為1∶8、1∶12、1∶16、1∶20、1∶25，測定500 nm處吸光度，吸光度(A) 分別為0.480、0.517、0.361、0.347、0.293，總黃酮含量分別為51.37、66.35、70.86、74.57、78.91 mg/g。選擇料液比1∶8、1∶12、1∶16作為正交試驗考察因素。

2.3.3 提取時間對玫瑰總黃酮含量的影響 稱取小枝玫瑰粉5份，每份1 g，溫度80℃，提取次數(shù)1次，乙醇濃度50%，料液比1∶12，加熱回流提取，時間分別為30、60、90、120、150 min，測定500 nm處吸光度，吸光度(A) 分別為0.491、0.517、0.498、0.473、0.435，總黃酮含量分別為63.05、66.35、63.40、60.76、55.93 mg/g。選擇提取時間30、60、90 min作為正交試驗考察因素。

2.4正交試驗根據(jù)單因素預(yù)試驗的結(jié)果，選擇溶劑濃度(A)、料液比(B)、提取時間(D)3個因素，每個因素3個水平，以小枝玫瑰總黃酮提取量為指標(biāo)，采用L9(33)正交表做正交試驗設(shè)計，見表1。稱取小枝玫瑰27份，每份1 g，每種條件平行提取3份樣品，以小枝玫瑰總黃酮提取量為指標(biāo)，對結(jié)果進(jìn)行極差分析，以確定最佳提取條件，正交試驗安排及含量測定結(jié)果，見表2。方差分析結(jié)果表明，各因素對小枝玫瑰中總黃酮含量影響的順序是B>A>C，(即料液比>乙醇濃度>提取時間)。A、B因素與各因素之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P<0.05和P<0.01)，即乙醇濃度和料液比對小枝玫瑰中總黃酮的含量具有顯著性影響。C因素與各因素間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，即提取時間對小枝玫瑰中總黃酮的含量影響不顯著。最佳工藝為A2B3C1，即50%乙醇，料液比1∶16，提取30 min，見表3。

表1正交試驗設(shè)計表

2.5驗證試驗稱取干燥小枝玫瑰花粉3份,每份1 g，按照提取工藝A2B3C1進(jìn)行提取，對正交試驗優(yōu)選的條件進(jìn)行驗證試驗,得到小枝玫瑰總黃酮提取量分別為66.82、65.99、67.02 mg/g，平均值為66.61 mg/g，表明方法與正交試驗結(jié)果基本相同。

表2 正交表及含量測定結(jié)果(n=27)

表3 方差分析結(jié)果

注：F1-0.05(2,2)=19.00，F(xiàn)1-0.01(2,2)=99.00。

3 討論

近年來，學(xué)者們對小枝玫瑰開展多方面研究，帕爾哈提·柔孜等[8]報道玫瑰花瓣總黃酮和總多糖具有體外抗氧化活性；姜君君等[9]測定了小枝玫瑰花中沒食子酸含量；郭玉婷等[10]研究了新疆小枝玫瑰對正常小鼠降糖作用及機制；蘭衛(wèi)等[11]研究了小枝玫瑰提取物對四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的降低作用及對糖耐量的提高作用。小枝玫瑰中主要含有揮發(fā)油、黃酮類、多酚、花青素類等成分是人體口服產(chǎn)生藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)。黃酮類化合物是其主要的活性成分，本研究確定了小枝玫瑰總黃酮最佳提取工藝條件，提取工藝簡單、實用，可為大規(guī)模提取小枝玫瑰黃酮提供理論依據(jù)。