郭正富,李 軍,楊小琴

(1.四川宜賓職業(yè)技術(shù)學(xué)院,四川宜賓 644003;2.四川省宜賓市高縣水務(wù)局,四川宜賓 645150)

硒（Se）是動(dòng)物維持生命代謝的必需微量元素，是生命體完成清除自身體內(nèi)不同過氧化物的重要物質(zhì)（Flatman，1990）；同時(shí)它在生命體中起到防止細(xì)胞線粒體脂類過氧化，避免脂類代謝物對(duì)細(xì)胞膜的破壞。目前大量的研究結(jié)果表明，在飼料中添加硒鹽在一定程度上對(duì)動(dòng)物機(jī)體生長(zhǎng)性能和抗氧化能力產(chǎn)生影響（劉康，2010；朱春峰，2009）；如石斑魚（Lin，2005）、大黃魚（曹娟娟等，2015）、軍曹魚（Liu等，2010）、鱸魚（梁萌青等，2006）等水產(chǎn)品種，也在鯉魚（Ashouri等，2015）、大口黑鱸（Zhu等，2012）和革胡子鯰（Abdel等，2007）等水產(chǎn)品種進(jìn)行硒對(duì)脂肪含量及血清脂肪代謝影響的試驗(yàn)。

鱸魚（Lateolabrax japonicus）是一種廣溫性魚類（適宜水溫3～29 ℃），在我國(guó)南方和北方海域均有養(yǎng)殖，也是一種廣鹽性魚類，近幾年是海水養(yǎng)殖發(fā)展的重點(diǎn)品種。隨著鱸魚人工養(yǎng)殖技術(shù)的成熟和規(guī)模的不斷擴(kuò)大，其對(duì)于商品飼料的要求升高。目前除談楓（2014）對(duì)中期規(guī)格（214.5±1.0）g鱸魚硒元素需要量研究報(bào)道外，國(guó)內(nèi)極少見硒對(duì)鱸魚的影響研究。因此，本試驗(yàn)通過研究飼料中硒水平對(duì)鱸魚營(yíng)養(yǎng)生理及抗氧化能力的影響，以期為鱸魚基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)需求數(shù)據(jù)庫的完善及高效配合飼料的研制提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料 在基礎(chǔ)飼料中分別添加0、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5 mg/kg 的 硒 鹽（NaSeSO3），配置成硒水平依次為 0.06、0.37、0.65、0.97、1.28、1.60 mg/kg的6種等氮等脂飼料。試驗(yàn)飼料基礎(chǔ)配方及營(yíng)養(yǎng)組成見表1。試驗(yàn)所需原料均粉碎過80目篩，混合均勻后制成粒徑為2 mm的顆粒飼料，60 ℃干燥后于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)開始前，用0.06 mg/kg組飼料投喂試驗(yàn)魚2周，分組前饑餓24 h后挑選體態(tài)均勻的（12.30±0.04）g鱸魚720尾隨機(jī)分組。按每組3個(gè)網(wǎng)箱（1.5 m×1.5 m×1 m）、40（尾/箱）的設(shè)置平行進(jìn)行養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)60 d，每天飽食投喂2次（8：10和17：10）。試驗(yàn)期間水溫穩(wěn)定在24～29 ℃，溶氧6 mg/L以上。

1.3 樣品采集和指標(biāo)測(cè)定 養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束空腹24 h后將各試驗(yàn)組鱸魚全部用MS-222（40 mg/L）麻醉后稱重計(jì)數(shù)。然后按10尾/網(wǎng)箱的隨機(jī)抽取各組試驗(yàn)魚，尾靜脈取血置于抗凝管中，4 ℃下5000 r/min離心8 min后，取上層血清48 h內(nèi)完成檢測(cè)。按5尾/網(wǎng)箱選取試驗(yàn)魚，解剖取其肝臟保存于防凍管內(nèi)，液氮急凍后保存在-80 ℃超低溫冰箱中，一周內(nèi)完成相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)。

表1 基礎(chǔ)飼料原料組成及營(yíng)養(yǎng)水平（干重基礎(chǔ)）???%

飼料及全魚常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定參照胡靜等（2016）方法。

肝臟和血清谷胱甘肽還原酶（GR）；谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）；總超氧化物歧化酶（T-SOD）；丙二醛（MDA）采用試劑盒（南京建成生物工程研究所）測(cè)定。

