楊京

（上海中醫(yī)藥大學(xué) 上海 201203）

銀杏葉為銀杏科植物銀杏Ginkgo biloba L.的干燥葉，味甘、苦、澀，平。歸心、肺經(jīng)。具有活血化瘀，通絡(luò)止痛，斂肺平喘，化濁降脂之功效[1]。銀杏葉提取物為銀杏葉經(jīng)加工制成的提取物，對(duì)心血管、神經(jīng)、呼吸、免疫等多系統(tǒng)疾病均有效[2-3]。因而對(duì)銀杏葉提取物的制備工藝進(jìn)行研究具有重要意義。

1.儀器與材料

1.1 儀器

高效液相色譜儀（Aligent公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；電子分析天平（賽多利斯）。

1.2 材料

銀杏葉（上海康橋中藥飲片有限公司）；無水乙醇、甲醇、鹽酸、磷酸均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司

2.實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 銀杏葉提取物的制備

精確稱取10g 銀杏葉細(xì)粉于圓底燒瓶中，加入乙醇加熱回流提取，合并提取液，過濾，回收乙醇，并濃縮至適量，精密量取1ml置于100ml容量瓶中，甲醇定容。

2.2 銀杏葉提取物中總黃酮醇苷含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Dikma Diamonsil Plus C18（5μm，4.6mm×250mm），流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸溶液（53∶47），檢測(cè)波長(zhǎng)：360nm，柱溫：30℃。

2.2.2 供試品溶液的制備 取銀杏葉提取物0.1g，精密稱定，加甲醇-25%鹽酸溶液（4∶1）的混合溶液25ml，置水浴中加熱回流30min，迅速冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 單因素考察試驗(yàn)

2.3.1 乙醇濃度對(duì)總黃酮醇苷提取率的影響

精確稱取10g 銀杏葉細(xì)粉，分別加入8倍量的不同濃度的乙醇（20%、40%、60%、80%）加熱回流提取3次，考察不同濃度乙醇對(duì)總黃酮醇苷提取率的影響。結(jié)果表明，隨著乙醇濃度升高，總黃酮醇苷的提取率逐漸升高，當(dāng)乙醇濃度升至60%之后，總黃酮醇苷的提取率升至85.2%±12.1%，并且提取率趨于穩(wěn)定。當(dāng)乙醇濃度升至80%，提取率為87.3%±9.7%。因此，將選擇乙醇濃度為60%、70%、80%進(jìn)行正交試驗(yàn)，結(jié)果見圖1。

圖1 乙醇濃度對(duì)銀杏葉提取物總黃酮醇提取率的影響

2.3.2 提取次數(shù)對(duì)總黃酮醇苷提取率的影響

精確稱取10g銀杏葉細(xì)粉，分別加入8倍量的60%乙醇加熱回流提取，考察不同提取次數(shù)（1次、2次、3次、4次）對(duì)總黃酮醇苷提取率的影響。結(jié)果顯示采用60%乙醇提取銀杏葉總黃酮醇苷，提取3次以上，提取率基本趨于穩(wěn)定，結(jié)果見圖2。為了節(jié)省時(shí)間，特選擇提取次數(shù)為3次。

圖2 不同提取次數(shù)對(duì)銀杏葉提取物總黃酮醇提取率的影響

2.4 正交試驗(yàn)

單因素考察結(jié)果顯示，影響銀杏葉提取物收率的主要因素有乙醇濃度、溶媒用量、提取時(shí)間，對(duì)以上三個(gè)因素各選三個(gè)水平，利用L9（34）表進(jìn)行正交試驗(yàn)，見表1。

表1 因素水平表

由方差分析結(jié)果顯示，銀杏葉乙醇回流過程中，乙醇濃度（A）、乙醇體積（B）、回流時(shí)間（C）三因素中的主要因素是乙醇濃度（A），最佳提取工藝為A2B2C2，見表2～3。即稱取銀杏葉藥材粉加入8倍量的70%乙醇回流提取3次，每次2h，合并提取液，過濾，回收乙醇，真空干燥，即得。

表2 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)表及結(jié)果

表3 評(píng)價(jià)指標(biāo)正交試驗(yàn)方差分析結(jié)果

2.5 銀杏葉乙醇回流工藝條件驗(yàn)證

按照正交試驗(yàn)優(yōu)選的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行提取，平行三次，測(cè)定回流液中總黃酮醇苷的提取率，測(cè)定結(jié)果見表4。結(jié)論：正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選的乙醇回流工藝穩(wěn)定可靠，可用于銀杏葉提取物的制備。

表4 正交試驗(yàn)驗(yàn)證

3.結(jié)論

本研究通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，確定了銀杏葉提取物制備的最佳工藝條件為：8倍量的70%乙醇回流提取3次，每次2h。