索相敏，馬 斌，郝 婕，劉鐵錚，馮建忠，鄢新民，王獻(xiàn)革，李學(xué)營(yíng)*

(1.河北省農(nóng)林科學(xué)院 石家莊果樹(shù)研究所，河北 石家莊 050061； 2.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 植物保護(hù)學(xué)院，河北 保定 071000)

中國(guó)是世界上最大的蘋(píng)果生產(chǎn)國(guó)，蘋(píng)果的種植面積和產(chǎn)量均居世界第一[1]。近幾年我國(guó)蘋(píng)果種植面積不斷擴(kuò)大的同時(shí)，蘋(píng)果樹(shù)病害也愈加嚴(yán)重，其中蘋(píng)果腐爛病、蘋(píng)果輪紋病和蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病尤為嚴(yán)重。蘋(píng)果腐爛病俗稱(chēng)串皮濕、爛皮病或臭皮病，是我國(guó)北方果區(qū)危害嚴(yán)重的蘋(píng)果病害，其危害蘋(píng)果樹(shù)的枝干，枝干上病疤累累，枝干殘缺不全，甚至全株枯死[2-3]。蘋(píng)果輪紋病主要危害枝干和果實(shí)，對(duì)葉片危害較少，枝干受害，在皮孔上形成圓形或扁圓形的瘤狀物，邊緣龜裂與健康組織形成一道環(huán)溝，嚴(yán)重時(shí)生病組織翹起如馬鞍狀，許多病斑連在一起，使表皮粗糙；果實(shí)感染輪紋病很快形成同心輪紋狀，整個(gè)果實(shí)軟腐。隨著易感輪紋病蘋(píng)果品種富士在我國(guó)的大面積推廣，蘋(píng)果輪紋病在黃河故道、華北地區(qū)及四川、湖北等省份發(fā)生普遍，已成為我國(guó)當(dāng)前蘋(píng)果生產(chǎn)上較為嚴(yán)重的病害之一，使蘋(píng)果產(chǎn)業(yè)遭受了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[4]。蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病是我國(guó)蘋(píng)果產(chǎn)區(qū)的主要病害之一，該病主要危害新生葉片，尤其是展葉20 d內(nèi)的幼嫩葉片，還可危害葉柄、1 a生枝條和果實(shí)[5]。發(fā)病嚴(yán)重時(shí)，果園病葉率達(dá)90%以上，不僅造成果樹(shù)大量落葉，而且影響果實(shí)的正常膨大和著色，在發(fā)病后期，可以侵染果實(shí)，致使品質(zhì)變劣，嚴(yán)重影響產(chǎn)量與經(jīng)濟(jì)效益。

化學(xué)農(nóng)藥是保障我國(guó)糧食生產(chǎn)的重要農(nóng)業(yè)物資，然而，農(nóng)藥也是一把雙刃劍，在保障人類(lèi)獲得豐厚農(nóng)產(chǎn)品的同時(shí)，也給環(huán)境和生態(tài)帶來(lái)了嚴(yán)重的污染與危害[6-7]?；诖耍陙?lái)國(guó)家提出了化肥、農(nóng)藥減施的“雙減”目標(biāo)，開(kāi)發(fā)新型農(nóng)藥迫在眉睫[8]。近年來(lái)，昆蟲(chóng)病原真菌開(kāi)發(fā)利用的研究越來(lái)越受到重視，并已有大量成功應(yīng)用的典例，如白僵菌屬、綠僵菌屬、擬青霉屬、被毛孢屬、棒孢菌屬、穗霉屬、側(cè)孢霉屬、輪枝菌屬等[9-14]。其中，白僵菌昆蟲(chóng)病原真菌在代謝類(lèi)型上十分復(fù)雜，能產(chǎn)生多種生理功能特異的生物活性物質(zhì)。這種代謝產(chǎn)物的多樣性，為人類(lèi)開(kāi)發(fā)新型生物制劑及在其他領(lǐng)域的利用提供了重要的途徑。為此，研究了球孢白僵菌(Beauveriabassiana)BD-B180以及其孢子懸浮液、發(fā)酵液對(duì)蘋(píng)果腐爛病菌、蘋(píng)果輪紋病菌和蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病菌的抑制作用，以期更好地防治蘋(píng)果主要病害，為開(kāi)發(fā)新型生物農(nóng)藥、減少化學(xué)農(nóng)藥對(duì)環(huán)境的污染提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 供試材料

