牛 倩，詹合琴，蔣 燕，趙正杭，劉會(huì)如，胡 雨

(新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院 1. 藥學(xué)院、2. 護(hù)理學(xué)院, 河南 新鄉(xiāng) 453003; 3. 西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)系，陜西 西安 710061 )

抑郁癥是一種嚴(yán)重危害人類身心健康的情感障礙性精神疾病, 致殘率和自殺率高。目前，全球抑郁癥的發(fā)病率約為3.1%，在發(fā)達(dá)國(guó)家接近6%[1]，嚴(yán)重威脅著人類的健康與生命。其發(fā)病機(jī)制不明，致使抗抑郁的藥物療效有限。如傳統(tǒng)的選擇性5-HT再攝取抑制劑，約有超40%的患者對(duì)治療無(wú)反應(yīng)，且經(jīng)常發(fā)生耐藥和癥狀的復(fù)發(fā)[2-3]。因此，繼續(xù)發(fā)現(xiàn)和探索抗抑郁的新藥及其作用機(jī)制十分重要。

近年來(lái)，中醫(yī)、中藥作為研究抑郁的發(fā)病機(jī)制與抗抑郁的藥用資源引發(fā)了人們的關(guān)注。一些研究發(fā)現(xiàn)[4-5]，小柴胡和醒脾解淤湯均可明顯緩解嚙齒類動(dòng)物的抑郁癥狀，改善精神狀態(tài)?；谕瑯拥囊暯?，我們自擬了健脾益氣方藥(self-made prescription of strengthening spleen and replenishing Qi, SMP-SSRQ)，預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其能明顯改善小鼠的抑郁樣行為，但其抗抑郁的作用及分子機(jī)制尚需更深的研究。我們前期研究還發(fā)現(xiàn)，抑郁模型小鼠脾臟組織中的免疫球蛋白超家族11(immunoglobulin superfamily member11，Igsf11)基因表達(dá)上調(diào)，蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶2(protein disulfide isomerase associated 2，Pdia2)和生育酚結(jié)合蛋白(SEC14-like 2，Sec14l2)基因表達(dá)下調(diào)[6]，而此3個(gè)基因均可通過(guò)激活核因子-κB(nuclear factor kappa B，NF-κB)信號(hào)通路，促進(jìn)炎癥反應(yīng)[7-8]。神經(jīng)炎癥是抑郁癥的重要病理基礎(chǔ)，NF-κB在氧化應(yīng)激性神經(jīng)損傷和抑郁癥中起著關(guān)鍵性的調(diào)節(jié)作用[9]。據(jù)此可推測(cè)，Igsf11、Pdia2、Sec14l2/NF-κB信號(hào)通路可能參與了抑郁癥的發(fā)生、發(fā)展，且SMP-SSRQ可能通過(guò)調(diào)節(jié)該信號(hào)通路發(fā)揮抗抑郁作用。因此，本研究旨在進(jìn)一步探索SMP-SSRQ的抗抑郁作用及其對(duì)抑郁小鼠大腦皮層前額葉、海馬組織中Igsf11、Pdia2、Sec14l2 mRNA及其蛋白表達(dá)的影響。

1 材料與方法

1.1試劑與儀器蔗糖，購(gòu)自天津市德恩化學(xué)試劑有限公司；RNA Keeper Tissue Stabilizer，購(gòu)自Vazyme公司；RIPA裂解液、PMSF、BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒、HRP標(biāo)記山羊抗小鼠IgG(H+L)，均購(gòu)自碧云天生物技術(shù)研究所；SDS-PAGE凝膠制備試劑盒、HiFiScript快速去基因組cDNA第一鏈合成試劑盒、抗β-actin單克隆抗體，購(gòu)自康為世紀(jì)生物科技有限公司；Igsf11抗體購(gòu)自EterLife公司；抗Pdia2和抗Sec14l2抗體，購(gòu)自Abcam公司；SYBR? Premix Ex TaqTMⅡ購(gòu)自TaKaRa公司。502B型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海申生科技有限公司；SHZ-DIII循環(huán)水式真空泵，河南鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；Forma 900 -80℃超低溫冰箱、TDZ5-WS高速冷凍離心機(jī)，美國(guó)Thermo Fisher公司；SpectraMax M5多功能酶標(biāo)儀，Molecular Devices公司 ；ABI Veriti96孔梯度PCR儀，美國(guó)ABI公司；GeLDos-It2 Imagers凝膠成像系統(tǒng)，美國(guó)UVP公司； DYY-7C型水平電泳儀，北京市六一儀器廠；PowerPacTM電泳儀、轉(zhuǎn)膜儀美國(guó)Bio-Rad公司。

