秦麗靜

【摘 要】本文對不同來源的胰蛋白酶所存在的質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行了相應(yīng)的分析，并針對所分析的風(fēng)險(xiǎn)，提出了相應(yīng)的控制手段，從而保證無論哪種來源的胰蛋白酶，均可很好的將其質(zhì)量控制在要求的安全限度內(nèi)，從而保證最終藥品的質(zhì)量安全。

【關(guān)鍵詞】重組源；動(dòng)物源；質(zhì)量控制

【中圖分類號(hào)】R4 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】2095-6851（2018）05--01

胰蛋白酶是目前生物制藥企業(yè)生產(chǎn)常用的一種蛋白水解酶，屬于絲氨酸家族，由223個(gè)氨基酸殘基組成，在一些重組產(chǎn)品或細(xì)胞培養(yǎng)的生產(chǎn)過程中起酶切轉(zhuǎn)化或消化作用等。胰蛋白酶的來源主要分為兩種，一種來自于生物體的胰臟，如牛、豬的胰臟，其成份復(fù)雜，單純靠檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)很難達(dá)到質(zhì)量安全；另一種是利用重組技術(shù)通過發(fā)酵生產(chǎn)的重組胰蛋白酶。重組胰蛋白酶相對于動(dòng)物源的胰蛋白酶其成份簡單，無支原體、噬菌體和病毒外源因子的風(fēng)險(xiǎn)，但由于重組技術(shù)生產(chǎn)的成本較高，因此價(jià)格相對于動(dòng)物源胰蛋白酶高出許多。通常生物制藥企業(yè)在生產(chǎn)時(shí)對于胰蛋白酶的使用量相對較大，會(huì)造成生產(chǎn)成本提高，所以目前市場上仍以動(dòng)物源胰蛋白酶為主。

一 胰蛋白酶的功能

胰蛋白酶是一種肽鏈內(nèi)切酶，它可以在賴氨酸和精氨酸C段將多肽切斷。在培養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候，胰蛋白酶的主要功能就是將細(xì)胞之間的黏蛋白和糖蛋白進(jìn)行分離，這種將培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行分離的方法，能夠促進(jìn)細(xì)胞同培養(yǎng)液進(jìn)行全方位接觸，利于培養(yǎng)，胰蛋白酶的活力主要是通過分解相應(yīng)的酪蛋白的能力來對其進(jìn)行標(biāo)識(shí)[1]。

二 不同來源的胰蛋白酶的安全風(fēng)險(xiǎn)分析

動(dòng)物源胰蛋白酶的主要來源就是由對動(dòng)物胰臟浸出液體進(jìn)行制作，其原料主要來自豬或牛的胰臟。在使用牛的胰臟時(shí)，首先要考慮牛是否具有瘋牛病，并且也要對牛源病毒的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行控制，所以目前也有許多企業(yè)生產(chǎn)豬胰蛋白酶。根據(jù)相關(guān)報(bào)道，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了80多類豬源可攜帶相應(yīng)病毒，豬和人有68種病毒基本一致。雖然在制作胰蛋白酶的過程當(dāng)中采用了合適的方法對其進(jìn)行了處理，但是動(dòng)物的胰臟很可能帶有多種病原體，而制作方法的除菌性較弱，所以導(dǎo)致制作出的胰蛋白酶仍舊攜帶某種外源性病毒。根據(jù)《中國藥典》2015年版三部中的《生物制品生產(chǎn)用原材料及輔料質(zhì)量控制規(guī)程》的風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)劃分，動(dòng)物源胰蛋白水解酶為風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)的第4級(jí)，是風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)最高的物料。

對于重組胰蛋白酶，由于其生產(chǎn)是利用重組發(fā)酵技術(shù)，因此所生產(chǎn)出的胰蛋白酶存在的主要安全風(fēng)險(xiǎn)為生物技術(shù)所固有的殘留量方面，如宿主蛋白的殘留，宿主DNA的殘留、抗生素殘留等。根據(jù)《中國藥典》2015年版三部中的《生物制品生產(chǎn)用原材料及輔料質(zhì)量控制規(guī)程》的風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)劃分，重組源的蛋白水解酶為物料風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)的第3級(jí)，其風(fēng)險(xiǎn)級(jí)別低于動(dòng)物源胰蛋白酶。