1.1.1 供試菌株 球孢白僵菌菌株BD-B180，由河北農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院生物防治實(shí)驗(yàn)室提供；蘋(píng)果樹(shù)皮腐爛病病原菌(ValsamaliMiyabe et Yamada)、蘋(píng)果輪紋病病原菌(PhysalosporapiricolaNose)、蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病病原菌(AlternariamaliRoberts)由河北農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院植物病理教研室提供。

1.1.2 供試培養(yǎng)基 PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、蒸餾水1 000 mL。PD液體培養(yǎng)基：配方同 PDA 培養(yǎng)基，不加瓊脂。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 球孢白僵菌BD-B180與蘋(píng)果病原菌的平板對(duì)峙培養(yǎng) 將保存的球孢白僵菌BD-B180菌株和供試蘋(píng)果病原菌菌株分別轉(zhuǎn)接到PDA平板上，倒置于恒溫光照培養(yǎng)箱中，在25 ℃黑暗條件下恒溫培養(yǎng)3～5 d后，用打孔器(7 mm)沿其菌落邊緣打菌碟。采用平板對(duì)峙培養(yǎng)法，將蘋(píng)果病原菌菌碟分別接種于PDA平板中央，在蘋(píng)果病原菌菌碟周?chē)染嚯x接4塊球孢白僵菌菌碟，兩者相距3.5 cm。同時(shí)以單獨(dú)接種蘋(píng)果病原菌的平板為對(duì)照(CK)，每個(gè)處理重復(fù)3次。將以上培養(yǎng)皿倒置于恒溫光照培養(yǎng)箱中，于25 ℃黑暗條件下恒溫培養(yǎng)，每24 h觀察各菌株的生長(zhǎng)狀況，并在兩菌株接種點(diǎn)連線(xiàn)上測(cè)量病原菌接種點(diǎn)到菌落前緣的距離，每個(gè)處理分別從4個(gè)不同方向測(cè)量4次取平均值[15]，直至單獨(dú)培養(yǎng)的蘋(píng)果病原菌菌落長(zhǎng)滿(mǎn)整個(gè)培養(yǎng)皿為止，按照下列公式計(jì)算抑制率：

T=(K1-K2)/K1×100%

其中，T為抑制率，K1為單獨(dú)培養(yǎng)蘋(píng)果病原菌菌落生長(zhǎng)半徑平均值，K2為對(duì)峙培養(yǎng)蘋(píng)果病原菌菌落生長(zhǎng)半徑平均值。

1.2.2 球孢白僵菌BD-B180孢子懸浮液對(duì)蘋(píng)果病原菌的抑制作用測(cè)定 刮取用PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)30 d的球孢白僵菌BD-B180的分生孢子，放入加有10 mL 0.05%吐溫-80溶液的玻璃勻漿器中進(jìn)行研磨，研磨至無(wú)沉淀后倒入裝有0.05%吐溫-80溶液的錐形瓶中，用血球計(jì)數(shù)的方法確定溶液的濃度，并最終將該溶液配成2.49×107cfu/mL的孢子懸浮液母液，隨后用系列稀釋法稀釋成2.49×106、2.49×105、2.49×104、2.49×103cfu/mL等不同濃度的孢子懸浮液。當(dāng)PDA培養(yǎng)基溫度冷卻至40～45 ℃時(shí)，吸取9 mL培養(yǎng)基與1 mL振蕩均勻的孢子懸浮液混勻，制成含有不同濃度分生孢子的PDA平板。待平板凝固后，將25 ℃黑暗條件下恒溫培養(yǎng)3～5 d的供試蘋(píng)果病原真菌的菌碟(直徑7 mm)接種于平板中央，同時(shí)以9 mL培養(yǎng)基與1 mL無(wú)菌水混勻制成的PDA平板并接種菌碟為對(duì)照組，每個(gè)處理重復(fù)3次。將以上培養(yǎng)皿倒置于恒溫光照培養(yǎng)箱中，于25 ℃黑暗條件下恒溫培養(yǎng)，每24 h觀察各菌株的生長(zhǎng)狀況，測(cè)量記錄菌落直徑，直至對(duì)照培養(yǎng)的蘋(píng)果病原菌菌落長(zhǎng)滿(mǎn)整個(gè)培養(yǎng)皿為止，采用十字交叉法測(cè)量菌落生長(zhǎng)直徑，按照下列公式計(jì)算抑制率：

