高海濤 穆俊晌 張璞 王欣 趙京 張勛

[摘要] 目的 就羅格利酮針對(duì)糖尿病大鼠內(nèi)耳組織血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）及細(xì)胞間粘附分子—1（ICAM-1）水平的影響情況加以分析。方法 該次研究共計(jì)納入糖尿病大鼠50只（按照相同方式進(jìn)行動(dòng)物模型建立），由該院在2016年2月—2017年6月自行培養(yǎng)，任意選取組內(nèi)25只大鼠，給予羅格列酮處理，即觀(guān)察組。余下25只大鼠則未采取其他藥物處理。采集兩組大鼠內(nèi)耳組織樣本，針對(duì)其VEGF以及ICAM-1水平比較。 結(jié)果 在未處理前，兩組大鼠在VEGF以及ICAM-1水平，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；而在使用羅格列酮處理后，觀(guān)察組大鼠VEGF水平為（4.52±1.02）μg/L，對(duì)照組為（7.43±1.32）μg/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=12.937，P=0.000）；在ICAM-1水平上，觀(guān)察組為（1.34±0.24）μg/L，對(duì)照組則為（2.56±0.31）μg/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=9.927，P=0.000）。 結(jié)論 羅格列酮可有效針對(duì)糖尿病大鼠體內(nèi)VEGF以及ICAM水平進(jìn)行控制，進(jìn)而達(dá)到對(duì)糖尿病所導(dǎo)致內(nèi)耳微血管病變治療的效果。

[關(guān)鍵詞] 羅格列酮；糖尿??；VEGF；ICAM-1

[中圖分類(lèi)號(hào)] R4 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2018）03（a）-0017-03

Observation of the Effect of Rosiglitazone on the Expression of VEGF and ICAM-1 in the Inner Ear of Diabetic Rats

GAO Hai-tao， MU Jun-shang， ZHANG Pu， WANG Xin， ZHAO Jing， ZHANG Xun

Third Hospital of Hebei Medical University， Shijiazhuang， Hebei Province， 050051 China

[Abstract] Objective The effects of rosiglitazone on the levels of vascular endothelial growth factor （VEGF） and intercellular adhesion molecule-1 （ICAM-1） in the inner ear tissues of diabetic rats were analyzed. Methods A total of 50 diabetic rats （according to the same animal model） were set up in this study from February 2016 to June 2017， and 25 rats were selected and treated with rosiglitazone as the observation group. The remaining 25 rats were not treated with other drugs. Samples of the inner ear tissue of two groups of rats were collected and compared to their VEGF and ICAM-1 levels. Results In the untreated group， two rats in the VEGF and ICAM-1 level had no significant differences（P>0.05）；and in the use of rosiglitazone treatment， the level of VEGF group rats （4.52±1.02）μg/L， the control group （7.43±1.32）μg/L，the difference was statistically significant（t=12.937，P=0.000）。In ICAM-1 on the level of the observation group was （1.34±0.24）μg/L， the control group was （2.56±0.31）μg/L，the difference was statistically significant（t=9.927，P=0.000）. Conclusion Rosiglitazone can effectively control the level of VEGF and ICAM in diabetic rats， so as to achieve the effect of diabetic microangiopathy.

[Key words] Rosiglitazone； Diabetes； VEGF； ICAM-1

糖尿病屬于我國(guó)主要慢性疾病，且在居民不良生活習(xí)慣以及飲食方式等方面因素的作用下，糖尿病的發(fā)生率更以極快的速度在增加。目前，臨床尚缺乏對(duì)于該癥的根治對(duì)策，需要長(zhǎng)時(shí)間借助藥物針對(duì)血糖水平加以控制[1-2]。其中內(nèi)耳血管病變最為常見(jiàn)，而該并發(fā)癥誘發(fā)機(jī)制臨床尚未形成統(tǒng)一定論。借助羅格列酮針對(duì)該癥進(jìn)行治療已逐步在臨床得到推廣[3-4]。該次研究以2016年2月—2017年6月自行培養(yǎng)50只大鼠，針對(duì)該藥在改善內(nèi)耳組織VEGF及ICAM-1表達(dá)水平方面的作用加以分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該次研究共計(jì)納入糖尿病大鼠50只，任意選取組內(nèi)25只大鼠，給予羅格列酮處理，即觀(guān)察組。余下25只大鼠則未采取其他藥物處理。采集兩組大鼠內(nèi)耳組織樣本，針對(duì)其VEGF以及ICAM-1水平加以比較。從兩組大鼠構(gòu)成情況來(lái)看，對(duì)照組月齡為2～4個(gè)月，中間值為（2.43±1.02）個(gè)月，體重在176～223 g，中間值為（192.83±1.98）g。觀(guān)察組月齡為2～3個(gè)月，中間值為（2.76±10.67）個(gè)月，體重在179～228 g，中間值為（191.67±1.98）g。以上基本數(shù)據(jù)對(duì)比可知一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 方法

