周意，盧金清，孟佳敏，肖宇碩

(湖北中醫(yī)藥大學(xué)/湖北省藥用植物研發(fā)中心，湖北 武漢 430065)

白蘞為葡萄科植物白蘞Ampelopsisjaponica(Thunb.)Makino的干燥塊根，又名白根、山地瓜、野紅薯、山葡萄秧、五爪藤等。白蘞入藥歷史悠久，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，歸為下品，具有清熱解毒、消癰散結(jié)、斂瘡生肌等功能；臨床用于癰疽發(fā)背、疔瘡、瘰疬、燒燙傷等[1]。在臨床上白蘞多以生品入藥，也有炒黃入藥。臨床經(jīng)驗(yàn)表明[2-3]，白蘞經(jīng)炒黃后用以治療手足皸裂及癤腫，療效較好，然而2015年版《中華人民共和國藥典》并未收載其炒黃品，因此，對(duì)白蘞炮炙品的物質(zhì)基礎(chǔ)研究十分必要。迄今為止，國內(nèi)外文獻(xiàn)中并無有關(guān)運(yùn)用頂空固相微萃取法結(jié)合氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)白蘞揮發(fā)性成分進(jìn)行分析的研究報(bào)道，也無對(duì)白蘞生品及其炮炙品進(jìn)行對(duì)比分析的研究報(bào)道。故本研究首次采用頂空固相微萃取法結(jié)合氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)白蘞生品及其炮炙品中的揮發(fā)性成分進(jìn)行分析和比較，探討白蘞在炮炙前后揮發(fā)性成分的變化，旨在從揮發(fā)性成分的角度為臨床合理應(yīng)用白蘞提供參考。

1 儀器和藥材

1.1 儀器

手動(dòng)固相微萃取進(jìn)樣裝置(德國 IKA公司)；Agilent6890/5973型氣相-質(zhì)譜-計(jì)算機(jī)聯(lián)用儀(美國Hewlett-Packard公司)；頂空瓶(15 mL)；65 μm 聚二甲基硅氧烷-二乙烯基苯(PDMS/DVB)；萃取纖維頭(美國 Supelco 公司)；ALC-210.2 型電子天平(北京賽多利斯天平有限公司，d=0.01 g)。

1.2 藥材

白蘞藥材購于保定市保康大藥店，經(jīng)湖北中醫(yī)藥大學(xué)鑒定教研室鑒定為葡萄科植物白蘞Ampelopsisjaponica(Thunb.)Makino的干燥塊根。

2 方法

2.1 炒黃品的制備

參照2015版《中華人民共和國藥典》四部0213炮制通則中的炮制方法：取100 g白蘞生品，置炒制容器內(nèi)，用文火加熱，并不斷翻動(dòng)，使藥物表面呈黃色或顏色加深，取出，放涼。

2.2 GC-MS色譜與質(zhì)譜條件

2.2.1 GC條件 色譜柱：HP-5MS石英毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)；升溫程序：從50 ℃開始，以8 ℃·min-1升溫至90 ℃，再以1 ℃·min-1升溫至100 ℃，然后以15 ℃·min-1升溫至190 ℃，最后以10 ℃·min-1升溫至230 ℃，保留3 min；載氣：高純度He(99.999%)；柱流速：0.8 mL·min-1；進(jìn)樣口溫度：230 ℃；

2.2.2 MS條件 EI 源；離子源溫度230 ℃，電離電壓70 eV；四級(jí)桿溫度150 ℃；掃描質(zhì)量范圍35～550 m/z。

2.3 頂空固相微萃取條件

綜合考察確定頂空固相微萃取的最佳條件：白蘞樣品1.5 g，置于15 mL頂空瓶中，插入裝有65 μm PDMS/DVB萃取纖維頭的手動(dòng)進(jìn)樣器，在120 ℃下平衡15 min后，再壓縮手柄伸出萃取頭萃取20 min，取出，立即插入氣相色譜儀進(jìn)樣口(溫度230 ℃)解析3 min，不分流進(jìn)樣。炒黃品實(shí)驗(yàn)條件同上。

3 結(jié)果

經(jīng)化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理及用面積歸一化法從各總離子流圖中計(jì)算各組分相對(duì)百分含量，按各峰的質(zhì)譜圖經(jīng)NIST質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫檢索，并結(jié)合相對(duì)保留時(shí)間，確定各個(gè)組分。從生品中分離出41種成分，并鑒定出26種成分，占揮發(fā)性成分總量的60.81%。從炒黃品中分離出24種成分，并鑒定出20種成分，占揮發(fā)性成分總量的89.69%。具體結(jié)果見圖1～2及表1。

