包 強(qiáng)，肖 蕾，楊文波，周品謙，李耀明，歐高財(cái)，王沅江*

（1.湖南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 茶葉研究所，國家茶樹改良中心 湖南分中心，湖南 長沙 410125；2.湖南省植保植檢站，湖南 長沙 410127）

茶毛蟲（Euproctis pseudoconspersa），鱗翅目（Lepidoptera），毒蛾科（Lymantriidae），是茶樹的主要害蟲之一，以幼蟲主要危害茶樹的葉片，大量發(fā)生時(shí)將茶樹芽葉、嫩梢、樹皮咀食殆盡，嚴(yán)重影響茶葉的產(chǎn)量和茶樹的長勢[1-2]。局部茶園茶毛蟲的防治因化學(xué)防治造成再猖獗，同時(shí)化學(xué)農(nóng)藥殘留嚴(yán)重影響和制約了茶葉的優(yōu)質(zhì)生產(chǎn)，尋找一種高效、無污染、無農(nóng)藥殘留、無副作用的新技術(shù)防控茶毛蟲是目前茶樹病蟲害防治中的重要的研究課題之一。

白僵菌（Beauveria bassiana）是昆蟲病原真菌之一，能夠在自然條件下通過體壁接觸感染殺死多種農(nóng)林害蟲，且對(duì)人畜無毒，對(duì)作物安全，無殘留、無污染。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，白僵菌可寄生15個(gè)目149個(gè)科700余種[3-4]。近年來研究學(xué)者引進(jìn)白僵菌防治茶麗紋象甲、茶角胸葉甲和茶小綠葉蟬等茶園害蟲取得一些進(jìn)展[5-7]，由于白僵菌菌株在轉(zhuǎn)寄主過程中致病性發(fā)生一定的改變，在應(yīng)用白僵菌防治病蟲前需要對(duì)該蟲開展必要的室內(nèi)研究以探明白僵菌菌株最佳濃度及害蟲抵抗逆境脅迫下的能力，基于此目的開展本研究，為白僵菌對(duì)茶毛蟲的生物防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試菌藥

孢子含量為400億個(gè)孢子/g的球孢白僵菌水分分散粒劑，由山西綠海農(nóng)藥科技有限公司生產(chǎn)。

1.2 供試蟲體

采自湖南懷化沅陵縣三眼橋茶廠基地第一代茶毛蟲所產(chǎn)卵塊孵化，用新鮮茶梢飼養(yǎng)在室內(nèi)至4齡幼蟲，供試驗(yàn)使用。

1.3 孢子懸浮液的配置

用分析天平稱取25.00 g 400億個(gè)孢子/g球孢白僵菌放入滅菌過的三角錐形瓶，用量筒量取1000 mL的0.05%吐溫-80溶液搖勻配置成濃度為1.0×109孢子/mL的孢子懸浮液母液，用移液管依次移取母液稀釋配置1.0×108、1.0×107、1.0×106、1.0×105孢子 /mL的孢子懸浮液，共計(jì)5個(gè)濃度。

1.4 接種

每個(gè)濃度為1個(gè)處理，每個(gè)處理重復(fù)4次，以0.05%吐溫-80溶液為對(duì)照。每個(gè)處理6頭茶毛蟲幼蟲。采用浸漬法接種，將試蟲浸入到孢子懸浮液中5 s，對(duì)照浸沾0.05%吐溫-80溶液，用滅菌過的濾紙吸干蟲體表面多余的菌液。接種后把試蟲置于一次性滅菌過自制塑料盒（蓋子表面用紗布自制通氣部位）中，用基部包有濕潤脫脂棉的新鮮茶梢置于25℃、濕度95%、L∶D＝1∶1的培養(yǎng)箱飼養(yǎng)，每2 d更換1次新鮮的茶梢。

1.5 調(diào)查與統(tǒng)計(jì)分析

接菌處理后第2 d開始，每天調(diào)查1次茶毛蟲的死亡情況。如發(fā)現(xiàn)死蟲，將其移出塑料盒并置于無菌培養(yǎng)皿內(nèi)保濕培養(yǎng)，觀察死蟲上是否長出菌絲。死亡率、校正死亡率的計(jì)算公式如下：

累計(jì)死亡率（%）＝（死亡蟲口數(shù)/處理總蟲數(shù)）×100

累計(jì)校正死亡率（%）＝（處理組累計(jì)死亡率-對(duì)照組累計(jì)死亡率）/（1-對(duì)照組累計(jì)死亡率）×100

采用SPSS17.0軟件中單因素方差分析對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。利用鄧肯氏新復(fù)極差法對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行多重比較分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 致病性

