S1-1 The Critical Role of IL-10 in the Anti-neuroinflammatory and Anti-oxidative Effects of Rheum Tanguticum on Activated Microglia

MENG Jie1，NI Jun-jun1，WU Zhou1，2，ZHU Ai-qin3，QING Hong4，Hiroshi Nakanishi1

1. Department of Aging Science and Pharmacology，F(xiàn)aculty of Dental Sciences，Kyushu University，F(xiàn)ukuoka，812-8582，Japan

2. OBT Research Center，F(xiàn)aculty of Dental Sciences，Kyushu University，F(xiàn)ukuoka，812-8582，Japan

3. Institution of Geriatric Qinghai Provincial Hospital，Xining，810007，China

4. School of Life Science，Beijing Institute of Technology，Haidian District，Beijing，100081，China

-assay，respectively. The mean levels of IL-1 β and NO2-/NO3

-signi fi cantly increased in the culture medium of MG6 cells at 24 h after treatment with CGA. Rt also signi fi cantly decreased the mean levels of IL-1 β and NO2-/NO3

-in the culture medium of MG6 cells. The mean protein level of IL-1 β signi fi cantly increased in the organotypic hippocampal slice cultures at 48 h after stimulation with CGA （10 nmol·L-1）. Rt signi fi cantly suppressed the mean protein level of IL-1β in CGA-stimulated organotypic hippocampal slice cultures ②The neutralization of IL-10 restored the mean mRNA expression of TNF-α and IL-1 β in CGA-stimulated MG6 cells in the presence of Rt. ③Among the major components of Rt，three components namely，aloe-emodin （10 μmol·L-1），（+）-cathechin （30 μmol·L-1） and piceatannol （100 μmol·L-1），were found to signi fi cantly increase the mRNA expression of IL-10 in MG6 cells at 24 h after treatment. In contrast，chrisophanol，physcion，β-sitosterol or emodin at concentrations up to 100 μmol·L-1had no effect on the mRNA expression of IL-10 in MG6 cells.Conclusion：Rt suppressed the production of pro-in fl ammatory and oxidative mediators，including IL-1 β，TNF-α and NO，by cultured activated microglia through the production of IL-10. Two components of Rt，aloe-emodin and （+）-catechin，induced the secretion of IL-10 from cultured microglia. Therefore，aloe-emodin and （+）-catechin are deemed responsible for the antineuroin fl ammatory and anti-oxidative effects of Rt through the secretion of IL-10 from microglia.

Address：812-8582 Department of aging science and pharmacology，F(xiàn)aculty of dental science，3-1-1，Mayidashi，Higashiku，F(xiàn)ukuoka，Japan.

E-mail：mjdejiejie@gmail.com

Tel：+81-80 91065608

S1-2 Increased Expression and Altered Subcellular Distribution of Cathepsin B in Microglia Induces Cognitive Impairment through Oxidative Stress and Inflammatory Response in Mice

NI Jun-jun1，WU Zhou1，Veronika Stoka2，Christoph Peters3，QING Hong4，Vito Turk，2Hiroshi Nakanishi1

1. Department of Aging Science and Pharmacology，F(xiàn)aculty of Dental Science，Kyushu University，F(xiàn)ukuoka，812-8582，Japan

2. Department of Biochemistry and Molecular and Structural Biology，J. Stefan Institute，Jamova 39，Sl-1000 Ljubljana，Slovenia

3. Institute für Molekulare Medizin und Zellforshung，Albert-Ludwigs-Universit?t Freiburg，F(xiàn)reiburg，D-79104，Germany

4. Beijing Key Laboratory of Separation and Analysis in Biomedical and Pharmaceuticals，Department of Biomedical Engineering，School of Life Science，Beijing Institute of Technology，Beijing，China

Address：812-8582 Department of aging science and pharmacology，F(xiàn)aculty of dental science，3-1-1，Mayidashi，Higashiku，F(xiàn)ukuoka，Japan.

