趙子剛　張輝　俞財(cái)峰　沈雪鋒　吳曉華　舒雅娟

摘要 [目的]建立藍(lán)莓品種“粉紅檸檬水”穩(wěn)定高效的組培快繁體系。[方法]以“粉紅檸檬水”帶腋芽的莖段為材料，研究不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑及生根基質(zhì)對(duì)誘導(dǎo)、增殖、生根過(guò)程的影響。[結(jié)果]在改良WPM培養(yǎng)基上，添加玉米素ZT 2.0 mg/L、NAA 0.1 mg/L可成功誘導(dǎo)出芽，將芽接種在添加0.3～1.0 mg/L ZT玉米素的培養(yǎng)基上增殖良好，增殖系數(shù)1.10～1.40；以水苔蘚為扦插基質(zhì)進(jìn)行瓶外生根，生根成活率達(dá)85.00%。[結(jié)論]該研究可為藍(lán)莓品種“粉紅檸檬水”果樹(shù)種植推廣奠定基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞 粉紅檸檬水；組織培養(yǎng)；快繁

中圖分類(lèi)號(hào) S663 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼

A 文章編號(hào) 0517-6611（2018）18-0086-02

Establishment of Tissue Culture Rapid Propagation System of Blueberry “Pink Lemonade”

ZHAO Zigang，ZHANG Hui，YU Caifeng et al （Modern Agricultural Park of Qingpu，Shanghai，Shanghai 201717）

Abstract [Objective]To establish a fast and efficient tissue culture system of blueberry variety “Pink Lemonade”.[Method]The effects of different plant growth regulators and rooting matrix on the process of induction，proliferation and rooting were studied.The stem segments with axillary buds was used as material.[Result]In the improved WPM medium，adding zeatin 2.0 mg/L and NAA 0.1 mg/L could successfully induce buds，and the improved WPM medium with the addition of 0.3-1.0 mg/L zeatin had a good proliferation and a proliferation coefficient of 1.10-1.40，and the rate of rooting was 85.00% with the water moss as the cuttage matrix.[Conclusion]The research could lay the foundation for the promotion of the “Pink Lemonade” planting.

Key words “Pink Lemonade”；Tissue culture；Rapid propagation

藍(lán)莓又名越橘，杜鵑花科越橘屬，為多年生落葉或常綠果樹(shù)，呈灌木狀生長(zhǎng)；果實(shí)為漿果，藍(lán)色，近圓形，單果重0.5～2.5 g；果肉細(xì)膩，種子極小，甜酸適中，具有宜人的香氣，可鮮食，也可加工成果汁飲料、果酒等飲品。藍(lán)莓果實(shí)營(yíng)養(yǎng)豐富，微量元素含量也很高，特別是富含鈣、磷、鎂、鋅、鐵、鍺、銅，其抗氧化能力為所有果品、蔬菜之首，對(duì)防止人體細(xì)胞衰老，預(yù)防老年性疾病、心臟病、白內(nèi)障、癌癥、記憶力衰退等具有特殊功效，因而被國(guó)際糧農(nóng)組織列為五大健康食品之一，被譽(yù)為“21世紀(jì)功能性保健水果”和“水果皇后”[1]，是近年世界發(fā)展最為迅速的集營(yíng)養(yǎng)保健于一身的第三代果樹(shù)新品種，風(fēng)靡世界。

國(guó)內(nèi)外對(duì)于藍(lán)莓組培快繁的研究較多[2-3]，利用莖段、葉片作為外植體開(kāi)展研究，已在多個(gè)類(lèi)群中建立了組培再生體系。“粉紅檸檬水”屬兔眼藍(lán)莓系列，由于成熟后果實(shí)呈鮮艷的紅色，現(xiàn)已成為家庭盆栽種植、旅游觀光種植的新寵，市場(chǎng)需求量較大，常規(guī)扦插育苗受時(shí)節(jié)限制，繁殖速度較慢，生長(zhǎng)勢(shì)差，果實(shí)品質(zhì)較低，組培快繁具有速度快、商品性高、連年生產(chǎn)、成本較低等優(yōu)勢(shì)，因此建立適于該品種穩(wěn)定高效的組培快繁體系意義重大。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)于2015年4月—2017年10月在上海青浦現(xiàn)代農(nóng)業(yè)園區(qū)組培實(shí)驗(yàn)室和基地完成。品種為“粉紅檸檬水”，以4—5月藍(lán)莓新生枝條為材料，截取枝頂端10 cm長(zhǎng)。

