侯巍，郭莉，陽愛國，莫茜，尹杰，袁東波

（四川省動物疫病預(yù)防控制中心，四川 成都 610041）

腹瀉常發(fā)生于幼犬，病犬排便次數(shù)增多，其糞便稀軟或呈水樣，有時糞便惡臭及有出血，患犬營養(yǎng)不良、電解質(zhì)失調(diào)、酸堿平衡紊亂。引起犬腹瀉的病毒主要有細(xì)小病毒、冠狀病毒、輪狀病毒。

犬腹瀉致病原因復(fù)雜，若治療不及時會引起脫水、低鉀血癥、酸中毒等，嚴(yán)重時可導(dǎo)致犬只死亡。

1 犬細(xì)小病毒

犬細(xì)小病毒病為一種急性傳染病，患犬發(fā)病特征為有出血性腸炎或非化膿性心肌炎，其多發(fā)生于幼犬，患犬病死率為10%～50%。

1.1 生物學(xué)特性 細(xì)小病毒顆粒呈二十面體對稱，直徑約26nm，內(nèi)含ssDNA，長約5200bp。細(xì)小病毒的復(fù)制只發(fā)生在活躍的正在增殖的細(xì)胞中。

犬細(xì)小病毒感染從1978年被證實后，發(fā)現(xiàn)病毒在不斷變異，1979年出現(xiàn)CPV-2a，該病毒犬敏感，并可使貓發(fā)病。1984年出現(xiàn)CPV-2b，該毒株在426位由天冬酰胺轉(zhuǎn)換為天冬氨酸，隨后，一些國家陸續(xù)分離到CPV-2c型，該病毒在426位由天冬氨酸轉(zhuǎn)換為谷氨酸。

1.2 常見檢測方法

1.2.1 血凝-血凝抑制試驗（HA-HI） HA主要用來檢測糞便中的CPV-2血凝效價，HI主要用于流行病學(xué)調(diào)查，偶爾用于糞便中腸道抗體的檢測。

有學(xué)者認(rèn)為用V型微量血凝板和0.5%～1%的豬紅細(xì)胞懸液進行試驗，pH值范圍在6.8～7.2之間陽性率最高，反應(yīng)溫度以2～4℃或22℃為宜。在實驗摸索中，有學(xué)者提出，在HA-Hl試驗中加入含明膠的0.15MPBS以助結(jié)果判定，國內(nèi)學(xué)者用二巰基乙醇處理糞便，也可使陽性檢出率提高。

1.2.2 瓊脂擴散試驗 該方法為常規(guī)診斷法，較HA試驗敏感性差。Klingeharn采用Wadsworth’s改良的雙向擴散試驗檢測糞便上清液中的CPV抗原，澆板的凝膠為Diffoc瓊脂糖，稀釋液為TEN緩沖液，37℃孵育24h即可出現(xiàn)沉淀線。

1.2.3 血清中和試驗 有學(xué)者采用稀釋病毒——固定血清法在細(xì)胞培養(yǎng)物中根據(jù)滅活血清中和犬細(xì)小病毒的中和指數(shù)來判定，方法是連續(xù)用10倍稀釋度的病變懸液與1∶25稀釋的血清等量混合，于20℃感作1h后，每個病毒——血清混合物分別接種三個培養(yǎng)管，2～3d后用純甲醇或甲醛固定，然后用MG、G染色或HE染色，檢查有無核內(nèi)包涵體，并計算中和指數(shù)。

1.2.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA） ELSIA既可用于檢測犬細(xì)小病毒抗原，也可檢測抗體。有學(xué)者采用不同的ELISA方法成功檢出了犬細(xì)小病毒。

2 犬冠狀病毒

犬冠狀病毒性腸炎是以引起患犬頻繁嘔吐和腹瀉為特征的高度接觸性傳染病。該病1974年首先報道，此后很多國家和地區(qū)相繼發(fā)現(xiàn)本病暴發(fā)流行。

