王慶武，叢倩倩，李秀梅，安秀榮

（山東省泰安市農業(yè)科學研究院，山東 泰安 271000）

食用菌菌種隨著培養(yǎng)時間的延長，將會發(fā)生老化現(xiàn)象，產生一系列生理生化變化[1]，如菌絲萌發(fā)時間延長，生長速度減慢，長勢減弱[2]，抗逆性差，品質和產量降低等情況，嚴重影響菇農的經濟效益。側耳屬（Pleurotus spp.）目前已知包含31個種[3]，其中平菇（Pleurotus osreatus）、杏鮑菇（Pleurotus eryngii）、秀珍菇（Pleurotus pulmonarius）的栽培最為廣泛[4]，為了解側耳屬3個主要栽培種的母種保藏時間對菌種的影響，開展了保藏時間對菌種的影響試驗，旨在為側耳屬3個主要品種的栽培提供科學依據，從而為地方菌種生產起到帶動和引導作用[5]。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

本實驗室保存的平菇99、秀珍菇和杏鮑菇菌株。

1.2 培養(yǎng)基

母種培養(yǎng)基配方：馬鈴薯200 g、麩皮40 g、葡萄糖20 g、硫酸鎂1.5 g、磷酸二氫鉀3 g、瓊脂20 g，定容至1 000 mL。

液體菌種培養(yǎng)基配方：馬鈴薯200 g、麩皮40 g，煮汁過濾后，在濾液中加入葡萄糖20 g、硫酸鎂1.5 g、磷酸二氫鉀3 g，定容至1 000 mL，分裝到150 mL三角瓶中。

原種培養(yǎng)基配方：棉籽殼86%、麥麩10%、葡萄糖1%、硫酸鈣1%、生石灰粉2%。

栽培袋培養(yǎng)基配方：棉籽殼67%、玉米芯30%、麥麩10%、硫酸鈣1%、生石灰粉2%。

1.3 母種制作

按照配方，對供試菌株每隔3個月制作母種1次，然后放入冰箱內4℃保藏，保藏時間依次為12個、9個、6個、3個、0個月共5個梯度。

1.4 酶活的檢測

對3個種不同保藏時間的菌株，分別檢測其菌絲體羧甲基纖維素酶酶活性、淀粉酶酶活性、木聚糖酶酶活性。

1.4.1 菌絲體的培養(yǎng)

在液體菌種培養(yǎng)基中分別接入3個種不同保藏時間的菌株，每瓶接入8 mm的菌絲圓片，每個處理設3個重復，置于25℃靜置培養(yǎng)7 d。

1.4.2 粗酶液的制備

將三角瓶內表面菌絲使用4層紗布濾去，取濾液5 mL于10 mL離心管中，4 000 r·min-1，4℃離心10 min，取上清。

1.4.3 纖維素酶酶活性的測定

按照參考文獻[6]的方法進行測定。酶活力單位（U·mL-1）定義為：在測定條件下，1 mL酶液每分鐘水解底物生成1 μg葡萄糖所需的酶量。

1.4.4 淀粉酶酶活性的測定

按照參考文獻[7]的方法進行測定。酶活力單位（U·mL-1）定義為：在測定條件下，1 mL酶液每分鐘水解底物生成1 μg葡萄糖所需的酶量。

1.4.5 木聚糖酶酶活性的測定

按照參考文獻[6]的方法進行測定。酶活力單位（U·mL-1）定義為：在測定條件下，1 mL酶液每分鐘水解底物生成1 μg木糖所需的酶量。

以上測定以煮沸15 min的粗酶液為對照，每組3個重復，取平均值。

1.5 原種制作

母種保藏時間到時后，按常規(guī)方法統(tǒng)一制作原種。

1.6 栽培袋制作

原種滿瓶后制作栽培袋。采用17 cm×33 cm聚丙烯塑料袋，每袋裝干料0.422 kg。

1.7 出菇

栽培袋滿袋后進入試驗棚，采用完全隨機區(qū)組設計[8]，3次重復，每重復30袋，菇棚內墻式兩端小口定位出菇[9]。出菇期只給水，不使用任何農藥和添加劑[10]，常規(guī)管理。

1.8 統(tǒng)計分析

記錄酶活值、菌絲生長情況，子實體采收后稱重，計算生物學效率，采用Duncan’s新復極差對各處理數(shù)據進行統(tǒng)計分析[11]。

2 結果與分析

2.1 菌種不同保藏時間對菌絲生長的影響

菌種不同保藏時間對側耳屬3個種菌絲生長的影響結果見表1。

表1 菌種不同保藏時間對側耳屬3個種菌絲生長的影響Tab.1 Effects of different preservation time on mycelial growth of three species of Pleurotus

