張燊璐 肖盼盼

【摘 要】目的：探討不同臨床標(biāo)本實時熒光定量 PCR診斷結(jié)核分枝桿菌的檢出率差異。方法：2014年8月～2017年7月，隨機(jī)選擇我院收治的疑似結(jié)核病患者219例作為研究對象，收集其呼吸道、體液標(biāo)本，進(jìn)行熒光定量PCR檢測，觀察對比不同類型臨床標(biāo)本檢出率情況。結(jié)果：經(jīng)由實驗室診斷確診為肺結(jié)核患者67例，其中支氣管灌洗液檢檢出率為54.76%（23/42），支氣管刷物檢出率為38.46%（15/39），尿液檢出率為27.91%（12/43），痰液檢出率為21.05%（8/38），胸腔積液檢出率為17.14%（6/35），腹腔積液檢出率為13.64%（3/22），各標(biāo)本之間檢出率對比差異存在統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05。結(jié)論：在結(jié)核分枝桿菌診斷過程中，實時熒光定量 PCR診斷具有較高的應(yīng)用價值，且不同臨床標(biāo)本檢出率存在明顯差異，臨床診斷操作應(yīng)有所側(cè)重。

【關(guān)鍵詞】結(jié)核分枝桿菌；實時熒光定量 PCR診斷；標(biāo)本；檢出率

【中圖分類號】R521 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B 【文章編號】2095-6851（2018）04-0-02

結(jié)核病屬全球范圍內(nèi)高發(fā)疾病，日漸成為威脅人類健康的主要公共衛(wèi)生問題，我國為結(jié)核病高發(fā)區(qū)，結(jié)核病發(fā)病人數(shù)眾多，嚴(yán)重威脅我國居民身體健康[1]。針對結(jié)核病患者早診斷早治療意義重大，而常規(guī)實驗室診斷陽性率較低，很難滿足臨床實際需求，因此找尋一種高效、便捷的診斷方式尤為重要，其中實時熒光定量 PCR診斷優(yōu)勢明顯，為后續(xù)治療提供有效依據(jù)。本次研究基于上述背景，探討了不同臨床標(biāo)本實時熒光定量 PCR診斷結(jié)核分枝桿菌的檢出率差異，現(xiàn)詳述如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2014年8月～2017年7月，隨機(jī)選擇我院收治的疑似結(jié)核病患者219例作為研究對象，年齡28～62歲，平均（45.64±2.37）歲，收集其呼吸道、體液標(biāo)本，其中支氣管灌洗液42例，支氣管刷物39例，尿液43例，痰液38例，胸腔積液35例，腹腔積液22例。本次研究經(jīng)由我院倫理委員會批準(zhǔn)，上述患者臨床資料齊全，且全部自愿參與。

1.2 檢測方法

樣本采集：支氣管灌洗液、支氣管刷物、腹腔積液、胸腔積液：嚴(yán)格遵守臨床操作規(guī)定，由同一醫(yī)師操作完成；尿液：給予患者無菌試管，要求其留取中段尿液；痰液：患者晨起需漱口，用力咳嗽，咳出氣管深處痰液，收集于無菌袋蓋標(biāo)本盒中。

樣本檢測：全部標(biāo)本行實時熒光定量PCR檢測，使用我院實時熒光定量PCR儀檢測，試劑由廣州東盛生物科技有限公司提供，DNA提取過程嚴(yán)格按照試劑說明操作，循環(huán)要求：93℃ 30s，55℃45s，設(shè)定30個循環(huán)；93℃ 2min，55℃60s，設(shè)定10個循環(huán)。

1.3 觀察指標(biāo)

陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：Ct值小于30則判斷為陽性，參考陽性結(jié)果計算各項指標(biāo)檢出率。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS24.0統(tǒng)計軟件對本次數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，計數(shù)資料以例數(shù)（率）表示，卡方檢驗。對比有統(tǒng)計學(xué)意義參照P<0.05。

2 結(jié)果

確診為肺結(jié)核患者67例，支氣管灌洗液檢出人數(shù)最多為23例，檢出率為54.76%，支氣管刷物檢出15例，檢出率為38.46%，尿液檢出12例，檢出率為27.91%，痰液檢出率8例，檢出率為21.05%，胸腔積液檢出6例，檢出率為17.14%，腹腔積液檢出人數(shù)最少為3人，檢出率為13.64%，各標(biāo)本之間檢出率對比差異存在統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05。

3 討論

現(xiàn)階段，我國結(jié)核病發(fā)病率較高，其屬呼吸道傳染疾病，由結(jié)核分枝桿菌引起，主要經(jīng)由血液或淋巴傳播，到達(dá)肺外臟器后致病，嚴(yán)重影響患者身體健康，且近年來我國肺結(jié)核發(fā)病人數(shù)不斷增加，對臨床診治工作提出了較高要求[2]。

通常情況下，結(jié)核病患者多開展實驗室結(jié)核分枝桿菌診斷，但傳統(tǒng)檢查方式敏感性較低，且特異性較差，無法滿足臨床診斷實際需求，臨床日漸重視 檢測方式的創(chuàng)新與發(fā)展，而實時熒光定量PCR診斷具有操作簡便、可重復(fù)操作、全封閉擴(kuò)增等優(yōu)勢，日漸被廣泛應(yīng)用于結(jié)核病患者診斷中，為后續(xù)治療提供了科學(xué)的依據(jù)[2]。本次研究選擇疑似肺結(jié)核患者作為研究對象，給予其實時熒光定量PCR診斷，對不同臨床標(biāo)本檢出率差異進(jìn)行了對比分析，結(jié)果顯示：確診為肺結(jié)核患者67例，其中支氣管灌洗液檢檢出率為54.76%（23/42），支氣管刷物檢出率為38.46%（15/39），尿液檢出率為27.91%（12/43），痰液檢出率為21.05%（8/38），胸腔積液檢出率為17.14%（6/35），腹腔積液檢出率為13.64%（3/22），各標(biāo)本之間檢出率對比差異存在統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05。具體原因分析如下：支氣管灌洗液、支氣管刷物檢出率較高，二者源于深部病灶，經(jīng)由支氣管鏡直接收集，其中細(xì)菌濃度較高，切實提高了診斷陽性率。而尿液、痰液、腹腔積液和胸腔積液均來源于脫落的病灶，會出現(xiàn)細(xì)菌濃度降低等問題，從而影響檢測的準(zhǔn)確性，因此針對肺結(jié)核患者，在實時熒光定量PCR診斷過程中，工作人員明確各項樣本的特異性和敏感性，制定綜合檢查方案，以此切實提高臨床診斷準(zhǔn)確性，為臨床治療提供科學(xué)依據(jù)。

綜上，在結(jié)核分枝桿菌診斷過程中，實時熒光定量 PCR診斷具有較高的應(yīng)用價值，且不同臨床標(biāo)本檢出率存在明顯差異，臨床診斷操作應(yīng)有所側(cè)重。

參考文獻(xiàn)：

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孫京濤，孫麗娜.實時熒光定量 PCR法分析結(jié)核分枝桿菌對異煙肼耐藥的分析[J].臨床肺科雜志，2016，21（9）：1650-1652.

孟鳳珍，郭銘，周立，等.TaqMan實時熒光定量PCR檢測動物組織中結(jié)核分枝桿菌的研究[J].中國病原生物學(xué)雜志，2016，29（9）：769-774.