T=(M1-M2)/M1×100%

其中，T為抑制率，M1為無(wú)菌水處理平板中蘋(píng)果病原菌菌落生長(zhǎng)直徑平均值-7 mm，M2為孢子懸浮液處理平板中蘋(píng)果病原菌菌落生長(zhǎng)直徑平均值-7 mm。

1.2.3 球孢白僵菌BD-B180發(fā)酵液對(duì)蘋(píng)果病原菌的抑制作用測(cè)定

1.2.3.1 球孢白僵菌BD-B180發(fā)酵液的制備 將保存的球孢白僵菌BD-B180菌株轉(zhuǎn)接到PDA平板上活化5 d后，在無(wú)菌的條件下，用打孔器(7 mm)打10個(gè)菌碟，轉(zhuǎn)接到裝有70 mL PD液體培養(yǎng)基的250 mL錐形瓶中，于黑暗條件下120 r/min、25 ℃恒溫?fù)u床上振蕩培養(yǎng)5 d。之后，以2%的接種量接入含有100 mL PD液體培養(yǎng)基的250 mL錐形瓶中，于黑暗條件下120 r/min、25 ℃的搖床上分別振蕩培養(yǎng)5、10、15、20 d。然后用已滅菌的濾紙?jiān)跓o(wú)菌條件下進(jìn)行過(guò)濾，濾去菌絲。濾液經(jīng)5 000 r/min離心15 min去除沉淀[16-17]，收集上清液并倒入已滅菌的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的收集瓶中進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，將上清液濃縮10倍。最后經(jīng)孔徑為0.22 μm的細(xì)菌過(guò)濾器過(guò)濾得到球孢白僵菌BD-B180無(wú)菌發(fā)酵液，置于冰箱(4 ℃)中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3.2 發(fā)酵液對(duì)蘋(píng)果病原菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用測(cè)定 吸取2 mL制備好的發(fā)酵液，加入18 mL的PDA培養(yǎng)基，混勻，制成發(fā)酵液平板，以加入2 mL無(wú)菌水的平板作對(duì)照。然后接種蘋(píng)果病原菌(25 ℃黑暗條件下恒溫培養(yǎng)3～5 d)菌碟于平板中央，置于恒溫光照培養(yǎng)箱中，于25 ℃黑暗條件下恒溫培養(yǎng)，每隔24 h觀察各菌株的生長(zhǎng)狀況，測(cè)量記錄菌落直徑，直至對(duì)照培養(yǎng)的蘋(píng)果病原菌菌落長(zhǎng)滿(mǎn)整個(gè)培養(yǎng)皿為止，采用十字交叉法測(cè)量菌落生長(zhǎng)直徑，按照下列公式計(jì)算抑制率：

T=(C1-C2)/C1×100%

其中，T為抑制率，C1為無(wú)菌水處理平板中蘋(píng)果病原菌菌落生長(zhǎng)直徑平均值，C2為發(fā)酵液處理平板中蘋(píng)果病原菌菌落生長(zhǎng)直徑平均值[18]。

1.3 數(shù)據(jù)分析

所得數(shù)據(jù)經(jīng)DPS軟件統(tǒng)計(jì)處理，用Duncan氏新復(fù)極差法進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 球孢白僵菌BD-B180對(duì)蘋(píng)果病原菌的拮抗作用