動(dòng)物模型制備，在飼養(yǎng)過(guò)程中，需要借助高糖飼料進(jìn)行飼養(yǎng)，同時(shí)進(jìn)行鏈尿佐菌素滴注，使用劑量控制在60 mg/kg，促使本組大鼠成為糖尿病大鼠。進(jìn)行該次研究時(shí)，采集兩組大鼠血液進(jìn)行測(cè)定可知，兩組大鼠空腹血糖濃度均在16.6 mmol/l以上。隨后，對(duì)照組大鼠按照常規(guī)方式繼續(xù)進(jìn)行喂養(yǎng)。而觀(guān)察組則需要使用羅格列酮（國(guó)藥準(zhǔn)字H20061297），使用劑量為2 mg/kg，喂養(yǎng)3次/d。持續(xù)進(jìn)行14 d喂養(yǎng)后，對(duì)兩組大鼠雙側(cè)顳骨進(jìn)行獲取。隨后，在咬骨鉗的作用下，將顳骨多余骨質(zhì)進(jìn)行去除。并借助乙二胺四乙酸二鈉進(jìn)行脫鈣處理。大約10 d后，按照免疫組化常規(guī)流程針對(duì)內(nèi)耳組織樣本進(jìn)行制定。借由90%乙醇進(jìn)行約2 h浸泡，然后借助對(duì)應(yīng)模具順著耳蝸軸水平的位置進(jìn)行包埋。在顯微鏡的作用下進(jìn)行切片，厚度控制在6 mm左右，并用30%酒精展開(kāi)漂洗，將其放置在溫水中展開(kāi)，附著在涂抹有聚萘氨酸玻片上。待12 h后，將切片借助PBS進(jìn)行沖洗。待上述操作完成后，借助常規(guī)DAB顯色試劑盒對(duì)切片進(jìn)行染色，染色6 min左右，進(jìn)行沖洗。最后，借助蘇木素進(jìn)行復(fù)染，達(dá)到對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色的效果，依次進(jìn)行脫水、透明以及封片操作。隨后借助高倍顯微鏡，針對(duì)兩組切片中VEGF、ICAM-1水平進(jìn)行測(cè)定。該次切片觀(guān)察工作由該院具備多年臨床經(jīng)驗(yàn)醫(yī)師2名共同進(jìn)行，以保障該計(jì)數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1.3 觀(guān)察指標(biāo)

在該次研究中側(cè)重需要對(duì)兩組大鼠內(nèi)耳組織切片VEGF、ICAM-1水平展開(kāi)統(tǒng)計(jì)[5]。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

該次研究過(guò)程中，涉及兩組大鼠各方面數(shù)據(jù)都采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件展開(kāi)統(tǒng)計(jì)，以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）的形式對(duì)計(jì)量資料加以表示，行t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

結(jié)合檢測(cè)結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，在使用羅格列酮前，觀(guān)察組大鼠VEGF水平、ICAM-1水平上與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在使用羅格列酮后，觀(guān)察組大鼠VEGF水平為（4.52±1.02）μg/L，對(duì)照組為（7.43±1.32）μg/L；在ICAM-1水平上，觀(guān)察組為（1.34±0.24）μg/L，對(duì)照組則為（2.56±0.31）μg/L（P<0.05），見(jiàn)表1。

