劉 洋,尹向輝,陰明杰

(1.唐山市畜牧水產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測中心,河北唐山 063000;2.唐山海港經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)漁政管理站,河北唐山 063611)

磷、鈣是組成動(dòng)物骨骼的重要礦物質(zhì)，與動(dòng)物生長代謝、血液凝固及細(xì)胞膜和核酸的組成息息相關(guān)，在維持動(dòng)物正常生長發(fā)育中起著重要作用（霍啟光，2002）。飼料中適宜的磷、鈣水平不但能保證生命活動(dòng)的正常進(jìn)行，而且能促進(jìn)動(dòng)物骨骼生長；體內(nèi)缺乏鈣、磷會(huì)引起動(dòng)物佝僂病、軟骨病的發(fā)生，同樣還可能導(dǎo)致生產(chǎn)性能下降甚至威脅生命；而過多的補(bǔ)充鈣、磷會(huì)影響動(dòng)物對鈣、磷的吸收利用，影響其他礦物元素的作用效果（陳祖鴻等，2014），并且多余的磷排出體外會(huì)造成環(huán)境污染（Tilman等，2001）。雖然魚類可以直接從水中吸收磷，但由于吸收率較低，水體中磷呈分散狀態(tài)等原因無法滿足魚類的正常需求。因此，飼料仍然是魚類獲取磷最主要的方式。但由于磷的成本較高（價(jià)格＞2200/t），且水產(chǎn)飼料中含磷過多會(huì)導(dǎo)致水體富營化（Bureau，1999）。因此，確定魚類飼料中最佳磷需要量至關(guān)重要。目前已見報(bào)道的有關(guān)于大黃魚（Pseudosciaena crocea）（Mai等，2006）、黑 鯛（Sparus macrocephalus）（Shao等，2008）和日本鱸魚（Lateolabrax japonicas）（Zhang等，2006）等魚類和磷的研究。鈣是魚體內(nèi)含量最多的無機(jī)元素，是維持魚類正常生長和骨骼發(fā)育的最重要營養(yǎng)元素，其在骨骼形成和維持酸堿平衡具有重要作用（林浩然，1999）。鈣參與魚體肌肉收縮、血液凝固、滲透壓調(diào)節(jié)和多種酶反應(yīng)等過程（李愛杰，1996）。

羅非魚具有生長快、食性雜、抗病力強(qiáng)等特點(diǎn)，且骨刺少、肉質(zhì)厚，是我國主要的淡水魚養(yǎng)殖和出口產(chǎn)品之一（李娜等，2016）。由于魚類能從水中獲取足量的鈣，一般不易缺乏鈣，且鈣的缺乏癥在一些魚類中也很難發(fā)現(xiàn)（趙永鋒，2017）。因此，本研究將磷作為變量因素，以尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）為試驗(yàn)材料，探討飼料中不同磷水平對尼羅羅非魚的生長性能、體組成和血液生理生化指標(biāo)的影響，以此科學(xué)評價(jià)并明確磷在尼羅羅非魚飼料中的適宜添加濃度和利用利弊，為羅非魚飼料合理配制磷的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 尼羅羅非魚，來源于唐山市豐南區(qū)志誠養(yǎng)殖合作社。

1.2 試驗(yàn)飼料 根據(jù)尼羅羅非魚的營養(yǎng)需求（楊弘等，2012），以魚粉、玉米蛋白粉、膨化豆粕和部分肉骨粉作為飼料蛋白質(zhì)的來源，以磷酸二氫鈣為源，制成磷實(shí)際含量如下的7種試驗(yàn)飼料，0.68%磷（D1組），0.83%磷（D2組），1.07%磷（D3組），1.28% 磷（D4組），1.42% 磷（D5組），1.65%磷（D6組），1.79%磷（D7組）。飼料原料配比及營養(yǎng)水平見表1。將原料粉碎過60目網(wǎng)篩后按配比混合均勻，擠壓制成顆粒飼料（直徑1.0 mm）風(fēng)干后冷藏備用。