球孢白僵菌BD-B180對(duì)蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病菌、蘋(píng)果腐爛病菌和蘋(píng)果輪紋病菌均有一定的拮抗作用，其中，對(duì)蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病菌的抑制效果最好，最高抑制率為45.08%，其對(duì)蘋(píng)果輪紋病菌和蘋(píng)果腐爛病菌的最高抑制率分別為41.35%和39.74%(表1—3)。當(dāng)球孢白僵菌BD-B180與蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病菌對(duì)峙培養(yǎng)11 d、與蘋(píng)果腐爛病菌對(duì)峙培養(yǎng)6 d和與蘋(píng)果輪紋病菌對(duì)峙培養(yǎng)4 d時(shí)，能夠觀察到球孢白僵菌BD-B180對(duì)這3種蘋(píng)果病原菌菌絲生長(zhǎng)有明顯的抑制作用(圖1)，且在球孢白僵菌BD-B180菌株與蘋(píng)果病原菌菌株沿接種點(diǎn)連線(xiàn)方向的菌絲生長(zhǎng)極其緩慢，甚至停止生長(zhǎng)。當(dāng)蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病菌對(duì)峙培養(yǎng)29 d、蘋(píng)果腐爛病菌對(duì)峙培養(yǎng)25 d時(shí)，球孢白僵菌BD-B180與這2種病原菌菌株對(duì)峙培養(yǎng)處形成明顯隔離帶，而蘋(píng)果輪紋病菌對(duì)峙培養(yǎng)到29 d時(shí)仍不明顯(圖1)。

表1 球孢白僵菌BD-B180平板對(duì)峙培養(yǎng)對(duì)蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病菌生長(zhǎng)的抑制作用

注：同列不同大、小寫(xiě)字母表示經(jīng)Duncan氏新復(fù)極差法測(cè)驗(yàn)分別在0.01、0.05水平上差異顯著，下同。

表2 球孢白僵菌BD-B180平板對(duì)峙培養(yǎng)對(duì)蘋(píng)果腐爛病菌生長(zhǎng)的抑制作用

表3 球孢白僵菌BD-B180平板對(duì)峙培養(yǎng)對(duì)蘋(píng)果輪紋病菌生長(zhǎng)的抑制作用

1.球孢白僵菌BD-B180與蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病菌對(duì)峙培養(yǎng)11 d；2.球孢白僵菌BD-B180與蘋(píng)果腐爛病菌對(duì)峙培養(yǎng)6 d；3.球孢白僵菌BD-B180與蘋(píng)果輪紋病菌對(duì)峙培養(yǎng)4 d；4.球孢白僵菌BD-B180與蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病菌對(duì)峙培養(yǎng)29 d(反面)；5.球孢白僵菌BD-B180與蘋(píng)果腐爛病菌對(duì)峙培養(yǎng)25 d(反面)；6.球孢白僵菌BD-B180與蘋(píng)果輪紋病菌對(duì)峙培養(yǎng)29 d(反面)圖1 球孢白僵菌BD-B180與蘋(píng)果病原菌的對(duì)峙培養(yǎng)結(jié)果

2.2 球孢白僵菌BD-B180孢子懸浮液對(duì)蘋(píng)果病原菌的抑制作用

從表4可以看出，球孢白僵菌BD-B180孢子懸浮液對(duì)3種蘋(píng)果病原菌均有不同程度的抑制作用。隨著孢子懸浮液濃度的增加，對(duì)3種蘋(píng)果病原菌的抑制程度也相應(yīng)增強(qiáng)。濃度為2.49×107cfu/mL的孢子懸浮液對(duì)蘋(píng)果輪紋病菌的抑制效果最佳，最高抑制率達(dá)90.81%，其對(duì)蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病菌和蘋(píng)果腐爛病菌的最高抑制率分別為77.14%和52.78%，并且在培養(yǎng)3 d時(shí)對(duì)3種蘋(píng)果病原菌的抑制率均大于50%。觀察發(fā)現(xiàn)，在濃度為2.49×107cfu/mL的孢子懸浮液制成的平板上，3種蘋(píng)果病原菌菌落均被白僵菌包圍，且菌落表現(xiàn)出與對(duì)照菌落不同的生長(zhǎng)狀況，蘋(píng)果腐爛病菌菌落呈微黃色，蘋(píng)果輪紋病菌菌落和蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病菌菌落呈黑色，并且在平板上均產(chǎn)生不同大小的抑菌圈(圖2)。這可能是病原菌與白僵菌對(duì)峙過(guò)程中雙方的分泌物接觸后所表現(xiàn)出的結(jié)果，與平板對(duì)峙培養(yǎng)時(shí)所表現(xiàn)出的對(duì)峙狀態(tài)一致，是兩者對(duì)空間和營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)的結(jié)果。

表4 球孢白僵菌BD-B180孢子懸浮液對(duì)3種蘋(píng)果病原菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用

