劉 敏，趙大鵬，吳興國(guó)，王詠梅

（山東省泰安市中心醫(yī)院，山東 泰安 271000）

宮腔粘連（intrauterine adhesions，IUA）亦稱阿是曼綜合征（Asherman syndrome），于1894年由Fritsch首次報(bào)道［1］，明確定義其為子宮內(nèi)膜基底層損傷后修復(fù)障礙導(dǎo)致宮腔部分或全部粘連閉塞，常伴發(fā)月經(jīng)異常、周期性腹痛、不孕及反復(fù)流產(chǎn)等臨床表現(xiàn)［2］。目前，宮腔粘連的發(fā)病機(jī)制尚未明確，子宮內(nèi)膜基底層的損傷被認(rèn)為是導(dǎo)致宮腔粘連的關(guān)鍵因素［3］，炎癥介導(dǎo)的子宮內(nèi)膜的損傷也在宮腔粘連的發(fā)病機(jī)制中起著決定性的作用［4］。白細(xì)胞介素-8（interleukin-8，IL-8）與腫瘤壞死因子-a（tumor necrosis factor-a，TNF-a）是近年來(lái)研究較多的與炎癥發(fā)病相關(guān)的因子。IL-8與TNF-a兩者特異性結(jié)合，在炎癥細(xì)胞的黏附、滲出、侵襲、增殖等過(guò)程中發(fā)揮重要的生物學(xué)作用。有研究發(fā)現(xiàn)，宮腔粘連患者纖維化內(nèi)膜及病灶周圍組織中，均有IL-8和TNF-a的表達(dá)，且纖維化內(nèi)膜組織中的表達(dá)明顯高于正常內(nèi)膜組織，說(shuō)明IL-8、TNF-a在子宮內(nèi)膜纖維化的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起一定作用［5］。

本課題通過(guò)RT-PCR的檢測(cè)方法測(cè)定IL-8及TNF-a在大鼠宮腔粘連組織中的表達(dá)，探討IL-8及TNF-a在大鼠子宮纖維化內(nèi)膜中的表達(dá)及觀察復(fù)方公英散對(duì)其表達(dá)的影響，為闡明宮腔粘連的發(fā)病機(jī)制及復(fù)方公英散的推廣使用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康成熟未曾交配過(guò)的雌性SD大鼠45只，體質(zhì)量250～280g，購(gòu)自山東大學(xué)附屬齊魯醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（動(dòng)物使用許可證SCXK魯2017-0001）。自然光照，常規(guī)飼養(yǎng)。

實(shí)驗(yàn)藥物復(fù)方公英散來(lái)源于泰安市中心醫(yī)院婦科臨床經(jīng)驗(yàn)方。由蒲公英30g，赤芍20g，丹皮20g，薏苡仁30g，三七粉6g，白芷10g，紅藤20g，桂枝15g，連翹15g，甘草10g組成，經(jīng)提取精制而成。

1.2 方法

動(dòng)物模型：采用非動(dòng)情期刮宮法建立大鼠宮腔粘連模型［6］，建模在無(wú)菌操作下進(jìn)行。消毒備皮區(qū)皮膚，腹腔注射水合氯酵麻醉，取下腹正中縱切口，尋找雙側(cè)子宮。取一側(cè)子宮，于子宮分叉右上方行切口，盡量避開(kāi)血管，刮勺搔刮右宮腔，當(dāng)搔刮子宮四壁感覺(jué)粗糙時(shí)，停止刮宮。

分組給藥：SD雌性大鼠30只，按照上述造模方法制作大鼠宮腔粘連動(dòng)物模型。造模7天后隨機(jī)分為模型組和復(fù)方公英散組各15只，每只動(dòng)物每天灌胃1次，每組均連續(xù)給藥28天。具體分組和給藥劑量如下：①空白組用生理鹽水；②模型組用生理鹽水；③復(fù)方公英散組用復(fù)方公英散0.4g/mL。以上各組均按每天每100g體質(zhì)量1mL計(jì)算給藥。

標(biāo)本獲?。焊鹘M大鼠于末次給藥24h內(nèi)行大鼠脫臼猝死開(kāi)腹，取各組正常子宮內(nèi)膜和纖維化內(nèi)膜組織，放入液氮并轉(zhuǎn)入-80℃冰箱。

1.3 RT-PCR

采用RT-PCR法檢測(cè)各組內(nèi)膜組織中IL-8及TNF-a mRNA的表達(dá)（逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和RNA 提取試劑購(gòu)自山東騰云生物科技有限公司）。引物設(shè)計(jì)：IL-8上游引物5'-CATGGATCTGTCGTAGGGCT-3'，下游引物5'-CTGACCAACAGACCAGGGTT-3'；TNF-α上游引物5'-ATGGTCACCCTCAGATCAGC-3'，下游引物5'-TTGACCGCTGAA GAG ACCCT-3'；GAPDH上游引物5' -ATGTTTGTGATG GGCGTG AACC-3'，下游引物5'-CCCAGCATCGAAGGTAGAGGA-3'。反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性5min；94℃變性30s；IL-8 55℃退火30s；TNF-α58℃退火30s；72℃延伸30s，共35個(gè)循環(huán)；72℃最后延伸7min。