3 討論

在多中因素的共同作用下，糖尿病于國(guó)內(nèi)的發(fā)生率正以極快的速度在增加，現(xiàn)已發(fā)展成為威脅國(guó)內(nèi)中老年群體健康的主要病癥。臨床尚無(wú)針對(duì)該癥的特效治療對(duì)策，在病癥持續(xù)發(fā)展下，將誘發(fā)患者出現(xiàn)其他方面并發(fā)癥，其中以聽(tīng)力受損發(fā)生率居高[6-7]。

在臨床研究持續(xù)推進(jìn)的情況下，糖尿病慢性多臟器并發(fā)癥主要誘發(fā)因素已逐漸被探明，即神經(jīng)病變、微血管病變。在微血管病變的作用下，將直接對(duì)患者毛細(xì)血管基底厚度進(jìn)行影響，促使其出現(xiàn)異常增厚的情況[8]。早在黃輝[9]研究中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，毛細(xì)血管基底層厚同樣會(huì)出現(xiàn)在內(nèi)耳中。在基底膜異常增厚的情況下，自然會(huì)影響到內(nèi)耳血液供應(yīng)，出現(xiàn)血流不暢癥狀，促使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)無(wú)法充分運(yùn)輸?shù)絻?nèi)耳神經(jīng)組織中，導(dǎo)致患者內(nèi)耳細(xì)胞處于缺氧狀態(tài)，最終影響到內(nèi)耳功能，臨床表現(xiàn)為聽(tīng)力下降。

血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，在本質(zhì)上為二聚體糖蛋白，其功能主要表現(xiàn)在加快血管生成速度、針對(duì)血管通透能力進(jìn)行改善的層面。具體來(lái)講其生物功能側(cè)重體現(xiàn)在以下幾方面：①提升葡萄糖在內(nèi)皮細(xì)胞中的轉(zhuǎn)運(yùn)效率。在高水平VEGF水平的作用下，葡萄糖運(yùn)載體經(jīng)由細(xì)胞質(zhì)進(jìn)入到細(xì)胞膜中，促使細(xì)胞膜內(nèi)葡萄糖水平異常上升，進(jìn)而導(dǎo)致患者出現(xiàn)各種糖尿病并發(fā)癥。②使得白細(xì)胞異常激活，促使其異常釋放大量的活性物質(zhì)，導(dǎo)致患者出現(xiàn)局部出血的情況，并誘發(fā)新生血管的形成。③促使血管通透性異常增加，導(dǎo)致血漿蛋白出現(xiàn)外滲。在健康狀態(tài)下，ICAM-1處于水平較低狀態(tài)，而在炎性介質(zhì)等因素的作用下，將促使其異常表達(dá)，并促使其參與到血管內(nèi)皮細(xì)胞以及白細(xì)胞的滲出等過(guò)程中，促使炎癥進(jìn)一步發(fā)展。早在趙凱亮等[10]研究中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，ICAM-1以及VEGF水平與糖尿病內(nèi)耳微血管病變存在有一定聯(lián)系。

結(jié)合臨床治療可知，借助羅格列酮針對(duì)糖尿病內(nèi)耳微血管病變患者展開(kāi)治療已在臨床得到普及。在藥物本質(zhì)上，羅格列酮需歸屬到噻唑烷二酮的范圍中。在該藥的作用下，可直接對(duì)細(xì)胞內(nèi)部與糖代謝有關(guān)的蛋白質(zhì)表達(dá)情況進(jìn)行影響，進(jìn)而達(dá)到加速葡萄糖轉(zhuǎn)向細(xì)胞內(nèi)部的速度，進(jìn)而達(dá)到增加患者胰島素敏感性的作用，最終達(dá)到對(duì)患者體內(nèi)血糖水平控制的效果。在羅格列酮的作用下，可針對(duì)糖尿病患者ICAM-1表達(dá)情況進(jìn)行抑制的效果，更能達(dá)到對(duì)單核巨噬細(xì)胞誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的速度。當(dāng)前，針對(duì)羅格列酮降低糖尿病患者體內(nèi)ICAM-1水平的機(jī)制尚未有統(tǒng)一定論。