圖1 HS-SPME-GC-MS聯(lián)用分析白蘞生品揮發(fā)性成分總離子流圖

圖2 HS-SPME-GC-MS聯(lián)用分析白蘞炒黃品揮發(fā)性成分總離子流圖

峰號(hào)保留時(shí)間/min化合物名稱分子式質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)生品炒黃品12 98己醛HexanalC6H12O0 95—23 44糠醛FurfuralC5H4O2—4 9334 34庚醛HeptanalC7H14O1 28—44 712，3?二甲基?環(huán)己?1，3?二烯2，3?Dimethyl?cyclohexa?1，3?dieneC8H12—0 854 84左旋?α?蒎烯1S? alpha ?PineneC10H16—1 6464 89α?蒎烯 alpha ?PineneC10H162 61—

表1(續(xù))

注：“—”表示成分不存在。

4 討論

本研究結(jié)果表明，白蘞生品經(jīng)炮炙后其揮發(fā)性成分組成和含量均發(fā)生了一定程度的變化。白蘞生品中鑒定出26種成分，占揮發(fā)性成分總量的60.81%；炒黃品中鑒定出20種成分，占揮發(fā)性成分總量的89.69%。生品中揮發(fā)性成分含量最高的為壬醛，占揮發(fā)性成分的7.75%，其次主要為1-石竹烯(5.94%)、1-(5-三氟甲基-2-吡啶基)-4-(1H-吡咯-1-基)-哌啶(4.12%)、癸醛(3.56%)、3-甲基-十四烷(3.41%)、2，6-二甲基-7-辛烯-2-醇(3.02%)、α-蒎烯(2.61%)、樟腦(2.53%)、薄荷醇(2.48%)、茴香腦(2.48%)。炒黃品中揮發(fā)性成分含量最高的為偽檸檬烯，占揮發(fā)性成分的19.36%，其次主要為鄰苯二甲酸單(2-乙基己基)酯(7.8%)、3-蒈烯(7.63%)、莰烯(6.7%)、β-蒎烯(6.08%)、α-水芹烯(5.34%)、糠醛(4.93%)、3-乙基-2，5-二甲基-吡嗪(4.42%)、乙酸-1，7，7-三甲基-雙環(huán)[2.2.1]庚-2-基酯(4.38%)、羅勒烯(4.12%)。白蘞炮炙前后的共有揮發(fā)性成分有4種，分別為壬醛、正十三烷、ALPHA-蒎烯、1-石竹烯，其中，白蘞經(jīng)炒黃后壬醛和1-石竹烯的含量明顯減少，正十三烷的含量明顯增多，而ALPHA-蒎烯的含量基本不變。與白蘞生品相比，炒黃品中新增了16種成分，減少了23種成分，在炒黃品中未檢測(cè)到醇類成分，且醛類成分的含量也相對(duì)減少，而烯類成分的含量明顯增多，這可能是由于醛醇類成分加熱分解轉(zhuǎn)變成烯類成分。

白蘞生品中的特有成分薄荷醇、樟腦、茴香腦、丁香酚、松油醇和草蒿腦是中草藥植物中的重要活性物質(zhì)。薄荷醇是一種飽和環(huán)萜醇。研究表明，薄荷醇具有廣泛的藥理活性，如抗炎止痛、清涼止癢、抗真菌、胃腸道保護(hù)、抗腫瘤等[4]；樟腦具有興奮、強(qiáng)心、消炎、鎮(zhèn)痛、抗炎、止咳、促滲等藥理作用[5]；茴香腦(Anethole，簡稱AN)又名茴香醚，在腫瘤、皮膚損傷、肝損傷等方面均有抗炎作用，對(duì)缺血性腦卒中具有神經(jīng)保護(hù)和血腦屏障保護(hù)作用[6]；丁香酚為一種有機(jī)酚，主要存在于丁香油、樟腦油、肉桂葉油、肉豆蔻油中，研究表明，丁香酚具有鎮(zhèn)痛、麻醉、抗氧化、抗菌、抗癌、抗蟲活性[7]；松油醇又名梧桐油、松節(jié)油萜醇，天然存在于松樹油、雜熏衣草油、伽羅木油、橙葉油、橙花油等精油中，研究表明，松油醇對(duì)大腸桿菌有明顯的抑制作用[8]；草蒿腦是一種重要的香料，研究表明，草蒿腦具有較強(qiáng)的抗抑郁、殺菌、退熱等多種藥理活性[9]。然而，炒黃品中并未檢測(cè)到這些活性成分，故從揮發(fā)性成分的角度考慮，白蘞生品“清熱解毒”作用優(yōu)于其炒黃品，故臨床上多以生品入藥，炒白蘞降低藥性，藥效緩和。通過對(duì)白蘞生品及其炮炙品中的揮發(fā)性成分進(jìn)行對(duì)比分析，可為臨床合理應(yīng)用白蘞提供參考。

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