1.3 試驗(yàn)魚飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)開始前，先將試驗(yàn)魚消毒（濃度4%～5%的食鹽溶液浸泡30 s）后，再移入室內(nèi)循環(huán)水水族箱中暫養(yǎng)，以基礎(chǔ)飼料馴化7 d。選擇體質(zhì)健壯、質(zhì)量均勻735尾初始體質(zhì)量在（8.68±0.46）g/尾的羅非魚，按飼料組分為7組，每組3個(gè)平行飼養(yǎng)56 d。每天投喂2次（08：10和 16：10），24 h充氣，養(yǎng)殖水溫為20～24℃，溶解氧＞6.0 mg/L。

表1 飼料組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)，%）

1.4 樣品處理 56 d后，試驗(yàn)魚停食24 h，每個(gè)試驗(yàn)組的每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取3尾魚用于體組成分析。6尾魚尾靜脈采血，于4℃靜置3 h后，4 000r/min低溫離心（4℃）10 min，分離血清后保存于超低溫環(huán)境（-80℃），一周內(nèi)完成血液生化指標(biāo)的測定。試驗(yàn)中解剖魚體和取樣抽血之前均用丁香酚對試驗(yàn)魚進(jìn)行麻醉處理。

1.5 指標(biāo)測定 測定生長指標(biāo)如下：

存活率/%=Nt/N0×100；

特定生長率 /%=（lnWt-lnW0）/t×100；

增重率 /%=（Wt-W0）/W0×100 ；

蛋白效率 /%=（Wt-W0）/（I×CP）×100 ；

飼料效率 /%=（Wt-W0）/I×100 ；

式中，Nt表示終末尾數(shù)；N0表示初始尾數(shù)；W0表示初始魚體尾均重，g；Wt：終末魚體尾均重，g；t表示養(yǎng)殖試驗(yàn)天數(shù)；I表示攝入飼料質(zhì)量，g；CP表示飼料粗蛋白質(zhì)含量，%。

試驗(yàn)飼料及全魚常規(guī)營養(yǎng)成分的測定方法如下：

水分：105℃烘箱干燥法（GB/T6435-2006）。粗蛋白質(zhì)：凱氏定氮法（GB/T6432-1994）。粗脂肪：索氏抽提法（GB/T6433-1994）。粗灰分：550℃灼燒法（GB/T6438-1992）。血清中指標(biāo)測定方法如下：

磷酸酶（ALP）活性：可見光比色法測定。磷含量（飼料及血清）：釩鉬酸銨法測定。甲狀旁腺素：雙抗體夾心ABC-ELISA法測定。

降鈣素（CT）：雙抗體夾心法測定鈣含量（飼料及血清）：原子吸收分光光度法測定。

1，25-二羥基維生素D3：雙抗體夾心法測定。

1.6 數(shù)據(jù)處理 運(yùn)用SPSS（21.0）軟件進(jìn)行單因素方差分析，Duncan’s法進(jìn)行多重比較。結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼料中不同磷水平對尼羅羅非魚生長和飼料利用的影響 本試驗(yàn)中尼羅羅非魚的增重率、特定生長率、飼料效率、蛋白效率生長性能和飼料利用指標(biāo)均隨飼料磷水平的上升顯著變化（P＜0.05），且各指標(biāo)均出現(xiàn)先升高后下降的趨勢。飼料D3（1.07%）除了與D2（0.83%）的平均增重率和特定生長率差異不顯著（P＞0.05）外，均顯著高于其他各組（P＜0.05）；D3和D4組飼料效率和蛋白效率顯著高于其他各組（P＜0.05）。由表2可見，最大生長和飼料利用的最低飼料磷含量分別為0.83%（D2）和1.07%（D3）。以飼料磷含量（x）分別與特定生長率（SGR）和蛋白質(zhì)效率（PE）作二次回歸方程，分別為（SGR）y=-0.9311x2+2.1807x+0.6053 R2=0.8214（圖 1）；（PE）y=-3.9333x2+9.2301x-0.329 R2=0.8021（圖2）。據(jù)回歸方程計(jì)算，本試驗(yàn)條件下，當(dāng)飼料磷含量為1.17%時(shí)，尼羅羅非魚能出現(xiàn)最大生長和飼料利用率。