1.2實(shí)驗(yàn)藥物的制備SMP-SSRQ方藥主要由白術(shù)30 g、大棗20 g、菟絲子10 g、陳皮10 g、熟地黃5 g、金銀花5 g等6味中藥組成(處方中藥物均購(gòu)于新鄉(xiāng)市胖東來(lái)醫(yī)藥超市)。將該組方和體積分?jǐn)?shù)為0.80的無(wú)水乙醇按g ∶mL=1 ∶10比例在浸藥桶內(nèi)充分混勻，封口，冷浸10 d，期間每天早晚各充分搖晃1次，收集浸出液，將濾渣再用80%無(wú)水乙醇冷浸7 d，收集浸出液。所有浸出液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行減壓濃縮，得浸膏，每1 g浸膏含生藥量0.4 g，4℃冰箱保存?zhèn)溆?。小鼠給藥劑量(g·kg-1)=0.018(系數(shù)) ×5×成人劑量(g·kg-1)(公式參考《中藥藥理方法學(xué)》), 一般人中藥常用內(nèi)服劑量為5～10 g, 按公式計(jì)算出浸膏的給藥范圍為0.45～0.9 g，所含生藥量為0.18～0.36 g。先用小鼠探索該藥物的中毒劑量或致死劑量，取小于中毒量的劑量為最高劑量組，然后依次設(shè)置幾個(gè)劑量組進(jìn)行抗抑郁藥效的預(yù)實(shí)驗(yàn)，最后根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定動(dòng)物的給藥劑量。

1.3建立慢性不可預(yù)知性溫和應(yīng)激抑郁小鼠模型參照文獻(xiàn)方法[10]，制備慢性不可預(yù)知性溫和應(yīng)激(chronic unpredictable mild stress, CUMS)抑郁模型，應(yīng)激刺激包括：禁食24 h，禁水24 h，束縛2 h，夾尾倒掛30 min，潮濕墊料24 h，45℃傾斜鼠籠24 h，冰水游泳6 min，明暗顛倒，空籠飼養(yǎng)12 h。正常組不給予任何刺激，正常飼養(yǎng)。其余各組進(jìn)行21 d CUMS刺激，每天隨機(jī)選取1套不同順序的刺激方法進(jìn)行刺激，相同順序刺激的方法不能連續(xù)使用，同1套順序刺激的方法不能超過(guò)3次使用，使小鼠不能預(yù)知次日刺激，以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1.4實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥BALB/c清潔級(jí)健康小鼠60只，♀♂各半，體質(zhì)量(20±2)g，7～8周齡，購(gòu)自華蘭生物疫苗有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：No.41001700001781。小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，飼養(yǎng)條件：室溫(25±2)℃，相對(duì)濕度(45±10)%，飼養(yǎng)室光照12 h、黑暗12 h交替，自由攝食、飲水。所有實(shí)驗(yàn)步驟和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的照料均遵照2006年中華人民共和國(guó)科學(xué)技術(shù)部頒布的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見(jiàn)》標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)過(guò)新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。小鼠自由飼養(yǎng)1周后，所有小鼠進(jìn)行曠場(chǎng)、糖水偏好、強(qiáng)迫游泳及懸尾等實(shí)驗(yàn)，將水平移動(dòng)格數(shù)在70～100，同時(shí)這些動(dòng)物糖水偏好指數(shù)在0.4～0.6，強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間在70～90 s，懸尾不動(dòng)時(shí)間在30～50 s范圍外的動(dòng)物剔除，以保證組間的差異最小。根據(jù)行為學(xué)觀察的結(jié)果及隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，將小鼠隨機(jī)分成5組：正常組(Control)、模型組(Model)、SMP-SSRQ低、中、高劑量組(8、16、32 mg·kg-1)，每組12只(♀♂各6只，分開(kāi)飼養(yǎng))。模型構(gòu)建結(jié)束后，進(jìn)行各項(xiàng)行為學(xué)測(cè)試，判斷模型構(gòu)建是否成功。正常對(duì)照組和模型組均給予生理鹽水，SMP-SSRQ各劑量組小鼠給予相應(yīng)劑量的SMP-SSRQ，按每10 g體質(zhì)量給藥0.2 mL的體積進(jìn)行給藥，每天早晚各1次，連續(xù)灌胃14 d。

