梁明森

【摘 要】目的：探究在肺癌診斷中P63、TTF-1及CD56聯(lián)合相關(guān)免疫組化的價值觀察。方法：選取本院病理科2016年1月到2018年1月肺癌標(biāo)本124例，其中小細胞肺癌34例、腺癌47例、鱗狀細胞癌43例。對其病理標(biāo)本進行免疫組化染色，所選抗體為P63、CK5/6、CK18、CEA、TTF-1。結(jié)果：P63聯(lián)合CK5/6診斷鱗細胞癌靈敏度明顯優(yōu)于單種抗體，；CK18、CEA、TTF-1診斷腺癌方面的靈敏度（91.49%）優(yōu)于單用抗體的靈敏度（21.28%、55.32%、44.68%），但CK18對肺腺癌的靈敏度并不明顯（21.28%）。結(jié)論：在對肺癌診斷以及鑒別肺癌組織學(xué)分型中，P63、CK5/6、CK18、CEA、TTF-1具有重要臨床意義。

【關(guān)鍵詞】免疫組化；肺癌；非小細胞肺癌；小細胞肺癌

【中圖分類號】R734.2 【文獻標(biāo)識碼】A 【文章編號】2095-6851（2018）04-0-01

肺癌作為全球發(fā)病率和死亡率最高的腫瘤之一，具有治療預(yù)后效果差、侵襲性強等特點。肺癌的不同組織類型對治療存在非常重要的指導(dǎo)作用，其中非小細胞肺癌的臨床診斷需要準(zhǔn)確的病理分型，而病理診斷手法并不完全可靠，雖然70%肺癌診斷依靠小組織活檢或細胞進行評估和分級，但對于分化差的腫瘤分型較為困難，因此需要借助免疫組化指標(biāo)方法。近年來，國內(nèi)外相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)[1]，甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1（TTF-1）、P63在鑒別腺癌和鱗癌中應(yīng)用較好。臨床上對非小細胞肺癌和小細胞肺癌的治療方案和預(yù)后截然不同，因此對鑒別準(zhǔn)斷小細胞肺癌也十分重要，神經(jīng)細胞黏附分子（CD560）對鑒別小細胞和非小細胞肺癌是一個較好的免疫指標(biāo)。本研究現(xiàn)選取P63、TTF-1、CK5/6、CD56等相關(guān)免疫組化在肺癌診斷中的價值進行觀察分析，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院病理科2016年1月到2018年1月肺癌標(biāo)本124例，其中小細胞肺癌34例、腺癌47例、鱗狀細胞癌43例。所有患者均經(jīng)肺穿刺、纖維支氣管鏡或手術(shù)病理標(biāo)本診斷為肺癌?；颊吣挲g在18～65歲，均具有完整的臨床病歷資料。

1.2 方法

1.2.1 材料

準(zhǔn)備即用型鼠抗人P63、T TF-1、CK5/6、CK18、CEA、CD56單克隆抗體，生物素標(biāo)記的兔抗鼠IgG二抗、羊抗鼠二抗，辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈霉卵白素，鏈霉菌抗生素-過氧化物酶溶液，DAB顯色液以及B-P試劑盒。上述均購于福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，其他實驗室應(yīng)用機器均購于上海徠卡儀器有限公司。

1.2.2 方法

用10%中性福爾馬林固定所有組織標(biāo)本后脫水，再經(jīng)石蠟包埋后連續(xù)切5～6張片，保證每張切片厚度在5μm。準(zhǔn)備一張HE染色，核實組織病理學(xué)診斷，其余用免疫組織化學(xué)染色。免疫組化過程：將準(zhǔn)備好的標(biāo)本浸泡在新鮮配制的3%H2O2后，阻斷標(biāo)本中內(nèi)源性過氧化物酶10分鐘。用磷酸緩沖鹽溶液（phosphate buffer saline，PBS）漂洗標(biāo)本兩次，每次3分鐘。將山羊血清溫室封閉30分鐘后，進而消除非特異性染色，并滴加一抗，過夜。采用PBS緩沖液漂洗兩次，并滴加對應(yīng)的生物素化IgG二抗，放置在37℃環(huán)境下30分鐘。用PBS緩沖液漂洗后采用鏈霉素生物素化HRP復(fù)合物，放置在37℃環(huán)境下30分鐘。用PBS緩沖液漂洗后采用DAB顯色液室溫顯色，并在顯微鏡下控制顯色，小流水沖洗20分鐘后終止顯色。梯度乙醇脫水后晾干。