由表1可以看出，側耳屬3個種的菌種在不同保藏時間下菌絲均能恢復生長，但在菌落萌發(fā)時間、菌絲生長速度和長勢方面存在差異。平菇菌種保藏時間3個月之內菌落萌發(fā)最快，菌落的萌發(fā)時間為1 d，保藏時間6個月～9個月時，菌落的萌發(fā)時間為2 d，保藏時間12個月時，菌落的萌發(fā)時間為3 d；剛轉接的菌種菌絲生長速度最快，為 4.24 mm·d－1，保藏時間12個月的菌種菌絲生長速度最慢，為3.47 mm·d－1；保藏時間6個月之內菌絲長勢好，保藏時間6個月～12個月菌絲長勢較好。杏鮑菇菌種保藏時間3個月之內菌落萌發(fā)最快，萌發(fā)時間為1 d，保藏時間超過3個月萌發(fā)時間逐漸延長；剛轉接的菌種菌絲生長速度最快，為4.18 mm·d－1，菌絲長勢好，隨保藏時間的延長菌絲生長速度減慢、長勢減弱。剛轉接的秀珍菇菌種菌落萌發(fā)最快，萌發(fā)時間為1 d，菌絲生長速度最快，為3.02 mm·d－1，且菌絲長勢好；保藏時間3個月及以上，菌落萌發(fā)時間逐漸延長，菌絲生長速度逐漸減慢，長勢減弱。

2.2 菌種不同保藏時間對酶活性的影響

菌種不同保藏時間對側耳屬3個種菌絲酶活性的影響結果見表2。

表2 菌種不同保藏時間對側耳屬3個種菌絲酶活性的影響Tab.2 Effects of different preservation time on mycelial enzyme activity of three species of Pleurotus

由表2可以看出，母種不同保藏時間對側耳屬3個種的酶活性有一定的影響。保藏時間對平菇羧甲基纖維素酶和淀粉酶酶活性影響差異不顯著，對木聚糖酶酶活性影響差異顯著，隨著保藏時間的延長，木聚糖酶酶活性逐漸降低。杏鮑菇3種酶的活性隨保藏時間延長逐漸降低。保藏時間對秀珍菇羧甲基纖維素酶和木聚糖酶酶活性影響差異不顯著，對淀粉酶酶活性影響差異顯著，隨著保藏時間延長，淀粉酶酶活性逐漸降低。

2.3 菌種不同保藏時間對生物學效率的影響

菌種不同保藏時間對側耳屬3個種生物學效率的影響結果見表3。

由表3可以看出，側耳屬3個種菌種在不同保藏時間下生物學效率、出菇污染率均有差異。3個種隨菌種保藏時間的延長，其子實體生物學效率均逐漸降低。平菇99和秀珍菇菌種保藏時間3個月之內各自出菇污染率最低，且他們之間無差異，當保藏時間超過3個月，隨其保藏時間延長各自出菇污染率逐漸升高；杏鮑菇菌種保藏時間6個月之內出菇污染率最低，彼此間無差異，當保藏時間超過6個月，隨其保藏時間延長出菇污染率逐漸升高。

3 結論與討論

本試驗表明，不同保藏時間對側耳屬3個種母種菌絲生長有一定的影響，3個種菌種隨保藏時間的延長其菌落萌發(fā)時間延長，菌絲生長速度逐漸減慢，菌絲長勢也逐漸減弱。

表3 菌種不同保藏時間對側耳屬3個種生物學效率的影響Tab.3 Effects of different preservation time on biological efficiency of three species of Pleurotus

不同保藏時間對平菇木聚糖酶酶活性有影響，隨保藏時間延長，酶活性降低，其他2種酶酶活性影響不大。杏鮑菇3種酶活性隨保藏時間延長而逐漸降低，表明酶活性與生物學效率呈正相關。不同保藏時間對秀珍菇淀粉酶酶活性有影響，隨其保藏時間延長酶活性降低，其他2種酶酶活性影響不大。此外，不同保藏時間對側耳屬3個種出菇污染率和生物學效率也有影響，隨菌種保藏時間的延長，生物學效率逐漸降低，出菇污染率逐漸升高，表明隨保藏時間的延長，菌種活力減弱，抗逆性降低，菌種老化，致使產量降低，污染率升高。根據試驗中菌種保藏時間對菌絲生長、生物學效率和出菇污染率的影響，生產中建議側耳屬3個種母種保藏時間不超過3個月，以保持菌種活力，保證菌種質量與產量。

參考文獻：

[1]黃志龍.蘑菇菌種老化過程中的生理生化分析[J].福建農業(yè)學報，2006，21（2）：147-149.

[2]黃貞貞.杏鮑菇和金針菇菌種質量控制技術研究[D].福州：福建農林大學，2011.

[3]盧啟泉.四類平菇種質資源的分子標記分析[D].福州：福建農林大學，2007.

[4]王慶武，蘭玉菲，崔曉，等.側耳屬3個種菌絲培養(yǎng)特性比較[J].中國食用菌，2016，33（3）：61-62.

[5]周希華.食用菌菌種特點及其對菌種業(yè)的影響與對策[J].中國種業(yè)，2005（5）：44-45.

[6]董國強，張孟白，林開江.木聚糖酶酶活測定方法[J].浙江農業(yè)科學，1989，30（2）：88-89.

[7]白玲，黃健.基礎生物化學實驗指導[M].西安：陜西科學技術出版社，1986.

[8]王慶武，安秀榮，崔曉，等.玉米芯添加量對平菇綜合農藝性狀的影響[J].山東農業(yè)科學，2016，48（1）：71-73.

[9]王慶武，安秀榮.平菇小口定位出菇技術集成[J].中國食用菌，2014，33（3）：61-62.

[10]王慶武，蘭玉菲，蔚承祥，等.不同豆秸添加量對平菇綜合農藝性狀的影響[J].中國食用菌，2016，33（3）：61-62.

[11]王慶武，蘭玉菲，安秀榮.泰山赤靈芝菌株生物學特性研究[J].山東農業(yè)科學，2015，47（11）：64-67.