張俊波　印雙紅　陸安法　白明　任品開　吳橙耀　陳鳳

摘要[目的]了解銅仁地區(qū)山羊布魯氏菌病血清流行病學(xué)情況。[方法]通過平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)，對2012-2015年從銅仁地區(qū)8縣2區(qū)54家養(yǎng)羊場采集的8640份血清樣品進(jìn)行了檢測。[結(jié)果]銅仁地區(qū)羊群中存在布魯氏菌病的感染；2012-2015年的陽性率分別為3.56%、4.72%、11.25%和8.33%，春季平均陽性率為7.57%，秋季平均陽性率為6.18%。[結(jié)論]此次血清學(xué)調(diào)查結(jié)果為銅仁市布魯氏菌病的防控提供了科學(xué)依據(jù)。

關(guān)鍵詞 布魯氏菌??；血清陽性率；流行病學(xué)調(diào)查

中圖分類號 S855.1⁺2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 0517-6611（2018）11-0063-03

布氏桿菌病是由布魯氏菌屬的細(xì)菌侵入機(jī)體引起世界性人獸共患病。貴州省于2010年首次從貴州省山羊血液分離到山羊種布氏桿菌，證實(shí)了布氏桿菌病在畜禽中的存在。2012年從1例患者全血中分離到山羊種布氏桿菌，表明貴州省布氏桿菌病疫情在人群中的存在，隨后布氏桿菌病疫情在貴州省迅速擴(kuò)散，直至2012年疫情已覆蓋貴陽、黔南、黔東南、銅仁等州（市），防控形勢非常嚴(yán)峻。該病的臨床特征是引起動物的生殖器官和胎膜發(fā)炎，引起流產(chǎn)、不孕、睪丸炎、關(guān)節(jié)炎等癥狀，其中牛、山羊、豬最易受到感染。動物布氏桿菌病的報(bào)告病例遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于人布氏桿菌病報(bào)告病例。該病對畜牧業(yè)的發(fā)展和人類的健康都有極大的危害性。

布氏桿菌病的血清學(xué)檢測方法主要包括凝集反應(yīng)、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)、變態(tài)反應(yīng)等。平板凝集試驗(yàn)與試管凝集試驗(yàn)是檢測該病的常用方法，平板凝集試驗(yàn)假陽性的現(xiàn)象較多。平板凝集試驗(yàn)對受檢山羊血清進(jìn)行初檢，出現(xiàn)陽性者再用試管凝集試驗(yàn)進(jìn)行復(fù)檢，得出更加精確的結(jié)果。環(huán)境因素對于控制畜禽疾病的發(fā)生與流行具有重要作用。銅仁市存在山羊感染布氏桿菌病和發(fā)病率呈增高趨勢。筆者對貴州省銅仁地區(qū)山羊布氏桿菌血清學(xué)流行情況進(jìn)行了調(diào)查。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1血清來源。2012-2015年從貴州省銅仁市10個(gè)縣（區(qū)）德江（7個(gè)）、思南（7個(gè)）、碧江（5個(gè)）、松桃（6個(gè)）、印江（5個(gè)）、石阡（5個(gè)）、萬山（4個(gè)）、沿河（6個(gè)）、江口（4個(gè)）、玉屏（5個(gè)）采集血清樣品。共54個(gè)規(guī)模養(yǎng)殖場，每個(gè)養(yǎng)殖場隨機(jī)抽取20份山羊血清，春、秋2個(gè)季節(jié)共采集8640份血清樣品。

1.1.2主要儀器及耗材。主要儀器有ZPD-2050型全自動新型恒溫培養(yǎng)箱、海爾冰箱等；主要耗材有棉簽，清潔、無油脂的一次性試驗(yàn)紙板（5×10孔/板），50、100、250μL微量移液器，試管架，記號筆，凝集反應(yīng)的試管，稀釋抗原用的玻璃瓶（杯）等。

1.1.3主要試劑。布氏桿菌病試管凝集試驗(yàn)抗原與陰、陽性血清（青島易邦生物工程有限公司）；布氏桿菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBT）抗原（青島易邦生物工程有限公司）；0.5%石碳酸生理鹽水（青島易邦生物工程有限公司）；10%生理鹽水。

1.2方法 根據(jù)國家（GB/T18646-2002）、省級監(jiān)測方案及銅仁市農(nóng)業(yè)局的《布氏桿菌病診斷技術(shù)》說明書的方法進(jìn)行操作。