E-mail：nijunjun@dent.kyushu-u.ac.jp

Tel：81-8033674658

S1-3 A Novel Mechanism Underlying the Protective Effect of PDE4 Inhibitor Against Cognitive Impairment：Inhibiting Neuroinflammation through Inducing Autophagy in Microglial Cells

YOU Ting-ting，CHENG Yu-fang，GUO Hai-biao，WANG Hai-tao，XU Jiang-ping

Department of Neuropharmacology and Drug Discovery，School of Pharmaceutical Sciences，Southern Medical University，Guangzhou 510515，China

This work was supported by National Natural Science Fund of China （No. 81773698，81503043）Corresponding author：XU Jiang-ping，Email：jpx@smu.edu.cn

S1-4 Preventive Effect of Genetic Knockdown and Pharmacological Blockade of CysLT1R on Lipopolysaccharide（LPS）-induced Memory Deficit and Neurotoxicity in vivo

CHEN Fang，Arijit Ghosh，TANG Su-su，HONG Hao

Department of Pharmacology，Key Laboratory of Neuropsychiatric Diseases，China Pharmaceutical University，Nanjing，210009，China

S1-5 KAE Alleviates LPS-induced Neuroinflammation in the Striatum of Mice via Down-regulating TLR4/MyD88 Signaling Pathway

YANG Ying-Lin，CHENG Xiao，LI Wei-Han，LIU Man，WANG Yue-Hua，DU Guan-Hua

Beijing Key Laboratory of Drug Target Identi fi cation and Drug Screening，Institute of Materia Medica，Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College，Beijing，100050，China

S1-6 二苯乙烯苷對APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠學習記憶及突觸可塑性的影響

黃 蕊 楊翠翠 張 蘭

首都醫(yī)科大學宣武醫(yī)院藥物研究室，北京，100053，中國

目的：本 文 主 要 探 討 2，3，5，4’-四 羥 基 二 苯 乙 烯 -2-O-β-D-葡 萄 糖 苷（2，3，5，4’-tetrahydroxystibane-2-O-β-D-glucoside，TSG）的長期干預對APP/PS1擬阿爾茨海默病 （Alzheimer’s disease，AD）動物模型學習記憶以及突觸可塑性的影響。方法：5月齡APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠112只，隨機分為7組：正常對照組（同窩陰性鼠），正常對照+TSG高劑量（100 mg·kg-1）組，模型組，模型 +TSG 低劑量（50 mg·kg-1）組，模型 +TSG 高劑量（100 mg·kg-1）組，模型 + 多奈哌齊（1 mg·kg-1）組，模型+美金剛（5 mg·kg-1）組，每組16只，雌雄各半。對照組和模型組灌胃給予蒸餾水，其余各組灌胃給予相應劑量的藥物，每日給藥1次，灌胃給藥7個月至12月齡后采用Morris水迷宮和新物體識別行為學方法觀察灌胃給予TSG對小鼠學習記憶能力的影響。行為學之后急性分離小鼠海馬腦片（選取4組：正常對照組，模型組，模型+TSG低劑量（50 mg·kg-1）組，模型+多奈哌齊（1 mg·kg-1）組，每組記錄6個數(shù)據(jù)），采用細胞外場電位記錄的方法記錄海馬腦片興奮性突觸后電位（EPSP）的斜率，并與基礎對照的EPSP斜率相比，計算相應的百分比作為小鼠海馬CA1區(qū)突觸長時程增強（long-term potentiation，LTP）的數(shù)值，進而觀察TSG對小鼠海馬CA1區(qū)突觸可塑性的影響。結(jié)果：①Morris水迷宮行為學結(jié)果顯示，與正常對照組相比，模型組小鼠逃避潛伏期明顯延長（P＜0.001），TSG低劑量和高劑量均可明顯縮短模型小鼠逃避潛伏期（P＜0.05）。②新物體識別結(jié)果顯示，與正常對照組相比，模型組小鼠識別指數(shù)明顯降低（P＜0.05），TSG低劑量和高劑量均可明顯增加模型小鼠的識別指數(shù)（P＜0.01）；③LTP 結(jié)果顯示，與正常對照組相比，模型組小鼠LTP值顯著減少，TSG低劑量組對模型小鼠LTP有顯著增強作用（P＜0.01）。結(jié)論：二苯乙烯苷能夠改善APP/PS1小鼠的認知與學習記憶，且能提高其突觸可塑性。