2 結(jié) 果

模型組大鼠纖維化內(nèi)膜組織與空白組正常子宮內(nèi)膜組織中IL-8 mRNA的表達(dá)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。模型組及正常子宮內(nèi)膜組織均有表達(dá)TNF-a mRNA，分別為3.004±0.264、0.360±0.421，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。給藥28天后，治療組內(nèi)膜組織IL-8 mRNA表達(dá)下降，與模型組及空白組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；治療組TNF-mRNA的表達(dá)下降，與模型組及空白組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見(jiàn)表1。

表1 模型組及空白組中IL-8mRNA、TNF--a mRNA表達(dá)比較 （±s）

表1 模型組及空白組中IL-8mRNA、TNF--a mRNA表達(dá)比較 （±s）

組別 例 mRNA IL-8 TNF-a模型組 10 2.861±0.427 3.004±0.264空白組 10 0.216±0.043 0.360±0.421治療組 10 0.646±0.264 0.587±0.476

3 討 論

宮腔粘連是由于宮腔操作術(shù)中沖任胞宮，胞脈受金屬器械所傷，離經(jīng)瘀血形成。患者濕熱內(nèi)襲，蘊(yùn)于下焦，若術(shù)后起居失宜、攝生不慎，外邪襲內(nèi)，入于胞中，與瘀搏結(jié)，以致閉經(jīng)；或術(shù)前即有生殖系統(tǒng)感染，術(shù)后發(fā)作，此時(shí)濕熱淚結(jié)滯于胞絡(luò)之間，便形成纖維粘連。濕、熱、瘀血是宮腔粘連的主要病理基礎(chǔ)，可類比于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)之“炎癥反應(yīng)”與“纖維化病變”：炎癥反應(yīng)屬于早期發(fā)病階段，此時(shí)由于濕與熱困阻于胞絡(luò)，粘連較少或尚未形成，但局部炎性缺氧缺血狀態(tài)己經(jīng)形成，為粘連的形成創(chuàng)造了環(huán)境基礎(chǔ)。到炎性反應(yīng)末期，濕熱與瘀血搏結(jié)，瘢痕化形成，發(fā)生內(nèi)膜纖維化改變，腔鏡下觀察粘連帶呈機(jī)化，白色索狀粘連。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究認(rèn)為，白細(xì)胞介素多在炎癥反應(yīng)中作用廣泛，也可調(diào)節(jié)免疫機(jī)能。IL-8屬于C-X-C亞家族，其來(lái)源于如中性粒細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等等，是一種庭化性細(xì)胞因子，可激化活嗜中性粒細(xì)胞，具有調(diào)節(jié)免疫和炎癥反應(yīng)的作用［7］。腫瘤壞死因子－a（TNF-a）可產(chǎn)生炎癥介質(zhì)，參與炎癥反應(yīng)，調(diào)節(jié)免疫機(jī)能，是一種促炎因子［8］。TNF-a在創(chuàng)傷修復(fù)過(guò)程中會(huì)促發(fā)成纖維細(xì)胞增生，促進(jìn)傷口愈合。子宮內(nèi)膜受到損傷后的愈合過(guò)程與傷口愈合類似。因此推測(cè)IL-8、TNF-a與宮腔粘連具有相關(guān)性。

復(fù)方公英散是趙錫民教授根據(jù)宮腔粘連“濕熱淚結(jié)”的病機(jī)，遵循辨證與辨病相結(jié)合的原則，謹(jǐn)守病機(jī)特點(diǎn)，兼容自己多年之潛心研究而成。該方采用顆粒劑型，藥物組成包括蒲公英、赤芍、丹皮等，具有活血化瘀、清熱滲濕之功效。臨床研究表明，復(fù)方公英散可抑制子宮內(nèi)膜纖維化病灶的生長(zhǎng)，減少閉經(jīng)等癥狀，且在宮腔鏡治療宮腔粘連術(shù)后有抑制其復(fù)發(fā)作用?；谝陨?，本研究觀察大鼠子宮內(nèi)膜組織中IL-8、TNF-a表達(dá)，發(fā)現(xiàn)大鼠纖維化內(nèi)膜組織的表達(dá)高于正常子宮內(nèi)膜組織。而且復(fù)方公英散可影響宮腔粘連組織IL-8、TNF-a的表達(dá)，說(shuō)明復(fù)方公英散對(duì)大鼠子宮內(nèi)膜纖維化的治療作用可能與抑制IL-8、TNF-a的表達(dá)有一定關(guān)系。通過(guò)本研究為進(jìn)一步探討宮腔粘連的發(fā)病機(jī)制及復(fù)方公英散的治療作用和推廣使用提供了理論依據(jù)。