1.2.1平板凝集試驗(yàn)。采用虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBT）對采集的血清樣品進(jìn)行初檢，用已知的抗原與山羊血清發(fā)生反應(yīng)，觀察是否含有抗體，觀察抗原抗體異性反應(yīng)是否生成顆粒狀的沉積物。對血清樣品進(jìn)行布氏桿菌病初篩，具體操作見說明書。

1.2.2試管凝集試驗(yàn)。對虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBT）檢驗(yàn)結(jié)果呈陽性的血清樣品，再進(jìn)行試管凝集試驗(yàn)（SAT），做進(jìn)一步血清學(xué)判斷，具體操作見說明書。

1.2.3結(jié)果判定。

（1）虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBT）結(jié)果的判定方法。①受檢血清在4min內(nèi)出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象者判為陽性，無凝集現(xiàn)象；呈均勻粉紅色者判為陰性。②以“+”表示凝集的程度。++++，菌體完全凝集，100%下沉，上層液體100%清亮；+++，菌體差不多完全凝集，且上層液體75%清亮；++，菌體凝集顯著，液體50%清亮；+，凝集物有沉淀，液體在25%清亮；-，凝集物無沉淀，液體混合均勻渾濁。

（2）試管凝集試驗(yàn)（SAT）結(jié)果判定。若凝集度為1：100（++）以上，判定為陽性。比濁管溶液的配制如表1所示。

2結(jié)果與分析

2.1山羊布氏桿菌病的檢測結(jié)果 通過對2012-2015年從銅仁市各縣養(yǎng)殖場隨機(jī)抽取采集的8640份山羊血清樣品進(jìn)行檢測，以凝集度為1：100（++）為陽性血清，共檢測出陽性血清602份，平均陽性率為6.97%。其中，2014年銅仁市布氏桿菌病的發(fā)病率最高，為11.25%。2012-2014年逐年呈上升趨勢，2014年銅仁市布氏桿菌病陽性率為11.25%，2015年降至8.33%。印江縣布氏桿菌病發(fā)病率最高（表2）。

2.2不同季節(jié)（春、秋）山羊布氏桿菌病檢測結(jié)果 2012-2015年通過對銅仁市10個(gè)縣（區(qū)）定點(diǎn)山羊場的山羊進(jìn)行調(diào)查，包括春、秋2次山羊血清檢測，共采集山羊血清4320份，春季檢測出陽性血清樣品327份，平均陽性率7.57%；秋季檢測陽性血清267份，平均陽性率6.18%，春季陽性率比秋季要高（表3），這可能是因?yàn)榇杭練夂蜉^為溫和，給布氏桿菌病創(chuàng)造良好的條件，而布氏桿菌病在秋季抵抗力不強(qiáng)。

2.3不同縣（區(qū)）山羊布氏桿菌病檢測結(jié)果 在所有縣（區(qū)）中，印江縣陽性率最高，陽性數(shù)101份，陽性率達(dá)12.63%；江口縣次之，陽性數(shù)59份，平均陽性率9.22%。印江縣和江口縣是銅仁市發(fā)生布氏桿菌病的高發(fā)地區(qū)。萬山區(qū)是銅仁市陽性率最低的地區(qū)，陽性血清數(shù)30份，陽性率4.69%，其他縣（區(qū)）的陽性率相差不大，呈無規(guī)律零星分布（表4）。

3結(jié)論與討論

通過對銅仁市的10個(gè)縣（區(qū)）布氏桿菌病進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)2012-2015年陽性率分別為3.56%、4.72%、11.25%和8.33%。從2012年到2014年布氏桿菌病發(fā)病率呈逐年上升趨勢，說明2012-2014年布氏桿菌病的防控形勢并未得到好轉(zhuǎn)，相反防控形勢更加嚴(yán)峻。2014-2015年陽性率稍有下降，但形勢依然十分嚴(yán)峻，銅仁市應(yīng)引起高度重視。從2012-2015年布氏桿菌病人畜間的檢測數(shù)據(jù)可以看出，銅仁市布氏桿菌病疫情存在以下特點(diǎn)：①疫情覆蓋面逐年增加，年發(fā)病率有上升趨勢，與全國布氏桿菌病疫情形勢相一致。工作人員的自我防護(hù)意識薄弱，在作業(yè)過程中未進(jìn)行有效的個(gè)人防護(hù)。此外，銅仁市大量引進(jìn)的山羊得不到有效檢疫，養(yǎng)殖、交易和屠宰環(huán)境惡劣，出售轉(zhuǎn)賣病山羊，加重疫情傳播。②實(shí)驗(yàn)室新感染病例不斷出現(xiàn)。從2007年浙江省首次張俊波等銅仁地區(qū)羊布氏桿菌病血清流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)了由于在試驗(yàn)檢測過程中感染布氏桿菌的病例，2009和2011年又分別報(bào)告1例實(shí)驗(yàn)室感染病例。因此，應(yīng)加強(qiáng)對實(shí)驗(yàn)室的衛(wèi)生情況及布氏桿菌病的防控意識，保證實(shí)驗(yàn)室無布氏桿菌病的病菌污染是減少病原體傳染的一個(gè)重要條件。