1.4 生產(chǎn)性能 生產(chǎn)性能計(jì)算公式為：

成活率/%=試驗(yàn)期末魚尾數(shù)/試驗(yàn)期初魚尾數(shù)×100；

增重率/%=（試驗(yàn)期末均重－試驗(yàn)期初均重）/試驗(yàn)期初均重×100；

特定生長(zhǎng)率/（%/d）=（ln試驗(yàn)期末均重－ln試驗(yàn)期初均重）/試驗(yàn)天數(shù)×100；

飼料效率/%=（試驗(yàn)期末總重+死亡魚總重－試驗(yàn)期初總重）/總攝入飼料量×100。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)全部采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，用SPSS17.0進(jìn)行單因子方差分析和多重比較。

2 結(jié)果

2.1 飼料不同硒含量對(duì)鱸魚幼魚生長(zhǎng)性能的影響 不同硒含量飼料對(duì)鱸魚幼魚相關(guān)生長(zhǎng)指標(biāo)影響見表2，0.97 mg/kg組的鱸魚幼魚增重率（657.86±2.83）% 和特定生長(zhǎng)率（3.38±0.11）%/d達(dá)到最高，顯著高于除0.65 mg/kg組以外的其他各組（P＜0.05），飼料效率達(dá)到（20.01±0.11）%，變化趨勢(shì)也與增重率相似（P＜0.05）；各組鱸魚的存活率均保持為100%（P＞0.05）。通過二次回歸分析增重率和特定生長(zhǎng)率數(shù)據(jù)（杜強(qiáng)等，2011）得出，當(dāng)飼料中硒含量約為0.81 mg/kg時(shí)，鱸魚幼魚能達(dá)到最大生長(zhǎng)性能（圖1和圖2）。

2.2 不同硒含量飼料對(duì)鱸魚幼魚體組成的影響0.97 mg/kg組鱸魚幼魚粗蛋白質(zhì)含量最高，顯著高于0.06和0.65 mg/kg組（P＜0.05）。0.06 mg/kg組鱸魚幼魚的全魚粗脂肪含量顯著低于0.37、1.28和 1.60 mg/kg組（P＜ 0.05），而鱸魚幼魚的全魚水分在0.06 mg/kg組高于其他各組，且與0.37、0.97、1.28、1.60 mg/kg組差異達(dá)顯著水平（P＜ 0.05）（表 3）。

表2 飼料不同硒含量對(duì)鱸魚幼魚相關(guān)生長(zhǎng)指標(biāo)影響

圖1 不同硒含量對(duì)鱸魚增重率的影響

圖2 不同硒含量對(duì)鱸魚特定生長(zhǎng)率的影響

2.3 不同硒含量飼料對(duì)鱸魚幼魚肝臟抗氧化指標(biāo)的影響 由表4可知，飼喂含硒飼料60 d后，隨著飼料硒含量的增加，試驗(yàn)鱸魚肝臟的谷胱甘肽過氧化物酶活性升高，1.60 mg/kg組顯著高于其他各組（P＜0.05）；肝臟超氧化物歧化酶活性出現(xiàn)先升后降再升高的趨勢(shì)，在0.96 mg/kg組達(dá)到最大活性，并顯著高于其他各組（P＜0.05）。各試驗(yàn)組鱸魚幼體的肝臟丙二醛含量差異不顯著（P ＞ 0.05）。

3 討論

動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)的需要量均存在一定的適宜區(qū)間，對(duì)于硒元素也不例外，適宜區(qū)間內(nèi)，硒對(duì)動(dòng)物具有積極有效的作用，而在區(qū)間外會(huì)導(dǎo)致硒缺乏癥或中毒，這被前人定義為硒的劑量-效應(yīng)曲線原理（徐輝碧，2014）。通過回歸分析文中用不同硒水平飼料飼喂鱸魚60 d的結(jié)果得出，當(dāng)飼料中硒含量在0.81 mg/kg時(shí)，鱸魚能達(dá)到最大生長(zhǎng)性能。這與以往對(duì)軍曹魚（0.788 mg/kg）的研究結(jié)果接近（Liu等，2010），高于對(duì)鱸魚（0.40～ 0.63 mg/kg）（談 楓，2014；梁 萌 青 等，2006）、草 魚（0.438～ 0.631 mg/kg）（蘇 傳 福，2008）、鯉 魚（0.434 ～ 0.517 mg/kg）（金明昌，2007）、斑點(diǎn)叉尾鮰（0.25 mg/kg）（Gatlin，1984）等的研究結(jié)果，但低于軍曹魚（1.29和1.46 mg/kg）（楊原志等，2016）、鮑魚（1.41 mg/kg）（Wang等，2012）的研究結(jié)果。原因可能與水產(chǎn)動(dòng)物品種及其不同生長(zhǎng)階段、養(yǎng)殖環(huán)境和飼料加工工藝等因素有關(guān)。同時(shí)鱸魚和軍曹魚同屬鱸形目，具有一定的遺傳學(xué)關(guān)系，推測(cè)這可能是導(dǎo)致二者硒需要量接近的主要原因，有待從分子生物學(xué)更深一步的研究論證。