1.5行為學(xué)檢測(cè)

1.5.1曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn) 本實(shí)驗(yàn)的敞箱裝置為四周及底面全部為黑色的無(wú)蓋方箱，方箱規(guī)格為80 cm×80 cm×45 cm，底面用白線劃分成20 cm×20 cm的16個(gè)方格。本實(shí)驗(yàn)需在安靜環(huán)境下進(jìn)行，首先將小鼠置于暗箱中心方格內(nèi)，適應(yīng)2 min后，觀察小鼠5 min內(nèi)的活動(dòng)情況。觀察指標(biāo)，① 水平運(yùn)動(dòng)：以小鼠穿越底面格數(shù)(至少3爪進(jìn)入方格)為水平運(yùn)動(dòng)得分，每穿越1格得1分，依次累計(jì)；②垂直運(yùn)動(dòng)：以小鼠前兩肢直立次數(shù)為垂直運(yùn)動(dòng)得分，每直立1次得1分，依次累計(jì)。每次測(cè)定后須用低濃度乙醇將箱底擦拭干凈，避免殘留氣味干擾下一只小鼠的測(cè)定。記錄造模成功后和給藥14 d后各組小鼠的曠場(chǎng)得分情況。

1.5.2糖水偏好實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)前，先訓(xùn)練小鼠適應(yīng)含糖飲水，需3 d時(shí)間。第1個(gè)24 h，放兩瓶均裝有1%(W/V)的蔗糖水；隨后24 h，1瓶裝有1%的蔗糖水，1瓶純水；在最后24 h，先將裝有蔗糖水的瓶子和裝有純水的位置進(jìn)行調(diào)換12 h，以防止動(dòng)物對(duì)飲水位置的偏好而干擾實(shí)驗(yàn)；接著，再禁食禁水12 h后，進(jìn)行動(dòng)物糖水偏好實(shí)驗(yàn)。 同時(shí)給予每籠小鼠事先定量好的2瓶水：1瓶1%蔗糖水100 mL，1瓶純水100 mL，12 h后，取走2個(gè)飲水瓶進(jìn)行稱量，記錄小鼠糖水消耗體積、純水消耗體積，并計(jì)算小鼠糖水偏好指數(shù)。動(dòng)物糖水偏好指數(shù)公式，糖水偏好指數(shù)/%=糖水消耗量/(糖水消耗量+純水消耗量)×100%。給藥14 d后進(jìn)行1次糖水偏好實(shí)驗(yàn)，計(jì)算小鼠糖水偏好指數(shù)。

1.5.3強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn) 準(zhǔn)備好高20 cm，直徑14 cm的圓柱形玻璃缸數(shù)個(gè)，每缸加入(25±1)℃的水，使水深度保持在10 cm。實(shí)驗(yàn)時(shí)，每次每杯1只動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)前24 h，先對(duì)每只小鼠進(jìn)行游泳訓(xùn)練10 min，隨后用電吹風(fēng)吹干毛發(fā)后放回籠中，24 h后再進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)時(shí)將小鼠放于缸中游泳6 min， 然后記錄后5 min內(nèi)小鼠的累積不動(dòng)時(shí)間。不動(dòng)時(shí)間是指小鼠漂浮在水上，沒(méi)有掙扎或僅有細(xì)小的肢體運(yùn)動(dòng)，使頭部浮在水面。