三 如何加強(qiáng)動(dòng)物源胰蛋白酶質(zhì)量控制

（一）加強(qiáng)對胰蛋白酶外源性病毒的檢測。若想做好胰蛋白酶的質(zhì)量控制環(huán)節(jié)，其重點(diǎn)就是對內(nèi)源和外源性病毒的控制。最近這幾年來，國外已經(jīng)對外源性病毒的檢測手段進(jìn)行了完善，這使得胰蛋白酶的外源性病毒檢查種類得到了一定增加，同時(shí)也能夠最大程度上控制了胰蛋白酶中的外源性病毒潛在風(fēng)險(xiǎn)。針對外源性病毒的檢查方式主要包括特異性和非特異性外源病毒因子的檢測形式。特異性檢查主要是針對某種特定特定病毒的檢測方法，非特異性檢查主要是采用合適的方法來對具有某種特征的病毒進(jìn)行普遍檢查。特異性檢測方式的精準(zhǔn)度和靈敏性都要優(yōu)于非特異性檢查方法[2]。

（二）創(chuàng)造良好的病毒滅活方法。雖然對胰蛋白酶的外源性病毒檢測力度正在不斷增強(qiáng)，但是目前的檢測手段仍然具有較高的局限性，在生產(chǎn)時(shí)依舊會(huì)蘊(yùn)藏著較大的風(fēng)險(xiǎn)，所以在制作胰蛋白酶的過程中，應(yīng)該采用合適的病毒滅火方法，這樣就能股使外源性病毒得到最大程度的清除，也是目前防止胰蛋白酶中存在外源性病毒的最佳防護(hù)手段。目前我國在對胰蛋白酶進(jìn)行病毒滅活的主要方法為加熱法或者是γ射線照射法。但是在使用這兩種方法的同時(shí)，也會(huì)在一定程度上降低了胰蛋白酶的活性。所以科研人員逐漸使用紫外線照射或者電子束照射技術(shù)來代替?zhèn)鹘y(tǒng)方法，這兩種照射方式不但保障了病毒滅活的效果，同時(shí)也能夠防止出現(xiàn)胰蛋白酶活性降低的現(xiàn)象。在制作胰蛋白酶時(shí)可以采取以上方法中的任意一種，或者多種滅活方法進(jìn)行結(jié)合的方式，這樣就能夠使外源性病毒滅活效果達(dá)到最佳，在使用相關(guān)滅活方法的時(shí)候，一定要按照相關(guān)方法的實(shí)施規(guī)定和要求進(jìn)行。

四 如何加強(qiáng)重組胰蛋白酶質(zhì)量控制

重組胰蛋白酶若想做好質(zhì)量控制，重點(diǎn)是保證上游發(fā)酵和下游純化的整個(gè)生產(chǎn)過程中的相關(guān)雜質(zhì)及殘留得到有效控制。由于目前生物制品的生產(chǎn)技術(shù)成熟，所有工藝雜質(zhì)及工藝殘留情況均可以通過優(yōu)化后續(xù)的生產(chǎn)工藝技術(shù)使雜質(zhì)及殘留得到有效控制，并達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的安全限度，從而保證風(fēng)險(xiǎn)物質(zhì)得到有效去除或控制，同時(shí)也可通過現(xiàn)有的殘留檢測技術(shù)得到有效證明。

五 結(jié)束語

胰蛋白酶的質(zhì)量與生物制品的質(zhì)量和安全性有著緊密聯(lián)系，其作為一種源自動(dòng)物的生物產(chǎn)物，只依靠對產(chǎn)品的檢驗(yàn)無法達(dá)到對其質(zhì)量的控制，尤其是檢查其外源性病毒感染情況。所以，應(yīng)該對生物制品生產(chǎn)所用的胰蛋白酶進(jìn)行全方位的質(zhì)量控制，建立完善的質(zhì)量控制以及檢查方式，遵循去除外源性病毒的處理方式，這樣才能夠真正徹底的做到控制甚至消除胰蛋白酶帶來的威脅，增強(qiáng)生物制品的安全性。對于重組胰蛋白酶，主要控制工藝相關(guān)雜質(zhì)及工藝殘留物質(zhì)，如宿主蛋白、宿主DNA及抗生素殘留等，從而保證生物制品的安全性。

參考文獻(xiàn)

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楊新建，段素云，王偉青，李凌燕，施鵬飛，田璐，肖海峻.基于任務(wù)驅(qū)動(dòng)的課程改革思路、措施與成效——以“生物制品生產(chǎn)與檢測”課程為例[J].北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)，2015，29（01）：97-102.