1.2 方法

1.2.1 外植體的選擇與消毒。從田間選擇無(wú)病健壯藍(lán)莓母株，截取枝頂端10 cm長(zhǎng)，用自來(lái)水沖洗30 min后，在超凈臺(tái)上進(jìn)行消毒處理，用70%乙醇表面處理30 s，無(wú)菌水沖洗2次，然后用0.1%氯化汞處理8～10 min，最后用無(wú)菌水沖洗4次，將枝條剪切成至少帶1個(gè)腋芽的莖段，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上[4-5]。接種后移至培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，光照2 000 lx，16 h/d，溫度（25±1）℃，觀察記錄。

1.2.2 誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽。將藍(lán)莓莖段接種于含不同濃度玉米素ZT（0、2.0、4.0 mg/L）、NAA（0、0.1 mg/L）的改良WPM培養(yǎng)基上，每個(gè)培養(yǎng)瓶接種3個(gè)莖段。采用完全區(qū)組設(shè)計(jì)，共設(shè)6種培養(yǎng)基配比方案（表1），每周觀察記錄分生組織的生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)，30 d后統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率，萌發(fā)率=萌發(fā)芽數(shù)/無(wú)菌外植體數(shù)×100%。

1.2.3 繼代增殖。將誘導(dǎo)分化產(chǎn)生的健壯小苗進(jìn)行分割，然后把分割開(kāi)的小苗接種到增殖培養(yǎng)基上，繼代組培苗株數(shù)為20株/瓶，每個(gè)處理10瓶，培養(yǎng)容器為200 mL玻璃瓶，增殖培養(yǎng)過(guò)60 d繼代1次。增殖培養(yǎng)基采用含玉米素ZT（0、0.3、0.5、1.0、1.5 mg/L）的改良WPM培養(yǎng)基，采用完全區(qū)組設(shè)計(jì)，共設(shè)立5種培養(yǎng)基配比方案，記為B1～B5。60 d后統(tǒng)計(jì)增殖系數(shù)及苗粗壯度，增殖系數(shù)=增殖芽數(shù)/正常叢芽數(shù)。

1.2.4 組培苗馴化與瓶外生根。由于組培苗在無(wú)菌、高濕、強(qiáng)光等優(yōu)越條件下生長(zhǎng)形成，如直接將其移至大田，勢(shì)必會(huì)出現(xiàn)生理功能上的紊亂而不能成活，因此，移栽前要將培養(yǎng)瓶從培養(yǎng)室中取出置于自然條件下，打開(kāi)瓶蓋，讓幼苗進(jìn)行透氣鍛煉，以提高抗逆性。24 h后，從瓶中取出，將其剪成2～3 cm的莖段，速蘸生根液（1 g/L IBA）后栽入不同混合基質(zhì)（草炭∶珍珠巖為2∶1）及水苔蘚中。用塑料薄膜蓋好，保持濕度70%以上，初期適當(dāng)遮光，后期逐漸通風(fēng)，增加光照30 d后，可去除塑料薄膜，統(tǒng)計(jì)成活率，成活率=成活植株數(shù)/移栽植株數(shù)×100%。

2 結(jié)果與分析

2.1 初代誘導(dǎo)

由表2可知，A3～A6這4種培養(yǎng)基均能誘導(dǎo)藍(lán)莓產(chǎn)生不定芽，即藍(lán)莓腋芽萌發(fā)需要ZT的參與。當(dāng)ZT超過(guò)2.0 mg/L時(shí)，萌發(fā)率并無(wú)顯著提高，但芽畸變率提高，表現(xiàn)為木質(zhì)化程度低，有黃化現(xiàn)象，這表明高濃度的ZT會(huì)影響莖尖的正常分化。該試驗(yàn)表明，藍(lán)莓初代誘導(dǎo)過(guò)程中較適宜的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為ZT 2.0 mg/L及NAA 0.1 mg/L。