2.1 生物學(xué)特性 冠狀病毒（CCV）屬尼多病毒目（Nidovirales）單股正鏈RNA病毒，具有多形態(tài)性，多數(shù)呈圓形或橢圓形，其不小不一，小的直徑50～60nm，大的直徑為150nm以上。

病毒外被一層近似雙層的囊膜，囊膜上布有花瓣樣的突起，其長約20 nm，突起排列有序，間隔較寬，呈皇冠狀。冠狀病毒由4種結(jié)構(gòu)蛋白構(gòu)成。

2.2 常用檢測方法

2.2.1 熒光抗體技術(shù) 應(yīng)用犬冠狀病毒特異熒光抗體直接對腸黏膜或刮取的腸黏膜細(xì)胞進行染色，如在胞漿中發(fā)現(xiàn)特異熒光，則可確定為犬冠狀病毒感染。

有學(xué)者采用直接熒光抗體技術(shù)評價了犬冠狀病毒弱毒疫苗免疫的犬，病毒在腸道的增殖情況。另有學(xué)者采用間接熒光抗體技術(shù)檢查了人工接種CCV1-71病犬，發(fā)現(xiàn)接種后2d可在其十二指腸見到熒光細(xì)胞，接種后4d可在回腸見到熒光細(xì)胞。

2.2.2 夾心EL1SA法 Tuchiya首先建立了CCV的雙抗體夾心ELIsA方法，發(fā)現(xiàn)該法與間接熒光抗體方法檢測CCV抗原的結(jié)果一致，其具有良好的特異性。有學(xué)者在荷蘭進行的犬細(xì)小病毒、冠狀病毒和輪狀病毒性腸炎的流行病學(xué)調(diào)查中，亦建立了雙抗體夾心法。該法簡捷方便，適于大規(guī)模檢查犬細(xì)小病毒、輪狀病毒和CCV抗原。國內(nèi)有學(xué)者采用純化病毒免疫豚鼠制備CCV特異抗體，建立了CCV雙抗體夾心ELISA法，其檢查結(jié)果與電鏡檢查結(jié)果一致。

3 輪狀病毒

犬輪狀病毒（CRV）主要侵害新生幼犬，患犬以腹瀉為特征。導(dǎo)致本病的傳染源主要是病犬和隱性帶毒犬，病毒主要通過消化道傳染，被污染的用具和環(huán)境可使健康犬感染。

3.1 生物學(xué)特性 CRV屬呼腸病毒科、輪狀病毒屬，核酸型為雙股RNA。糞便標(biāo)本負(fù)染后電鏡觀察，可見完全病毒和缺乏核衣殼的不完全病毒。細(xì)胞培養(yǎng)物電鏡觀察，病毒粒子直徑 68～83nm，存在于胞漿內(nèi)，無囊膜，二十面體立體對稱，病毒衣殼呈雙層結(jié)構(gòu)，內(nèi)層衣殼放射狀排列，如車輪的條輻，其外由外殼膜包圍，如同車胎一樣，故稱為輪狀病毒。

輪狀病毒因抗原性不同分為A組和B-E組，A組為典型的輪狀病毒，具有共同的抗原成分。B-E組為副輪狀的病毒，每組有其特有的抗原交叉反應(yīng)。經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳分析，輪狀病毒由11條RNA片段組成。

3.2 常用檢測方法

3.2.1 熒光抗體試驗 取腹瀉早期犬空腸、回腸黏膜涂片，用冷丙酮固定，然后用熒光素標(biāo)記特異熒光抗體，于室溫下染色、沖洗后，在熒光顯微鏡下檢查，如見陽性熒光細(xì)胞，即可診斷為該病毒。本法較常用，是快速的常規(guī)檢測方法。

3.2.2 電鏡觀察 取患犬腹瀉汁或后段小腸內(nèi)容物制樣，用磷鎢酸負(fù)染后鏡檢，若發(fā)現(xiàn)輪狀形態(tài)，即可判為陽性。此法操作簡便、可靠，可直接觀察到犬輪狀病毒顆粒。

3.2.3 酶聯(lián)免疫吸附檢測 本方法可區(qū)分出人和動物的輪狀病毒。此法快速簡便，應(yīng)用廣泛。