1.5.4懸尾實(shí)驗(yàn) 將小鼠尾部后1/3處用膠帶固定，懸掛于自行架構(gòu)的鋼制橫桿上，使小鼠頭部距離臺(tái)面15 cm，在黑色背景下進(jìn)行觀察攝像6 min。然后，計(jì)數(shù)后5 min內(nèi)小鼠的不動(dòng)時(shí)間。

1.6取材和組織樣本的處理測(cè)定完行為學(xué)指標(biāo)后，脊椎脫臼法處死小鼠，冰上快速取腦，然后小心去除腦膜。頭前部最外層組織即為前額皮層組織，皮質(zhì)下面的八字形白色組織即為海馬組織，將6只小鼠的大腦皮層前額葉、海馬分別迅速放入1.5 mL離心管中，-80℃冰箱保存，用于Western blot檢測(cè)。另外6只小鼠的大腦皮層前額葉和海馬分別放入無(wú)RNA酶、DNA酶、無(wú)熱源的1.5 mL離心管中，分別立即加入1mL RNA Keeper Tissue Stabilizer，放入4℃冰箱，待組織塊沉降至液面下后，轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存，用于qPCR檢測(cè)。

1.7實(shí)時(shí)熒光定量PCR將所需組織從-80℃冰箱中取出，在冰上磨碎。用TRIzol試劑提取各組樣本中的總RNA，并進(jìn)行RNA純度分析。用HiFiScript快速去基因組cDNA第一鏈合成試劑盒反轉(zhuǎn)錄成cDNA。取各樣本中2 μL的cDNA，用SYBR? Premix Ex TaqTMⅡ試劑盒進(jìn)行qRT-PCR檢測(cè)。引物序列見(jiàn)Tab 1。PCR條件為：95 ℃ 30 s，1個(gè)循環(huán); 95℃ 5 s, 55℃ 30 s, 72℃ 30 s, 45個(gè)循環(huán)。以β-actin作內(nèi)參對(duì)照，假設(shè)目的基因和參照基因擴(kuò)增效率都接近100%，且相對(duì)偏差不超過(guò)5%，用2-ΔΔCt方法計(jì)算相對(duì)表達(dá)量，進(jìn)行定量分析。

Tab 1 Primer sequences for qPCR

1.8Westernblot用蛋白提取試劑盒分別提取各組小鼠大腦前額皮層和海馬組織的總蛋白，BCA法測(cè)定蛋白濃度。50μg的蛋白用SDS-PAGE進(jìn)行電泳分離，并轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。用5%的脫脂牛奶室溫下于脫色搖床上封閉2 h。然后加一抗Igsf11(1 ∶500)、Sec14l2(1 ∶2 000)、Pdia2(1 ∶1 000)、β-actin(1 ∶2 000)，4℃孵育過(guò)夜。1×PBST緩沖液于脫色搖床上洗滌3次后，加羊抗兔二抗，室溫孵育2 h。實(shí)驗(yàn)條帶用凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行攝像，每一條帶的灰度值用Image J圖像分析軟件進(jìn)行測(cè)定。目的蛋白條帶的灰度值除以相應(yīng)的β-actin的信號(hào)灰度水平進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理。

2 結(jié)果

2.1SMP-SSRQ改善抑郁模型小鼠的行為學(xué)指標(biāo)CUMS刺激21 d后，模型組小鼠的水平移動(dòng)格數(shù)、直立次數(shù)和糖水偏好指數(shù)均下降，而強(qiáng)迫游泳與懸尾不動(dòng)時(shí)間均增加，與正常對(duì)照組比較差異有顯著性(P<0.05，P<0.01)。用SMP-SSRQ灌胃治療2周后，SMP-SSRQ各劑量組小鼠的水平移動(dòng)格數(shù)、直立次數(shù)及糖水偏好指數(shù)均增加, 強(qiáng)迫游泳和懸尾不動(dòng)時(shí)間明顯減少，與模型組比較差異均有顯著性(P<0.05,P<0.01)。見(jiàn)Tab 2、3。