表2 飼料中不同磷水平對尼羅羅非魚生長和飼料利用的影響

圖1 ?飼料磷含量對羅非魚特定生長率(SGR)?的回歸分析

圖2 ?飼料磷含量對羅非魚飼料效率(PE)的?回歸分析

2.2 飼料中不同磷水平對尼羅羅非魚肌肉營養(yǎng)成分的影響 本試驗(yàn)條件下，飼料磷含量對尼羅羅非魚肌肉水分和粗蛋白質(zhì)含量未產(chǎn)生顯著影響（P＞0.05）（圖3），但對肌肉粗脂肪和粗灰分產(chǎn)生顯著影響（P＜0.05）（圖4）。隨著飼料磷含量的增加，肌肉粗脂肪含量顯著降低，而肌肉粗灰分含量顯著升高。試驗(yàn)中D6和D7組的肌肉粗脂肪顯著低于除D5組外的其他4組（P＜0.05），而D2和D3組的肌肉粗灰分與其他各組差異不顯著（P＞0.05）。由回歸方程分析粗灰分結(jié)果（圖5）可知，本試驗(yàn)條件下，得到灰分沉積的最適飼料磷含量為1.64%。

2.3 飼料中不同磷水平對尼羅羅非魚鈣磷代謝的影響 各組間血清堿性磷酸酶ALP、磷、維生素D3和鈣含量無顯著差異（P＞0.05）（表3）；血清降鈣素出現(xiàn)先增大后減小的趨勢，投喂D5飼料時(shí)達(dá)到最大值，顯著高于除D4和D6組外的其他各組（P＜0.05）。血清甲狀旁腺素含量呈先下降后上升的趨勢，在投喂D5組時(shí)達(dá)到最低。由回歸方程分析血清鈣含量結(jié)果可知，本試驗(yàn)條件下，當(dāng)飼料磷含量為1.13%時(shí)，尼羅羅非魚達(dá)到適宜血清磷代謝能力。

圖3 ?飼料磷含量對羅非魚肌肉水分、?粗蛋白質(zhì)的影響

圖4 ?飼料磷含量對羅非魚肌肉?粗脂肪、粗灰分的影響

表3 飼料中不同磷水平對尼羅羅非魚血清鈣磷代謝的影響

圖5 ?飼料磷含量對羅非魚肌肉粗灰分?含量的回歸分析

圖6 ?飼料磷含量對羅非魚血清鈣含量的回歸分析

3 討論

魚類磷需求量的主要通過生長性能、肌肉魚骨等的磷含量、血清磷酸酶活性及磷離子含量等指標(biāo)反映（Fjelldal等，2012）。結(jié)合實(shí)際養(yǎng)殖生產(chǎn)，魚類飼料適宜磷添加量一般為獲得最大生長性能和飼料利用率的磷含量，如軍曹魚飼料中0.62%的磷就能滿足其生長需要（周萌等，2005），翹嘴鲌?jiān)诹缀繛?.88%時(shí)生長最佳（陳建明等，2007），黃顙魚幼魚（2.7 g/尾）適宜生長的飼料磷含量為 0.76% ～ 0.89%（Luo等，2010）。將 Ca（H2PO4）2的量從黃顙魚幼魚飼料中由2.5%降至1.5%時(shí)，不會(huì)對其生長性能和免疫指標(biāo)產(chǎn)生影響（唐琴等，2011）。姚鷹飛（2012）通過對比吉富羅非魚（46.03±2.14 g）的特定生長率及全魚、脊椎骨磷含量多項(xiàng)生物學(xué)指標(biāo)得出，吉富羅非魚對飼料中磷的最低需求是0.81%。本試驗(yàn)條件下，最適宜尼羅羅非魚生長和飼料利用的磷含量為1.17%，高于吉富羅非魚（姚鷹飛，2012），與黃顙魚（唐琴等，2011）的研究結(jié)果相當(dāng)，原因可能是磷的吸收代謝與魚種類有關(guān)，同時(shí)也與魚類初始重量、體內(nèi)磷的貯存狀態(tài)、生理狀態(tài)及飼料營養(yǎng)成分多種因素有關(guān)。