2.2 莖段增殖

將誘導(dǎo)出的藍(lán)莓苗轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基上，60 d后調(diào)查芽的增殖情況。由表3可知，芽的增殖受ZT濃度的影響，較低濃度ZT有利于單芽生成（圖1），高濃度ZT反而會(huì)提高芽的畸變率，表現(xiàn)為苗纖細(xì)瘦弱，木質(zhì)化程度低，不利于持續(xù)的繼代增殖，該試驗(yàn)認(rèn)為增殖過(guò)程中最適的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為ZT 0.3～1.0 mg/L。

2.3 組培苗馴化與生根

將組培莖段剪切成2～3 cm（至少帶2個(gè)腋芽），速蘸生根液后栽入不同基質(zhì)中，由表4可知，混合基質(zhì)中的成活率只有68.33%，低于在水苔蘚中的成活率（85.00%），因此，藍(lán)莓組培苗瓶外生根時(shí)較理想的生根基質(zhì)為水苔蘚（圖2）。

3 結(jié)論與討論

該試驗(yàn)以“粉紅檸檬水”的帶腋芽莖段為外植體，接種在添加ZT 2.0 mg/L及NAA 0.1 mg/L的改良WPM培養(yǎng)基上進(jìn)行初代誘導(dǎo)，將誘導(dǎo)的芽在添加0.3～1.0 mg/L ZT的改良WPM培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖，增殖系數(shù)達(dá)1.10～1.40，所誘導(dǎo)的藍(lán)莓苗木質(zhì)化程度較高，可直接用于瓶外扦插生根，最佳生根基質(zhì)為水苔蘚，生根成活率為85.00%。

已有的研究結(jié)果表明，藍(lán)莓組織培養(yǎng)以MS、WPM為基本培養(yǎng)基效果較好[6-8]，該研究采取改良WPM培養(yǎng)基，添加ZT，不僅增殖系數(shù)高，而且增殖苗的木質(zhì)化程度高，可以直接進(jìn)行瓶外扦插生根，成活率高，成本低，可實(shí)現(xiàn)工廠化快速育苗。作為第三代果品，藍(lán)莓有著廣闊的市場(chǎng)前景，組培育苗加快了繁育速度，為該品種的果樹(shù)種植推廣奠定了基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

[1]

郝瑞.越桔及其栽培[J].中國(guó)果樹(shù)，1987（1）：24-28.

[2] NICKERSON N L，HALL V.Callus formation in stem internode section of lowbush blueberry （Vaccinium angustifolium Ait.） cultured on a mediume containing plant grouth regulations[J].Hort Rev，1976，16：29-35.

[3] 陳慧都，郝瑞，關(guān)愛(ài)年，等.越桔工廠化育苗研究[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，1990，23（3）：44-50.

[4] 張鳳生，鹿娜，姜淼，等.藍(lán)莓組織培養(yǎng)與快速繁育[J].黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009（3）：3-5.

[5] 王俠禮，鐘士傳，鄭亞琴，等.美國(guó)高灌藍(lán)莓的引進(jìn)及微體快繁技術(shù)研究[J].中國(guó)種業(yè)，2003（12）：40-41.

[6] 樊慶杰，張彩玲，韓超慧.北高灌藍(lán)莓的離體快速繁殖研究[J].中國(guó)新技術(shù)新產(chǎn)品，2009（19）：231.

[7] 張力思，魏海蓉，艾呈祥，等.培養(yǎng)基組分對(duì)藍(lán)莓組培增殖效率的影響[J].落葉果樹(shù)，2006，38（4）：13-14.

[8] 陳鎮(zhèn).高叢藍(lán)莓組培體系及種子萌發(fā)率的建模研究[D].金華：浙江師范大學(xué)，2011.