表3 飼喂不同硒含量飼料的鱸魚幼魚的營(yíng)養(yǎng)組成（全魚）????????????????%

表4 不同硒含量飼料對(duì)鱸魚幼魚肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

肝臟是魚類硒蓄積較高的組織（Kim，2014）。肝臟谷胱甘肽過氧化物酶、谷胱甘肽還原酶和超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量常用于機(jī)體抗氧化能力判斷的主要指標(biāo)（Pacin等，2013）。硒作為谷胱甘肽過氧化物酶的活性中心，肝臟谷胱甘肽過氧化物酶的活性也能反面判斷機(jī)體硒的效果（胡俊茹等，2016）。本試驗(yàn)中隨著硒在動(dòng)物體內(nèi)的沉積，谷胱甘肽過氧化物酶活性顯著升高，這與以往對(duì)石斑魚（Lin，2005）、黃顙魚（胡俊茹等，2016）及鮑魚（Wang等，2012）的研究結(jié)果相似。谷胱甘肽過氧化物酶和超氧化物歧化酶的活性及兩者間的平衡對(duì)于抵抗機(jī)體氧化損傷具有重要作用，它們與過氧化氫酶一起被定義為細(xì)胞防御功能的首道防線（Gerbhart，2002）。

超氧化物歧化酶是通過捕獲超氧陰離子起到對(duì)機(jī)體氧化免疫防御的作用（Winston，1991）。而銅作為超氧化物歧化酶的結(jié)構(gòu)中心，對(duì)于維持該酶的穩(wěn)定性十分重要，如Lorentzen等（2015）對(duì)大西洋鮭研究發(fā)現(xiàn)，肝臟硒和銅的蓄積量呈正效應(yīng)變化。本試驗(yàn)中，肝臟超氧化物歧化酶活性隨飼料硒含量增加出現(xiàn)波動(dòng)變化，推測(cè)原因可能是范圍內(nèi)硒能使超氧化物歧化酶活性表現(xiàn)出正效應(yīng)關(guān)系，當(dāng)硒水平超出一定范圍則會(huì)抑制超氧化物歧化酶活性，然而當(dāng)含量過高后，機(jī)體再次重啟超氧化物歧化酶以降低高硒所引起的氧化應(yīng)激反應(yīng)，這一推斷有待進(jìn)一步地驗(yàn)證。

Orun等（2005）研究發(fā)現(xiàn)，虹鱒飼料中適量硒鹽或有機(jī)硒能有效降低魚體血清和肌肉丙二醛含量（Orun等，2005），這有異于本研究中硒對(duì)鱸魚及西伯利亞鱘魚（Acipenserbaeri）（Pacini等，2013）和虹鱒（Rider等，2009）中肝臟丙二醛含量的影響。據(jù)以往報(bào)告推測(cè)，出現(xiàn)這一現(xiàn)象的原因可能與試驗(yàn)檢測(cè)方法有關(guān)，目前條件下高效液相色譜法靈敏度遠(yuǎn)高于試劑盒法（Kucukbay等，2009），這有待技術(shù)進(jìn)一步的提升控制，但在同一實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｊ胶蜋z測(cè)方法條件下，本試驗(yàn)結(jié)果仍是鱸魚幼魚營(yíng)養(yǎng)研究較理想?yún)⒖肌?/p>

因此，綜合本試驗(yàn)結(jié)果得出，本試驗(yàn)條件下飼料硒水平為0.81 mg/kg時(shí)，鱸魚可以獲得最大增重率和特定生長(zhǎng)率。

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