Tab 2 Effect of SMP-SSRQ on horizontal mobile score, upright number and sugar water preference

*P<0.05,**P<0.01vscontrol;#P<0.05,##P<0.01vsmodel

Tab 3 Effect of SMP-SSRQ on duration of immobility in FSTand TST of depressive n=12)

*P<0.05,**P<0.01vscontrol;#P<0.05,##P<0.01vsmodel

2.2SMP-SSRQ減少抑郁小鼠大腦皮層前額葉Igsf11、Pdia2、Sec14l2mRNA的表達(dá)由于實(shí)驗(yàn)藥物低、高劑量組在藥理學(xué)作用上差異較大，故本實(shí)驗(yàn)部分選取正常對(duì)照組、模型組、SSRQ-L組和SSRQ-H組進(jìn)行研究。Tab 4結(jié)果顯示，模型組小鼠大腦皮層前額葉組織內(nèi)的Igsf11、Pdia2、Sec14l2 mRNA表達(dá)量明顯升高，與對(duì)正常對(duì)照組比較差異有顯著性(P<0.05，P<0.01)；經(jīng)藥物治療14 d后，SMP-SSRQ各劑量組均劑量依賴性地減少了小鼠大腦皮層組織中Igsf11、Pdia2、Sec14l2 mRNA的表達(dá)量，與模型組比較差異均有顯著性(P<0.05，P<0.01)。

Tab 4 Effect of SMP-SSRQ on Igsf11, Pdia2 andSec14l2 mRNA expression in frontal cortex of n=6)

*P<0.05,**P<0.01vscontrol;#P<0.05,##P<0.01vsmodel

2.3SMP-SSRQ降低抑郁小鼠海馬組織內(nèi)Igsf11、Pdia2、Sec14l2mRNA的表達(dá)Tab 5結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，模型組小鼠海馬內(nèi)Igsf11、Pdia2、Sec14l2 mRNA表達(dá)量均明顯增加(P<0.05，P<0.01)；給藥治療后， SMP-SSRQ各劑量組小鼠海馬組織內(nèi)的Igsf11、Pdia2、Sec14l2 mRNA表達(dá)量呈劑量依賴性降低，與模型組比較差異有顯著性(P<0.05，P<0.01)。

Tab 5 Effect of SMP-SSRQ on Igsf11, Pdia2 and Sec14l2 mRNAexpression in hippocampus of n=6)

*P<0.05,**P<0.01vscontrol;#P<0.05,##P<0.01vsmodel

2.4SMP-SSRQ下調(diào)抑郁小鼠大腦皮層前額葉Igsf11、Pdia2、Sec14l2蛋白的表達(dá)CUMS刺激后，模型組小鼠大腦皮層前額葉Igsf11、Pdia2、Sec14l2 蛋白表達(dá)量均升高，與對(duì)照組比較差異有顯著性(P<0.01)；用藥后，SMP-SSRQ各劑量組小鼠呈劑量依賴性地降低其皮層前額葉組織中Igsf11、Pdia2、Sec14l2 蛋白的表達(dá)，與模型組比較差異均有顯著性(P<0.05，P<0.01)。見(jiàn)Fig 1。

Fig 1 Effect of SMP-SSRQ on Igsf11, Pdia2 and Sec14l2 proteinexpression in frontal cortex of n=6)

1: Control; 2: Model; 3: SSRQ-L; 4: SSRQ-H.*P<0.05,**P<0.01vscontrol;#P<0.05,##P<0.01vsmodel.

