懷雪，孟永海，吳麗紅,馬智超，孟祥瑛，王艷艷

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，教育部北藥基礎(chǔ)與應(yīng)用研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江省中藥及天然藥物藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江　哈爾濱　150040)

薔薇科植物刺玫果果實(shí)營養(yǎng)價(jià)值極高，內(nèi)含豐富的黃酮類、甾醇、三萜類、脂肪油、有機(jī)酸、香豆素類、皂苷、蛋白質(zhì)、糖類、揮發(fā)油[1-3]和17種氨基酸[4]，其中蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸及賴氨酸等7種為人體所必需而又不能自身合成的氨基酸；含有28種微量元素，有豐富的生物活性，其中比較明確的有鋅、鐵、硒等14種人體必須的微量元素[5]。號(hào)稱“生命之花”的天然刺玫果被視為天然濃縮的多種維生素[6],是飲料和保健品的重要原料。為此，我們對刺玫果抗疲勞抗衰老作用進(jìn)行了研究，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1　動(dòng)物

ICR小鼠60只，雄性，體質(zhì)量(20±2)g；ICR 老齡鼠50只，雄性，均由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥物安全性評價(jià)中心提供。

1.2　藥物與試劑

刺玫果產(chǎn)自大興安嶺；肝/肌糖原試劑盒，丙二醛(MDA)試劑盒，總超氧化物歧化酶(T-SOD)試劑盒，蛋白定量(BCA)試劑盒，還原型谷胱甘肽(GSH)試劑盒(南京建成生物研究所)。

1.3　儀器

水浴鍋(HWS24)；低溫離心機(jī)(Eppendorf 5840R)；分析天平(型號(hào)：MS105，梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；Thermo紫外分光光度計(jì)(美國)；Thermo酶標(biāo)儀(美國)。

2　方法

2.1　刺玫果提取物的制備

水煎液的制備：用8倍體積蒸餾水煎煮刺玫果，文火煎煮1 h，反復(fù)煎煮3次，合并濾液，配成濃度為0.4 g/ml的水煎液，冷藏備用。

醇沉和上清液的制備：水煎煮同上，將濃縮后的水煎液用80%的乙醇醇沉24 h，過濾，分別收集濾渣和濾液，濾渣過濾凍干，濾液濃縮凍干。需要時(shí)配置成含生藥量為0.4 g/ml的溶液。

回流組分的制備：濃度為80%醇回流提取刺玫果，回流1 h，反復(fù)回流3次，合并濾液，濃縮，凍干，需要時(shí)配制成含生藥量為0.4 g/ml的溶液。

2.2　實(shí)驗(yàn)分組與方法

2.2.1抗疲勞實(shí)驗(yàn)[7]

每組10只，分為5組即對照組、水煎液組、醇沉組、上清組、回流組，給藥體積為20 mg/kg,給藥濃度均為含生藥量8 g/(kg· d)。對照組給等體積的生理鹽水，上午10時(shí)給藥，連續(xù)給藥10天，末次給藥30 min后，將小鼠放入50×40×40 cm大水箱中，水溫(30±2)℃，以小鼠沉入水中10 s內(nèi)頭不浮出水面視為力竭，記錄其開始游泳時(shí)間至力竭時(shí)間為力竭游泳時(shí)間。力竭后立即斷頭，在冰上迅速取肌肉組織和肝組織，取胸腺和脾用分析天平稱量，按照試劑盒說明書測其肌糖原和肝糖原含量。

2.2.2抗衰老實(shí)驗(yàn)

每組10只，共分6組即青年組、老年組、老年水煎液組、老年醇沉組、老年上清組、老年回流組。給藥劑量同上,青年、老年組給等體積的生理鹽水，連續(xù)給藥30天，末次給藥后，分別眼球取血，低溫離心血清，測定SOD、MDA。冰上取肝組織，測定BCA、GSH。