試驗(yàn)結(jié)果表明，白僵菌孢子懸浮液可以感染茶毛蟲幼蟲，白僵菌孢子進(jìn)入蟲體，白僵菌在蟲體萌發(fā)生長，達(dá)到致死茶毛蟲幼蟲的效果（表1）。

2.2 死亡率

從表1可知，白僵菌孢子懸浮液處理的茶毛蟲幼蟲死亡率上升，隨著濃度增大需要的半數(shù)死亡時(shí)間逐漸縮短，致死率也逐漸升高。105個(gè)孢子/mL濃度白僵菌孢子懸浮液處理的茶毛蟲在藥后第5 d后出現(xiàn)死亡，死亡率16.67±13.61%；1.0×107個(gè)孢子/mL濃度白僵菌孢子懸浮液在藥后第7 d茶毛蟲致死率達(dá)到50%，半致死亡時(shí)間為7 d；1.0×108個(gè)孢子/mL濃度半致死亡時(shí)間僅1 d，死亡率達(dá)到了61.11±20.79%，差異顯著。109個(gè)孢子/mL濃度處理的茶毛蟲處理后一天全部死亡，死亡率達(dá)到100±0.00%。

2.3 化蛹率

研究發(fā)現(xiàn)，茶毛蟲4齡幼蟲在室內(nèi)飼養(yǎng)能化蛹，受到白僵菌孢子懸浮液脅迫下部分蟲體通過提前化蛹來避免菌液對(duì)自身的影響。由圖1可知，在清水處理下，茶毛蟲在第5 d后進(jìn)行化蛹，第6 d全部化蛹；在105～106白僵菌孢子懸浮液濃度下，存活的部分茶毛蟲在第4 d化蛹，與清水相比，提前1 d。但隨菌液濃度增大，在大于108個(gè)孢子濃度下，茶毛蟲不能通過化蛹來躲避白僵菌的脅迫而死去。

表1 不同劑量的白僵菌菌液處理下茶毛蟲的累計(jì)校正死亡率Table 1 Cumulative corrected mortality of tea caterpillars treated with different doses of Beauveria tenella

圖1 不同濃度的白僵菌孢子懸浮液下茶毛蟲化蛹率的比較Fig. 1 Comparison of the rates of tea caterpillar pupation under different concentrations of Beauveria tenella spore suspension

3 結(jié)論與討論

白僵菌作為昆蟲病原真菌之一，能夠在自然條件下通過體壁接觸感染殺死多種農(nóng)林害蟲。本研究結(jié)果表明，白僵菌孢子懸浮液通過接觸蟲體感染茶毛蟲幼蟲后在蟲體萌發(fā)，達(dá)到致死幼蟲的作用。白僵菌孢子懸浮液處理的茶毛蟲幼蟲死亡率上升，隨著濃度增大半致死亡需要的時(shí)間逐漸縮短，致死率逐漸升高。1.0×107個(gè)孢子/mL濃度白僵菌孢子懸浮液在藥后第7 d茶毛蟲致死率達(dá)到50%，半致死亡時(shí)間為7 d；1.0×108個(gè)孢子/mL濃度半致死亡時(shí)間僅1 d，死亡率達(dá)到了61.11%，差異顯著。1.0×109個(gè)孢子/mL濃度處理的茶毛蟲處理后一天全部死亡，死亡率達(dá)到100%，推薦使用1.00×108個(gè)孢子/mL濃度防治茶毛蟲幼蟲。本試驗(yàn)結(jié)論為田間防治應(yīng)用濃度提供了一個(gè)初篩基礎(chǔ)，具體田間的應(yīng)用效果需要進(jìn)一步驗(yàn)證篩選。

在白僵菌孢子懸浮液脅迫下部分蟲體通過提前化蛹來避免菌液對(duì)自身的影響。在105～106白僵菌孢子懸浮液濃度下，存活的部分茶毛蟲在第4 d化蛹，與清水相比，提前1 d。但隨菌液濃度增大，在大于108個(gè)孢子濃度下，茶毛蟲不能通過化蛹來躲避白僵菌的脅迫而死去，說明茶毛蟲幼蟲自身存在抵抗白僵菌逆境脅迫的機(jī)制，有待進(jìn)一步明確。