（煙臺市園林管理處南山公園，山東煙臺 264000）

以煙臺動物園飼養(yǎng)的兩只育齡雌性馬來熊為研究對象，檢測其不同季節(jié)血清中LH（促黃體生成素）含量。

1 麻醉保定與復(fù)蘇

供采精馬來熊采精前禁食、禁水12 h，采用陸眠寧（長春生產(chǎn)，）進行麻醉，肌肉注射。供試的雄性成年馬來熊體重均在70～80kg左右，按照2.2ml/100kg的麻醉劑量，陸眠靈平均每只用量1.8～2ml。20～35min后進入麻醉狀態(tài)，采精成功后靜注陸醒寧（拮抗劑）進行復(fù)蘇，約4～6min即蘇醒，意識和行動基本恢復(fù)。

2 血液樣品采集

麻醉情況下，人工輕微保定，橈側(cè)皮靜脈采血。每只每次采血2mL，注入含凝血活酶促凝劑的真空采血管內(nèi)，離心分離血清約0.5ml，置-20℃保存，待測。

兩只雌熊在2015年1月到12月，采血12次，每個月15號采血。

3 試驗方法

血清LH含量的測定：采用放射免疫分析法（RlA），計算4個季節(jié)的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，并利用SPSS程序進行t檢驗。血樣檢測由泰安市中心醫(yī)院提供，藥盒供應(yīng)商：天津協(xié)和，儀器型號：DFM-96型10管放射免疫γ計數(shù)器。待測血清均在技術(shù)規(guī)定的時間范圍內(nèi)測定。

4 結(jié)果與分析

（1）一號雌性馬來熊（大花）血液中LH、FSH、E2和P在不同季節(jié)的含量檢測。

由表1可見，一號馬來熊促黃體生成素（LH）春季含量穩(wěn)定在極低水平，平均0.856 mIU/ml，夏季水平升高達到7月峰值43.023 mIU/ml，秋季降低，平均值5.780 mIU/ml，冬季又恢復(fù)到較低水平，平均值0.450 mIU/ml。

（2）二號馬來熊（小花）血液中LH、FSH、E2和P在不同季節(jié)含量檢測。

二號馬來熊促黃體生成素（LH）春季含量穩(wěn)定在極低水平，平均2.776 mIU/ml，夏季水平升高達到7月峰值75.015 mIU/ml，秋季降低，平均值4. 878 mIU/ml，冬季又恢復(fù)到較低水平，平均值1.539mIU/ml。

（3）兩只雌性馬來熊血液中性激素LH變化比較

由表3和圖1可知，兩只雌性馬來熊4個季節(jié)血液中LH濃度變化趨勢相似，個體2在4個季節(jié)中LH含量春秋兩個季節(jié)高于個體1，差異不顯著（P>0.05）；夏季個體2 LH含量高于個體1，且差異顯著極顯著（P＜0.01）；冬季，低于個體1，差異極顯著（P＜0.01）。個體1在四個季節(jié)中LH含量夏季與春秋冬三個季節(jié)均差異顯著（P＜0.05），夏季與秋季差異顯著（P＜0.05），春季與冬季差異不顯著（P>0.05）。個體2在四個季節(jié)中LH含量夏季與春秋冬三個季節(jié)均差異顯著（P＜0.05），夏季與秋季差異顯著（P＜0.05），春季與冬季差異不顯著（P>0.05）。兩只個體LH外周血濃度含量均在夏季達到峰值，根據(jù)經(jīng)典的母羊卵巢切除并植入雌二醇的試驗，LH在繁殖季節(jié)時維持在較高的水平，而在乏情季節(jié)時則保持在基礎(chǔ)分泌水平。LH四季變化結(jié)果可以推測高濃度的LH對開啟和維持馬來熊的發(fā)情可能有一定的影響。

圖1 1號馬來熊和2號馬來熊4個季節(jié)LH變化比較

5 討論

LH是一種由腺垂體分泌的糖蛋白激素，在FSH協(xié)同作用下可以促進雌性動物卵泡成熟和排卵，刺激卵泡內(nèi)膜細(xì)胞產(chǎn)生雄激素，促進排卵后顆粒細(xì)胞黃體化。根據(jù)P.Chemineau等研究報道，山羊中LH的濃度存在明顯的季節(jié)變化，乏情期濃度較低，進入發(fā)情期時顯著上升。有報道稱綿羊在乏情季節(jié)，雖然LH脈沖釋放系統(tǒng)仍具有功能，但由于GnRH的波動性釋放受到抑制，因此LH的脈沖釋放也受到抑制。本研究結(jié)果顯示，圈養(yǎng)馬來熊處于發(fā)情期時的LH濃度顯著高于乏情期時的濃度，剛好與之一致。目前研究表明出現(xiàn)乏情期的主要原因可能是LH的基礎(chǔ)分泌減低，不會出現(xiàn)LH排卵峰值，因此導(dǎo)致乏情季節(jié)的出現(xiàn)。結(jié)合本研究的結(jié)果，這提示，高濃度的LH對開啟和維持馬來熊的發(fā)情具有重要影響。

表1 一號馬來熊（大花）4季血液中LH分泌量

表2 二號馬來熊（小花）4季血液中LH分泌量

表3 一號馬來熊4季血液中LH、FSH、E2和P的分泌量變化（平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤）

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