二苯乙烯苷；阿爾茨海默?。恍袨閷W；LTP

S1-7 復方丹參片對老年癡呆癥合并焦慮障礙的研究

郭海彪 徐科一 林娟 王德勤 覃仁安

廣州白云山和記黃埔中藥有限公司，廣州，510515，中國

目的：探討復方丹參片對老年癡呆癥合并焦慮障礙的作用及機制。方法：4月齡野生型小鼠和APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠分別灌胃給予溶劑或復方丹參片60天后，采用Morris水迷宮實驗、新物體識別實驗、新奇抑制攝食實驗和高架十字迷宮實驗評價復方丹參片對APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠學習記憶功能和焦慮樣行為的影響；應用ELISA檢測小鼠海馬淀粉樣蛋白A β40、A β42、γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid，GABA）和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF）的含量；Real time PCR和Western Blot分別檢測IDE/NEP的mRNA和蛋白水平變化。結(jié)果：復方丹參片720 mg·kg-1明顯短縮小鼠在水迷宮實驗中找到平臺的潛伏期，360 mg·kg-1和720 mg·kg-1明顯增加小鼠原有平臺象限的探索時間；復方丹參片720 mg·kg-1可顯著性增加APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠對新物體的識別指數(shù)；復方丹參片360 mg·kg-1、720 mg·kg-1顯著性增加APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠在高架十字迷宮中開臂的時間百分比和進入開臂的次數(shù)；復方丹參片360 mg·kg-1、720 mg·kg-1顯著性縮短APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠攝食潛伏期；復方丹參片360 mg·kg-1、720 mg·kg-1顯著性降低APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠海馬A β40、A β42的濃度和增加GABA和BDNF含量；復方丹參片720 mg·kg-1顯著性上調(diào)APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠海馬IDE、NEP mRNA的表達；復方丹參片720 mg·kg-1顯著性增加小鼠海馬IDE蛋白表達。結(jié)論：復方丹參片改善APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠的學習記憶損傷和焦慮樣行為，可能與增加腦組織GABA和BDNF含量、IDE的蛋白表達及降低A β40、A β42水平有關。

復方丹參片；老年癡呆癥；焦慮；γ-氨基丁酸；淀粉樣蛋白

S1-8 文冠果殼苷對APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠突觸可塑性的作用及其機制研究