在該次研究中，該院就以50只糖尿病大鼠為主要對(duì)象，針對(duì)羅格列酮在糖尿病大鼠內(nèi)耳組織中ICAM-1以及VEGF水平表達(dá)中的影響情況展開(kāi)分析。在使用羅格列酮處理后，觀(guān)察組大鼠VEGF水平為（4.52±1.02）μg/L，對(duì)照組為（7.43±1.32）μg/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；在ICAM-1水平上，觀(guān)察組為（1.34±0.24）μg/L，對(duì)照組則為（2.56±0.31）μg/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)合統(tǒng)計(jì)可以發(fā)現(xiàn)，在羅格列酮的作用下，可有效減少糖尿病大鼠內(nèi)耳組織細(xì)胞中ICAM-1以及VEGF表達(dá)水平，能達(dá)到對(duì)內(nèi)耳細(xì)胞血液循環(huán)情況進(jìn)行有效改善。早在李素艷等[11]研究中同樣指出，在羅格列酮的作用下，可將糖尿病患者體內(nèi)VEGF水平降低10%左右，與該次研究基本相符?？蓪⒃撍庍\(yùn)用于對(duì)糖尿病內(nèi)耳微血管病變患者的治療過(guò)程中，針對(duì)其內(nèi)耳血液循環(huán)情況進(jìn)行有效改善，實(shí)現(xiàn)對(duì)患者聽(tīng)力的有效改善，間接起到促進(jìn)該部分患者快速恢復(fù)，提升其生活質(zhì)量的效果。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 李甜甜，呂霄，李偉.AM251對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變大鼠ICAM-1及VEGF表達(dá)的影響[J].中國(guó)老年學(xué)，2015，35（14）：3816-3818.

[2] 肖成，李燕，何本求，等.益氣活血化痰湯對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸組織VEGF和ICAM-1基因表達(dá)的影響[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2016（1）：75-79.

[3] 陳曉銘，鄭坤杰，吳美芬，等.羅格列酮對(duì)2型糖尿病大鼠胰腺PDX-1基因表達(dá)的影響[J].廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2015，33（2）：144-146.

[4] 李卉，張雨潔，姚藍(lán)，等.基于血清藥物化學(xué)技術(shù)的新疆金雞菊抗糖尿病物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)理研究——兩色金雞菊乙酸乙酯提取物對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜VEGF和ICAM1表達(dá)的影響[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，40（4）：411-414.

[5] 胡麗葉，宋光耀，朱旅云，等.2型糖尿病大鼠肝臟LOX-1、eNOS、PPARγ蛋白表達(dá)及羅格列酮的干預(yù)作用[J].臨床誤診誤治，2015，28（6）：109-113.

[6] 張瑤.祛風(fēng)舒筋丸對(duì)佐劑關(guān)節(jié)炎大鼠免疫調(diào)節(jié)及VEGF、ICAM-1表達(dá)的影響[J].安徽醫(yī)藥，2017，18（4）：653-655.

[7] 陳爭(zhēng)躍，余雄偉，聶振禹，等.羅格列酮對(duì)人腹膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞AQP1、VEGF-A及COX-2表達(dá)的影響[J].中國(guó)病理生理雜志，2015，31（1）：44-48.

[8] 李薈芹，李競(jìng)，秦瑩，等.NF-κB抑制劑對(duì)糖尿病大鼠腎組織ICAM-1和VEGF表達(dá)的影響[J].臨床腎臟病雜志，2009， 73（5）：226-228.

[9] 黃輝.羅格列酮對(duì)糖尿病牙周炎大鼠炎癥反應(yīng)的影響研究[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2014，17（6）：645-647.

[10] 趙凱亮，陳辰，余佳，等.羅格利酮對(duì)伴高脂血癥大鼠重癥急性胰腺炎肺損傷的作用研究[J].中華急診醫(yī)學(xué)雜志， 2016，25（11）：24.

[11] 李素艷，譚林，覃蒙斌，等.人結(jié)腸癌組織中NIBP、VEGF及ICAM-1的表達(dá)及其意義[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2015，31（14）：2315-2318.

（收稿日期：2017-12-02）