1.孢子懸浮液濃度為2.49×107cfu/mL平板上的蘋(píng)果腐爛病菌(反面)；2.孢子懸浮液濃度為2.49×107cfu/mL平板上的蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病菌(反面)；3.孢子懸浮液濃度為2.49×107cfu/mL平板上的蘋(píng)果輪紋病菌(反面)圖2 球孢白僵菌BD-B180孢子懸浮液對(duì)蘋(píng)果病原菌的抑制效果

2.3 球孢白僵菌BD-B180發(fā)酵液對(duì)蘋(píng)果病原菌生長(zhǎng)的影響

2.3.1 發(fā)酵液對(duì)蘋(píng)果病原菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用 從表5—7可以看出，球孢白僵菌BD-B180發(fā)酵液對(duì)蘋(píng)果腐爛病菌、蘋(píng)果輪紋病菌和蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病菌均有不同程度的抑制作用，且隨著振蕩培養(yǎng)時(shí)間的增加，對(duì)3種蘋(píng)果病原菌的抑制效果也明顯增加。振蕩培養(yǎng)20 d的球孢白僵菌BD-B180發(fā)酵液抑菌效果最好，其對(duì)蘋(píng)果腐爛病菌的抑菌效果最明顯，最高抑制率達(dá)68.33%，對(duì)蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病菌和蘋(píng)果輪紋病菌的最高抑制率分別為66.42%和59.76%。振蕩培養(yǎng)5 d的球孢白僵菌BD-B180發(fā)酵液抑菌效果最差，對(duì)蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病菌的最高抑制率僅為11.28%，對(duì)蘋(píng)果輪紋病菌的最高抑制率為12.16%，對(duì)蘋(píng)果腐爛病菌的抑菌效果較好，最高抑制率為40.00%。

2.3.2 發(fā)酵液對(duì)蘋(píng)果病原菌菌落的影響 由圖3可以看出，在培養(yǎng)相同時(shí)間的情況下，加入振蕩培養(yǎng)20 d的球孢白僵菌BD-B180發(fā)酵液平板上的3種蘋(píng)果病原菌菌落與對(duì)照平板上的菌落有明顯的差異。蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病菌對(duì)照菌落生長(zhǎng)均勻且黑白相間，而加入發(fā)酵液平板上的菌落則較大面積為深綠色且生長(zhǎng)不均勻；蘋(píng)果輪紋病菌對(duì)照菌落生長(zhǎng)均勻，而加入發(fā)酵液平板上的菌落則生長(zhǎng)極其不規(guī)則，菌絲顏色也相對(duì)較深；蘋(píng)果腐爛病菌對(duì)照菌落生長(zhǎng)均勻，而加入發(fā)酵液平板上的菌落生長(zhǎng)相對(duì)不均勻，甚至菌碟表面也長(zhǎng)滿(mǎn)病原菌菌絲。表明振蕩培養(yǎng)20 d的球孢白僵菌BD-B180發(fā)酵液對(duì)3種蘋(píng)果病原菌菌落均產(chǎn)生了明顯的抑制作用，使得這3種蘋(píng)果病原菌菌絲顏色、生長(zhǎng)方式等都發(fā)生了明顯變化。

表5 球孢白僵菌BD-B180發(fā)酵液對(duì)蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用

表6 球孢白僵菌BD-B180發(fā)酵液對(duì)蘋(píng)果輪紋病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用

表7 球孢白僵菌BD-B180發(fā)酵液對(duì)蘋(píng)果腐爛病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用

1—2.蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病菌(1為對(duì)照，2為加入振蕩培養(yǎng)20 d的球孢白僵菌BD-B180發(fā)酵液)；3—4.蘋(píng)果輪紋病菌(3為對(duì)照，4為加入振蕩培養(yǎng)20 d的球孢白僵菌BD-B180發(fā)酵液)；5—6.蘋(píng)果腐爛病菌(5為對(duì)照，6為加入振蕩培養(yǎng)20 d的球孢白僵菌BD-B180發(fā)酵液)

