李英英 陳曦 宋鐵英

摘要 [目的]為了降低屎腸球菌微膠囊制劑的發(fā)酵成本，[方法]用自主分離的一株屎腸球菌作為發(fā)酵菌株，用玉米和豆粕替代MRS基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的碳源和氮源，設(shè)計(jì)不同替代比例的MRS廉價(jià)培養(yǎng)基，經(jīng)過培養(yǎng)和計(jì)數(shù)，篩選出價(jià)格低廉又適合該菌株生長的廉價(jià)培養(yǎng)基。[結(jié)果]玉米和豆粕作為碳源和氮源制成的替代培養(yǎng)基適合該屎腸球菌生長；結(jié)合價(jià)格和培養(yǎng)效果，篩選出碳源50%替代、氮源100%替代的MRS-C50N100替代培養(yǎng)基為適合用于屎腸球菌工業(yè)化發(fā)酵的廉價(jià)培養(yǎng)基。[結(jié)論]MRS-C50N100替代培養(yǎng)基既可以極大降低屎腸球菌的發(fā)酵成本，又可以使活菌數(shù)達(dá)到益生菌制劑要求的有效活菌量，可用于屎腸球菌微膠囊制劑的工業(yè)化生產(chǎn)。

關(guān)鍵詞 屎腸球菌；MRS，廉價(jià)培養(yǎng)基；飼料原料

中圖分類號(hào) S816.6 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼

A 文章編號(hào) 0517-6611（2018）32-0080-02

The Development of the Lowcost Medium Using for Enterococcus faecium

LI Yingying，CHEN Xi，SONG Tieying （Institute of Biotechnology，F(xiàn)ujian Academy of Agricultural Science，F(xiàn)uzhou，F(xiàn)ujian 350003）

Abstract [Objective] In order to reduce the fermentation cost of microencapsulated Enterococcus faecium.[Method] The carbon and nitrogen source in MRS basic medium were instead of corn and soybean meal which were usually used as stuff.MRS lowcost medium with different replacement ratio was designed and a strain of E.faecium isolated by ourselves was used as fermentation strain.After incubation and counting，lowcost medium suitable for the growth of the strain was screened out.[Result]The result showed that the lowcost medium，in which corn and soybean meal were used as carbon and nitrogen source，were suitable for the growth of E.faecium.Considering the price and the effect of culture，the substituting medium MRSC50N100 with 50% alternative carbon source and 100% alternative nitrogen source was selected as a lowcost medium and suitable for industrial fermentation of E.faecium.[Conclusion]MRSC50N100 can greatly reduce the fermentation cost of E.faecium，and enable to reach the viable count required by probiotics.It can be used in industrial production of microencapsulated E.faecium.

Key words Enterococcus faecium；MRS；Lowcost medium；Stuff

基金項(xiàng)目 福建省科技計(jì)劃項(xiàng)目（2017R1019-2，2017R1019-7，2018R1019-4）；福建省農(nóng)科院科技創(chuàng)新項(xiàng)目（A2017-23，PC2017-6）；福建省特種水產(chǎn)配合飼料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開發(fā)課題（TMKJZ1705）；鰻鱺現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)技術(shù)教育部工程研究中心開放基金（RE201802）。

作者簡介 李英英（1987—），女，河南淅川人，研究實(shí)習(xí)員，碩士，從事動(dòng)物營養(yǎng)與免疫研究。*通訊作者，研究員，從事動(dòng)物營養(yǎng)和免疫研究。

收稿日期 2018-06-29；修回日期 2018-07-19

乳酸菌是動(dòng)物腸道內(nèi)的主要益生菌，具有促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收[1]，維持腸道內(nèi)微生態(tài)平衡[2]，增強(qiáng)機(jī)體免疫力[3]，提高生產(chǎn)性能[4]等作用。為解決畜牧行業(yè)中抗生素濫用引發(fā)的藥殘和耐藥性問題，在動(dòng)物日糧中添加乳酸菌制劑等抗生素替代物已經(jīng)成為很多人的選擇[5]。屎腸球菌是乳酸菌中抗逆性較強(qiáng)的一類菌[6]，培養(yǎng)和保存條件都較為容易，是制作乳酸菌微膠囊制劑時(shí)的首選菌種[7]。在前期研究中，我們已經(jīng)篩選到一株抗逆性較強(qiáng)的豬源屎腸球菌，通過噴霧干燥工藝制備成屎腸球菌微膠囊制劑，并且對(duì)制成的屎腸球菌微膠囊制劑進(jìn)行了高溫耐受性、耐酸性、腸溶性、穩(wěn)定性和動(dòng)物田間小規(guī)模試驗(yàn)，證明該屎腸球菌微膠囊制劑對(duì)高溫、胃液、腸液均有較好的耐受性，并且可顯著提高斷乳仔豬生產(chǎn)性能[4]。但是前期培養(yǎng)屎腸球菌使用的MRS培養(yǎng)基中氮源物質(zhì)是蛋白胨、牛肉膏和酵母膏，價(jià)格昂貴，造成屎腸球菌微膠囊制劑生產(chǎn)成本過高，難以推廣。

豆粕是動(dòng)物飼料配方中最主要的氮源物質(zhì)，與MRS培養(yǎng)基中的氮源物質(zhì)（蛋白胨、酵母膏和牛肉膏）相比，豆粕價(jià)格低廉且易得[8]。若用豆粕替代MRS培養(yǎng)基中的蛋白胨、酵母膏和牛肉膏，可大幅度降低屎腸球菌微膠囊制劑的生產(chǎn)成本。而玉米是動(dòng)物全價(jià)飼料中的碳源物質(zhì)[9]，與培養(yǎng)基中原有的碳源（葡萄糖）相比，價(jià)格更低且來源穩(wěn)定更易獲得。用豆粕和玉米作為培養(yǎng)基中的氮源和碳源，可以降低成本，有利于屎腸球菌微膠囊制劑的工業(yè)化生產(chǎn)。本研究擬用豆粕和玉米部分或者全部替代MRS基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的氮源和碳源成分，制成MRS替代培養(yǎng)基；再用前期分離得到的屎腸球菌作為菌株，進(jìn)行培養(yǎng)計(jì)數(shù)，最后結(jié)合價(jià)格，篩選出高效、價(jià)廉的MRS廉價(jià)培養(yǎng)基，為屎腸球菌微膠囊制劑在飼料和養(yǎng)殖行業(yè)中的推廣奠定基礎(chǔ)。

4 結(jié)論

該研究用飼料原料中的玉米和豆粕替代MRS基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的碳源和氮源，經(jīng)過培養(yǎng)和計(jì)數(shù)，證明二者作為氮源和碳源制成的替代培養(yǎng)基適合屎腸球菌生長。

進(jìn)一步試驗(yàn)中，從營養(yǎng)和價(jià)格兩個(gè)方面綜合考慮，篩選適合進(jìn)行工業(yè)化發(fā)酵屎腸球菌的MRS廉價(jià)培養(yǎng)基，最終確定了碳源替代比例為50%；而氮源方面，當(dāng)替代量達(dá)到100%時(shí)培養(yǎng)基的價(jià)格可大幅度降低，而活菌得率僅會(huì)略有下降，仍可達(dá)到益生菌制劑要求的有效活菌量。因此，選擇MRS-C50N100替代培養(yǎng)基進(jìn)行屎腸球菌發(fā)酵，在保證活菌得率的情況下，可以極大降低乳酸菌制劑的制作成本，有利于屎腸球菌微膠囊制劑的工業(yè)化生產(chǎn)和其在養(yǎng)殖行業(yè)的推廣應(yīng)用。

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