2.5SMP-SSRQ減少抑郁小鼠海馬組織內(nèi)Igsf11、Pdia2、Sec14l2蛋白的表達(dá)經(jīng)過(guò)21 d CUMS刺激后，模型組小鼠海馬組織內(nèi)Igsf11、Pdia2、Sec14l2 蛋白表達(dá)量均升高，與對(duì)照組比較差異有顯著性(P<0.05，P<0.0,1)；用藥后， SMP-SSRQ各劑量組均可劑量依賴性地降低Igsf11、Pdia2、Sec14l2蛋白的表達(dá)，與模型組比較差異有顯著性(P<0.05，P<0.01)。見(jiàn)Fig 2。

Fig 2 Effect of SMP-SSRQ on Igsf11, Pdia2 and Sec14l2 proteinexpression in hippocampus of n=6)

1: Control; 2: Model; 3: SSRQ-L; 4: SSRQ-H.*P<0.05,**P<0.01vscontrol;#P<0.05,##P<0.01vsmodel.

3 討論

本研究主要有以下幾個(gè)發(fā)現(xiàn)[10]：① SMP-SSRQ可明顯改善小鼠的抑郁癥狀，具有良好的抗抑郁作用；② SMP-SSRQ低、高劑量組可降低抑郁小鼠大腦皮層前額葉組織中Igsf11、Pdia2、Sec14l2 mRNA及其蛋白的表達(dá)；③ SMP-SSRQ低、高劑量組能減少海馬組織中Igsf11、Pdia2、Sec14l2 mRNA及其蛋白的表達(dá)。

CUMS模型是目前比較公認(rèn)的一種抑郁模型，該模型很好的模擬了人類抑郁癥心境低落、快感缺失等癥狀，是被廣泛用于探索抑郁癥的病理機(jī)制和篩選抗抑郁藥的有效、可靠的模型。我們的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，小鼠經(jīng)過(guò)21 d的CUMS后，抑郁小鼠的水平移動(dòng)格數(shù)和直立次數(shù)減少，糖水偏好指數(shù)下降，強(qiáng)迫游泳和懸尾不動(dòng)時(shí)間增加，這些行為學(xué)指標(biāo)說(shuō)明小鼠已出現(xiàn)抑郁行為，提示抑郁小鼠模型構(gòu)建成功。用SMP-SSRQ治療抑郁小鼠2周后，抑郁動(dòng)物的水平移動(dòng)格數(shù)、直立次數(shù)和糖水偏好指數(shù)明顯增加，強(qiáng)迫游泳及懸尾不動(dòng)時(shí)間有效減少，此結(jié)果同其它研究抗抑郁藥物作用的文獻(xiàn)報(bào)道一致[11]，提示SMP-SSRQ有良好的抗抑郁活性。

抑郁癥的發(fā)病原因和發(fā)生機(jī)制至今尚不清楚，目前多數(shù)學(xué)者認(rèn)為抑郁癥的發(fā)生與腦內(nèi)神經(jīng)功能失衡、免疫反應(yīng)異常、神經(jīng)生長(zhǎng)因子失調(diào)等密切相關(guān)。大量研究發(fā)現(xiàn)，抑郁患者和抑郁小鼠皮層、海馬神經(jīng)元均有不同程度的損傷，從而導(dǎo)致患者認(rèn)知、記憶、學(xué)習(xí)等功能發(fā)生障礙[12-13]。因此，我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中分別選擇大腦皮層前額葉和海馬組織，研究SMP-SSRQ對(duì)Igsf11、Pdia2、Sec14l2 mRNA及其蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用SMP-SSRQ治療抑郁小鼠2周后，使大腦皮層前額葉與海馬組織中的Igsf11、Pdia2、Sec14l2 mRNA的表達(dá)水平明顯減少，其蛋白的表達(dá)在以上兩部位的趨勢(shì)與基因完全一致。本次結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，用CUMS應(yīng)激所致的抑郁模型小鼠的皮層前額葉、海馬組織中Igsf11 mRNA及其蛋白表達(dá)量均升高，此與我們課題組前期研究中發(fā)現(xiàn)皮質(zhì)酮應(yīng)激所致的抑郁小鼠脾臟組織中的Igsf11表達(dá)上調(diào)的結(jié)果一致，這些結(jié)果提示抑郁癥的發(fā)生發(fā)展可能與Igsf11激活大量的炎癥因子有關(guān)。用SMP-SSRQ干預(yù)治療后發(fā)現(xiàn)，Igsf11 mRNA及其蛋白在以上兩部位組織中表達(dá)均下調(diào)，小鼠的抑郁行為得到了明顯的改善。然而，在本次實(shí)驗(yàn)中，抑郁小鼠大腦皮質(zhì)前額葉和海馬組織中Pdia2、Sec14l2 mRNA及其蛋白表達(dá)水平的增高，與以往本課題組研究抑郁小鼠脾臟組織中兩基因表達(dá)下調(diào)的結(jié)果不一致，這可能與兩次實(shí)驗(yàn)所采用的模型不同，以及所選取的實(shí)驗(yàn)部位不同有關(guān)。