3 結(jié)論與討論

蟲(chóng)生真菌種類(lèi)繁多、分布廣泛，是一種寶貴的生防資源，國(guó)外已經(jīng)有大量成功應(yīng)用的典例，但主要集中在害蟲(chóng)生防方面[9]。從20世紀(jì)90年代開(kāi)始國(guó)外有關(guān)于利用金龜子綠僵菌和球孢白僵菌防治甜菜黑脛病的研究報(bào)道，但國(guó)內(nèi)有關(guān)蟲(chóng)生真菌對(duì)植物病原真菌生防作用的報(bào)道較少，且主要針對(duì)蔬菜和大田作物，如：張勝利等[15]報(bào)道，球孢白僵菌對(duì)棉花枯萎病菌和棉花紅腐病菌的抑制作用明顯；齊永霞等[17]報(bào)道，金龜子綠僵菌3個(gè)不同菌株對(duì)小麥紋枯病菌均有較好的抑制作用；何超[19]研究表明，布氏白僵菌Bbr12、Bbr14和Bbr17對(duì)水稻稻瘟病菌、油菜菌核病菌、小麥紋枯病菌和玉米小斑病菌具有一定的拮抗作用。然而關(guān)于防治果樹(shù)病害的研究未見(jiàn)報(bào)道。

由于綠僵菌和白僵菌具有真菌殺菌劑的諸多優(yōu)點(diǎn)，目前被普遍認(rèn)為是最有開(kāi)發(fā)潛力的微生物殺菌劑，已經(jīng)受到了植物病理學(xué)家的青睞。本研究測(cè)定已有的白僵菌菌株對(duì)3種蘋(píng)果病原真菌的室內(nèi)抑制作用，以期篩選出對(duì)果樹(shù)病原真菌具有生防價(jià)值的蟲(chóng)生真菌菌株，為蟲(chóng)生真菌應(yīng)用于果樹(shù)病害生防以及真菌殺菌劑的開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。對(duì)峙培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果表明，球孢白僵菌BD-B180對(duì)3種蘋(píng)果病原真菌均表現(xiàn)出較好的抑制作用。其中，對(duì)蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病菌的抑制率最高，其次是蘋(píng)果輪紋病菌和蘋(píng)果腐爛病菌，最高抑制率分別為45.08%、41.35%和39.74%。生防菌對(duì)植物病原菌直接的作用機(jī)制主要表現(xiàn)為重寄生和拮抗作用2類(lèi)，而拮抗作用包括占領(lǐng)、抗生作用、競(jìng)爭(zhēng)作用等方式[15]。在加入球孢白僵菌BD-B180孢子懸浮液的PDA培養(yǎng)基上接種蘋(píng)果病原真菌，3種真菌菌絲生長(zhǎng)均受到不同程度的抑制，抑制程度隨孢子濃度增加而增強(qiáng)，當(dāng)孢子懸浮液濃度為2.49×107cfu/mL時(shí)，對(duì)蘋(píng)果輪紋病菌、蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病菌和蘋(píng)果腐爛病菌的最高抑制率分別為90.81%、77.14%和52.78%，并且白僵菌生長(zhǎng)均對(duì)病原菌菌落形成了包圍，有的造成病原菌停止生長(zhǎng)，說(shuō)明白僵菌在生長(zhǎng)過(guò)程中與病原真菌競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)和空間，同時(shí)還產(chǎn)生了抗生作用，這與夏龍蓀等[18]的研究結(jié)果相同。發(fā)酵液的抑菌效果隨著球孢白僵菌發(fā)酵時(shí)間的增加而增強(qiáng)，振蕩培養(yǎng)20 d的發(fā)酵液對(duì)蘋(píng)果輪紋病菌、蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病菌和蘋(píng)果腐爛病菌的最高抑制率分別為59.76%、66.42%和68.33%。經(jīng)過(guò)發(fā)酵后的白僵菌對(duì)蘋(píng)果病原真菌的抑制作用明顯增強(qiáng)，說(shuō)明發(fā)酵增加了有效抑菌成分的濃度。有文獻(xiàn)報(bào)道，一些食用菌發(fā)酵液的有效抑菌成分主要為一些小分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)、多肽、多糖、酚和有機(jī)酸類(lèi)等物質(zhì)[15]。至于球孢白僵菌BD-B180發(fā)酵液的有效抑菌成分以及抑菌機(jī)制等問(wèn)題，還有待進(jìn)一步的深入研究。此外，還可以考慮將蟲(chóng)生真菌與一些高效、低毒的農(nóng)藥混用，以提高蟲(chóng)生真菌對(duì)植物病害的防治效果。

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