通過對2012-2015年銅仁市春、秋2季布氏桿菌病的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，春季采集山羊血清4320份，平均陽性率為7.57%；秋季平均陽性率為6.18%，可見春季布氏桿菌病的發(fā)病率比秋季要高，這可能與氣候、溫度、空氣質(zhì)量、土壤的濕度等因素有關(guān)，與秋季相比春季氣候更為適宜，氣溫適當(dāng)，且空氣質(zhì)量也與布氏桿菌病的繁殖有很大關(guān)系。2012-2015年檢測銅仁市存在布氏桿菌病陽性山羊發(fā)病例數(shù)呈逐年上升趨勢，疫情回升態(tài)勢明顯，這就要求對所有檢測出陽性血清的山羊進(jìn)行撲殺、消毒、深埋等無害化處理，并做好登記備案，達(dá)到凈化布氏桿菌病的目的。對布氏桿菌病的防控措施是以預(yù)防和撲殺病山羊?yàn)橹?，具體措施主要包括：①對布氏桿菌病防治知識進(jìn)行宣傳，提高自我防范意識；②嚴(yán)禁販賣病畜，從外引進(jìn)新畜時(shí)，必須經(jīng)檢疫證實(shí)無病后才可合群；③注意周邊的環(huán)境衛(wèi)生，與山羊接觸后要洗手，不在山羊養(yǎng)殖場內(nèi)吃東西，不吃沒有煮熟的肉和奶，不要玩山羊羔；④人畜房屋不要距離太近，與動物接觸時(shí)要穿工作服、戴口罩及橡膠手套等。

此次調(diào)查中山羊血清的來源不同，檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)陽性率最高的是印江縣，陽性率最高可達(dá)12.63%，江口縣次之，平均陽性率為9.22%。說明這2個(gè)縣對布氏桿菌病的防范意識有待提高，給布氏桿菌病的繁殖提供了良好的環(huán)境。印江縣是感染布氏桿菌病最嚴(yán)重的縣，可能受當(dāng)?shù)氐沫h(huán)境和條件的限制，其管理比較松散，山羊群流動較大，檢疫和消毒制度不完善，才會給布氏桿菌病創(chuàng)造良好的環(huán)境。通過對2012-2015年銅仁市山羊群的布氏桿菌病檢測結(jié)果的分析，發(fā)現(xiàn)2012-2015年每年均檢測出陽性血清，說明該市的山羊感染布氏桿菌病情況比較嚴(yán)重。銅仁市布氏桿菌病的防護(hù)工作仍然十分艱難，在今后的工作實(shí)踐中必須要認(rèn)真貫徹“預(yù)防為主、防治結(jié)合”的方針，堅(jiān)持預(yù)防策略，加強(qiáng)對病情的控制，早發(fā)現(xiàn)早治療，增強(qiáng)對布氏桿菌病傳播途徑的培訓(xùn)，提高對布氏桿菌病的防控水平，進(jìn)一步對布氏桿菌病的防控工作開展交流與合作，政府應(yīng)對防治工作進(jìn)一步加大資金投入，使布氏桿菌病得到有效控制。

科技論文寫作規(guī)范——數(shù)字

公歷世紀(jì)、年代、年、月、日、時(shí)刻和各種計(jì)數(shù)和計(jì)量，均用阿拉伯?dāng)?shù)字。年份不能簡寫，如1990年不能寫成90年，文中避免出現(xiàn)“去年”“今年”等寫法。小于1的小數(shù)點(diǎn)前的零不能省略，如0.2456不能寫成.2456。小數(shù)點(diǎn)前或后超過4位數(shù)（含4位數(shù)），從小數(shù)點(diǎn)向左右每3位空半格，不用“，”隔開。如18072.23571。尾數(shù)多的數(shù)字（5位以上）和小數(shù)點(diǎn)后位數(shù)多的小數(shù)，宜采用×10ⁿ（n為正負(fù)整數(shù)）的寫法。數(shù)字應(yīng)正確地寫出有效數(shù)字，任何一個(gè)數(shù)字，只允許最后一位存在誤差。