從前述可知，Igsf11、Pdia2、Sec14l2均可通過(guò)NF-κB途徑產(chǎn)生炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激，而炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激均與抑郁癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[14]。雖說(shuō)炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激與抑郁癥的因果關(guān)系目前難以確定，但抑郁癥往往伴發(fā)有炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激狀態(tài)。我們的研究發(fā)現(xiàn)，SMP-SSRQ能夠通過(guò)減少抑郁小鼠大腦皮質(zhì)前額葉和海馬組織中Igsf11、Pdia2、Sec14l2基因與蛋白的表達(dá)，改善小鼠的抑郁癥狀，這至少說(shuō)明以上3個(gè)基因和蛋白的表達(dá)增高可能是抑郁癥的不利因素，用SMP-SSRQ治療可通過(guò)降低它們的表達(dá)而緩解抑郁。當(dāng)前，除了我們以往的研究發(fā)現(xiàn)Igsf11、Pdia2、Sec14l2基因在抑郁癥時(shí)發(fā)生了改變外，并沒(méi)有其他文獻(xiàn)支持Igsf11、Pdia2與抑郁癥的發(fā)生發(fā)展存在直接的因果關(guān)系，但兩者均與NF-κB通路存在關(guān)聯(lián)，而NF-κB的激活與抑郁癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。引人注意的是，最近研究發(fā)現(xiàn)，Sec14l2在炎癥中可誘導(dǎo)HMGB1的釋放，通過(guò)NF-κB途徑激活神經(jīng)炎癥反應(yīng)，誘導(dǎo)抑郁樣行為[15]。我們的研究結(jié)果顯示，Sec14l2在抑郁模型小鼠大腦皮質(zhì)前額葉和海馬組織中的表達(dá)增高，與該研究結(jié)果相一致。這說(shuō)明我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能從一個(gè)側(cè)面揭示了Igsf11、Pdia2、Sec14l2與抑郁癥的關(guān)系。

SMP-SSRQ方藥中的制大棗和白術(shù)健脾益氣，寧心安神為君藥；菟絲子滋補(bǔ)肝腎、溫煦腎陽(yáng)為臣藥；熟地黃滋陰補(bǔ)血，益精填髓為佐藥；陳皮理氣、除痰濕，金銀花清熱解毒、增固免疫為使藥。諸藥合用能夠補(bǔ)脾虛、化生氣血、氣順肝疏，達(dá)到消除抑郁和恢復(fù)情志的目的?？傊狙芯枯^為充分地證實(shí)，SMP-SSRQ具有良好的抗抑郁作用，其作用機(jī)制可能與其下調(diào)抑郁模型小鼠大腦皮質(zhì)前額葉和海馬組織中Igsf11、Pdia2、Sec14l2 mRNA及其蛋白的表達(dá)，進(jìn)而抑制NF-κB的信號(hào)通路有關(guān)。但它們與NF-κB之間的調(diào)控關(guān)系，及SMP-SSRQ對(duì)其關(guān)系產(chǎn)生的影響，SMP-SSRQ后期的安全性評(píng)價(jià)則是下一步工作需要繼續(xù)研究的。

(致謝：本文實(shí)驗(yàn)主要于新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院神經(jīng)精神分子藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)室完成，在整個(gè)研究過(guò)程中得到了黃鋒博士、牛慧芳博士的細(xì)心指導(dǎo)和耐心幫助，在此深表感謝！)

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