2.3　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3　結(jié)果

3.1　抗疲勞鼠體質(zhì)量變化、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)比較

結(jié)果見圖1。給藥組的體質(zhì)量變化明顯低于對照組，水煎液、上清、回流組脾重和脾臟指數(shù)高于對照組，上清、回流組胸腺和胸腺指數(shù)高于對照組。

圖1　抗疲勞鼠體質(zhì)量變化、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)比較

3.2　抗疲勞實(shí)驗(yàn)鼠力竭游泳時(shí)間、肝糖原、肌糖原比較

表1　抗疲勞實(shí)驗(yàn)鼠力竭游泳時(shí)間、肝糖原、肌糖原含量比較

注：與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01

結(jié)果見表1。與對照組相比，水煎液組力竭游泳時(shí)間明顯長于對照組，且有顯著性差異(P<0.05)，回流組小鼠力竭游泳時(shí)間明顯長于對照組，且有極顯著差異(P<0.01)。與對照組相比，水煎液組肝糖原含量明顯高于對照組，有極顯著差異(P<0.01);上清組和回流組肝糖原含量明顯高于對照組，有顯著性差異(P<0.05)。與對照組相比，水煎液組肌糖原含量明顯高于對照組，有極顯著差異(P<0.01)，回流組肝糖原含量明顯高于對照組，有顯著性差異(P<0.05)。

3.3　抗衰老實(shí)驗(yàn)小鼠血清SOD、MDA含量以及肝組織10%勻漿GSH含量比較

結(jié)果見表2。青年組MDA、SOD、及肝組織10%勻漿GSH含量與各組相比有顯著性差異(P<0.01,P<0.05)。老年水煎液組和老年回流組MDA含量與老年組相比有顯著性差異(P<0.05)。老年水煎液組和老年醇沉組SOD含量與老年組相比有極顯著性差異(P<0.01)。老年水煎液組和老年上清組GSH含量與老年組相比有極顯著性差異(P<0.01)。

表2　小鼠SOD、MDA、肝組織10%勻漿GSH含量比較

注：與老年組比較，*P<0.05，**P<0.01；與青年組比較，ΔP<0.05,ΔΔP<0.01

4　討論

本實(shí)驗(yàn)研究刺玫果不同提取方式對實(shí)驗(yàn)小鼠抗疲勞抗衰老的藥理作用。研究結(jié)果表明，刺玫果4種提取方式均有抗疲勞，延緩衰老的作用。數(shù)據(jù)顯示，在實(shí)驗(yàn)期間，在投食相同飼料時(shí)，給藥組的體質(zhì)量變化沒有對照組體質(zhì)量變化明顯，刺玫果提取物能調(diào)節(jié)機(jī)體自身代謝，維持體質(zhì)量相對穩(wěn)定。上清組和回流組的臟器指數(shù)高于對照組，可見刺玫果對免疫功能的影響有待深入研究[8]?？蛊谠囼?yàn)中，力竭游泳實(shí)驗(yàn)作為耐力指標(biāo)[9]，肌糖原和肝糖原含量與耐力指標(biāo)密切相關(guān)[10]。刺玫果提取物對小鼠力竭游泳時(shí)間，肝、肌糖原含量均有顯著的提高，顯示了刺玫果良好的抗疲勞作用?，F(xiàn)代研究表明，刺玫果具有一定的體外抗氧化活性[11]，近年來研究認(rèn)為,抗衰老的一種機(jī)制為清除自由基延緩衰老[12]，自由基的代謝產(chǎn)物MDA和機(jī)體內(nèi)抗氧化物質(zhì)SOD是衰老的兩項(xiàng)生化指標(biāo)[13-16]。本實(shí)驗(yàn)顯示，抗衰老試驗(yàn)中老年水煎液組與老年組相比，MDA含量明顯降低，SOD、GSH含量明顯升高，說明刺玫果水煎液有良好的抗衰老效果。而其他組分對其效果也有一定的趨勢，但不全有顯著性差異，可能是同等劑量下不同提取方式藥物有效成分含量不同，有待于進(jìn)一步考證。

綜上所述，刺玫果提取物對抗疲勞和抗衰老有一定的功效，尤以水提物效果最為明顯。