據(jù)以往研究報(bào)道，草魚（王志忠等，2002）和吉富羅非魚（姚鷹飛等，2012）在飼料中嚴(yán)重缺磷時(shí)，骨骼灰分、磷含量及魚體肌肉出現(xiàn)顯著變化（叢林梅等，2016）。研究表明，軍曹魚（周萌等，2005）、虹鱒（Sugiura等，2000）體脂肪隨飼料磷水平上升呈逐漸降低趨勢，從生理學(xué)角度上可能由于磷含量過于飽和超標(biāo)影響氧化磷酸化動(dòng)態(tài)平衡，限制三羧酸循環(huán)，致使循環(huán)中的乙酰輔酶CoA累積，導(dǎo)致肌肉脂肪沉積升高（周順伍，2005）。本試驗(yàn)結(jié)果基本與上述專著報(bào)道一致。

通過血清中鈣、磷和堿性磷酸變化來分析魚體內(nèi)鈣、磷營養(yǎng)狀況及鈣、磷的吸收效果（姚鷹飛等，2012）。本試驗(yàn)結(jié)果與以往對黃顙魚（唐琴等，2011）的研究相似，攝食不同磷含量的飼料，其血漿ALP、血鈣和血磷活性無差異。鈣磷的一系列代謝過程均是在甲狀旁腺素、降鈣素和活性維生素D3的調(diào)節(jié)下進(jìn)行（姚泰和羅自強(qiáng)，2001）。本試驗(yàn)中尼羅羅非魚在飼喂D5組（磷含量1.42%）時(shí)，血清降鈣素達(dá)到最高，血清甲狀旁腺素降到最低，這說明在飼料磷含量1.65%時(shí)，尼羅羅非魚的鈣磷代謝合理，具體的影響機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

作為調(diào)節(jié)血鈣吸收的重要激素，甲狀旁腺激素具有促進(jìn)磷排出，鈣重吸收，提高血鈣及促進(jìn)溶骨作用，而降鈣素同時(shí)也具有降低血液中鈣和磷的作用（周順伍，2005）。本試驗(yàn)中調(diào)控尼羅尼羅魚鈣磷代謝的激素受到影響，適宜磷水平（1.13%以上）通過促進(jìn)魚體1，25-二羥基維生素D3、降鈣素含量，降低甲狀旁腺激素水平來達(dá)到調(diào)控鈣磷代謝平衡的效果（王春芳等，2014）。這與以往對吉富羅非魚飼料鈣磷比研究結(jié)果相似，適宜飼料磷含量能促進(jìn)血液鈣的吸收，同時(shí)降低甲狀旁腺激素分泌（姚鷹飛等，2012）；另外，飼料中適宜的磷含量也可增強(qiáng)維生素D3的吸收，更進(jìn)一步地促進(jìn)骨鈣沉積效果（田慶顯等，2006）。這與以往對黃顙魚的研究報(bào)道吻合（叢林梅等，2016）。

因此，在本試驗(yàn)條件下，可促進(jìn)尼羅羅非魚生長性能、飼料利用和鈣磷代謝平衡的適宜飼料有效磷含量范圍為1.13%～1.64%。

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