1.3 觀察指標(biāo) ①P63和TTF-1為細胞核呈棕黃色顆粒，當(dāng)細胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色為陽性信號；②CK5/6、CEA、CK18為細胞漿呈棕黃色顆粒，當(dāng)細胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色為陽性信號；③CD56為細胞膜呈棕黃色顆粒，當(dāng)細胞膜內(nèi)出現(xiàn)棕黃色為陽性信號。上述結(jié)果均需經(jīng)兩位以上的病理主治醫(yī)師進行判斷。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

本研究所有數(shù)據(jù)均采取SPSS19.0軟件計算，其中應(yīng)用“X?”、“t”對其檢驗，采用“%”為計數(shù)資料、“”為計量資料均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差。如P值<0.05，證明對比具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各個細胞癌標(biāo)本中在免疫組化中的陽性例數(shù)，詳見表1

2.2 各免疫指標(biāo)在診斷各項細胞癌方面的靈敏度顯示，P63聯(lián)合CK5/6診斷鱗細胞癌靈敏度明顯優(yōu)于單種抗體，；CK18、CEA、TTF-1診斷腺癌方面的靈敏度（91.49%）優(yōu)于單用抗體的靈敏度（21.28%、55.32%、44.68%），但CK18對肺腺癌的靈敏度并不明顯（21.28%），詳見表2、3、4。

3 討論

近年來，國內(nèi)外研究表明，多個抗體組合腳單種抗體在肺癌組織學(xué)分類診斷中的臨床應(yīng)用價值高。因此，如何尋找出一種最優(yōu)的抗體組合應(yīng)用在肺癌分型診斷中至關(guān)重要。

TTF-1作為一種甲狀腺特異性增強子結(jié)合蛋白在甲狀腺和肺發(fā)育過程中表達組織特異性轉(zhuǎn)錄因子。由于該抗體具有較強的組織特異性，因此可鑒別原發(fā)性及轉(zhuǎn)移性肺癌的標(biāo)志物，尤其是對轉(zhuǎn)移性腺癌是否為肺源性診斷較為明顯。本研究TTF-1在診斷肺腺癌方面靈敏度為44.68%，與相關(guān)文獻報道一致[2，3]。P63定位在人類染色體，廣泛在人和鼠組織中表達，其中對宮頸、泌尿道等具有鱗狀上皮分化潛在能力的基底細胞和旁基層細胞中具有選擇性的表達。研究表明，P63對肺鱗狀細胞癌發(fā)生發(fā)展過程中作用明顯。本研究中發(fā)現(xiàn)P63在診斷肺鱗狀細胞癌方面靈敏度為79.07%，與相關(guān)文獻報道一致[4]。CD56作為一種免疫球蛋白，是神經(jīng)細泡黏附分子的CD分子。定位在細胞膜，尤其是神經(jīng)內(nèi)分泌細胞。本研究CD56在診斷小細胞癌方面靈敏度為100%，且該抗體結(jié)合HE形態(tài)可有效鑒別小細胞癌與非小細胞癌。癌胚抗原（CEA）作為一種廣譜腫瘤標(biāo)志物，該抗體一直作為腸道系統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物。近年來，有研究表明，CEA對肺癌的分期和分型存在臨床意義。此外，也有研究表明細胞角蛋白18（CK18）在診斷肺腺癌以及細胞角蛋白5/6在診斷肺鱗癌中均具有一定意義[5，6]。本研究選擇抗體時將CEA、CK18聯(lián)合TTF-1診斷肺腺癌，將CK5/6聯(lián)合P63診斷肺鱗狀細胞癌。結(jié)果顯示，癌胚抗原（CEA）和細胞角蛋白18（CK18）在診斷肺腺癌方面存在一定意義（91.49%），但細胞角蛋白18對肺腺癌的靈敏度并不明顯（21.28%）。P63聯(lián)合CK5/6診斷鱗細胞癌靈敏度明顯優(yōu)于單種抗體，故在鑒別診斷肺鱗細胞癌時可選擇聯(lián)合應(yīng)用P63和CK5/6。CK18、CEA、TTF-1診斷腺癌方面的靈敏度（91.49%）優(yōu)于單用抗體的靈敏度（21.28%、55.32%、44.68%），故在鑒別診斷肺腺癌時可選擇聯(lián)合應(yīng)用CK18、CEA、TTF-1，但CK18對肺腺癌的靈敏度并不明顯（21.28%），因此在鑒別肺腺癌時可聯(lián)合用CEA和TTF-1。

綜上所述，在對肺癌診斷以及鑒別肺癌組織學(xué)分型中，P63、CK5/6、CK18、CEA、TTF-1具有重要臨床意義。

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