劉 鵬 朱 琳 紀雪飛 遲天燕 鄒莉波

沈陽藥科大學，生命科學與生物制藥學院，沈陽，110016，中國

目的：阿爾茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）被認為是突觸相關的一類疾病，因此又把它叫做突觸失效，最終導致中樞神經(jīng)系統(tǒng)網(wǎng)絡聯(lián)系受損，認知功能及記憶能力的下降。神經(jīng)元的損傷和異常信號轉(zhuǎn)導是神經(jīng)退行性疾病的關鍵性指標。因此，改善突觸結(jié)構和功能障礙是改善認知缺陷和阻止阿爾茨海默病發(fā)展的一個重要目標。文冠果殼苷是從文冠果果殼中提取的一種三萜皂苷類化合物，前期研究發(fā)現(xiàn)其對多種AD模型動物的學習記憶障礙具有顯著的改善作用，并可增加海馬突觸素及PSD95蛋白表達，提示文冠果殼苷可能具有保護突觸或提高突觸可塑性的作用。方法：本實驗通過對行為學、透射電鏡、Golgi-Cox染色、免疫組化、電生理和突觸相關蛋白表達的考察，驗證文冠果殼苷對APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠學習記憶障礙的改善作用及對突觸結(jié)構和功能可塑性的影響。結(jié)果：Morris水迷宮結(jié)果表明，與APP/PS1小鼠相比，文冠果殼苷可以顯著縮短逃避潛伏期，提高穿臺次數(shù)；Y迷宮結(jié)果表明，文冠果殼苷可以顯著提高APP/PS1小鼠的自發(fā)交替反應率；提示文冠果殼苷可以改善APP/PS1小鼠的空間記憶和工作記憶障礙。透射電鏡結(jié)果表明，與APP/PS1小鼠相比，給予文冠果殼苷后CA1區(qū)突觸間隙清晰可見，突觸前區(qū)內(nèi)有較多的突觸小泡，突觸前后膜清晰均勻；Golgi-Cox染色結(jié)果表明，文冠果殼苷可以顯著改善APP/PS1小鼠海馬樹突棘密度降低；文冠果殼苷可以對抗A β25-35導致的原代海馬神經(jīng)元樹突長度降低及多級樹突分枝減少；提高APP/PS1小鼠突觸結(jié)構可塑性相關蛋白（BDNF-TrkB通路相關蛋白）的表達；提示文冠果殼苷對突觸結(jié)構具有保護作用。電生理實驗結(jié)果表明，文冠果殼苷可以顯著改善APP/PS1小鼠LTP降低；CamKⅡ和GluR1蛋白的表達對于LTP的維持至關重要，Western Blot結(jié)果表明，文冠果殼苷可以顯著提高APP/PS1小鼠海馬突觸上和突觸外p-CamKⅡ蛋白的表達，促進突觸上GluR1蛋白的磷酸化；提示文冠果殼苷對APP/PS1小鼠突觸功能可塑性具有保護作用。結(jié)論：文冠果殼苷對APP/PS1小鼠的學習記憶障礙具有顯著改善作用。其機制可能與調(diào)節(jié)突觸結(jié)構相關蛋白BDNF-TrkB及功能維持相關蛋白CamKⅡ-GluR1，進而提高海馬突觸結(jié)構和功能可塑性有關。

S1-9 沉默信息調(diào)節(jié)因子1對抗APP高表達轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織及β-淀粉樣肽寡聚體處理的原代培養(yǎng)神經(jīng)元中氧化應激水平升高的作用

董陽婷1，2曹 坤1，2向 潔1，2徐 毅1，3譚龍春2，3王曉玲2，3齊曉嵐2，3肖 雁2，3官志忠1，2，3

1. 貴州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院病理科，貴陽，550004，中國

2. 地方病與少數(shù)民族疾病，貴州醫(yī)科大學教育部重點實驗室，貴陽，550004，中國

3. 貴州省分子生物重點實驗室，貴陽，550004，中國

目的：由于氧化應激水平升高是阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）的可能性發(fā)病機制之一，而沉默信息調(diào)節(jié)因子1（silent information regulator 1，SIRT1）的功能與抗氧化有關，本文試圖了解SIRT1是否能對抗β-淀粉樣肽前體蛋白（APP）高表達的小鼠大腦或經(jīng)β-淀粉樣肽寡聚體（A β Os）處理的神經(jīng)元中氧化應激水平的升高。方法：APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因種鼠與野生型（WT）雌鼠合籠繁殖，篩選出APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠，分別飼養(yǎng)至4月齡或8月齡時，用白藜蘆醇（RSV，SIRT1激活劑）或蘇拉明（SIRT1抑制劑）通過灌胃方法處理轉(zhuǎn)基因小鼠，每次20 mg·kg-1體重/天，時間 2 個月；采用原代海馬神經(jīng)元培養(yǎng)，用 0.5 μmol·L-1A β Os處理 48 小時后分別用 20 μmol·L-1RSV或300 mg·mL-1蘇拉明處理細胞24小時。采用CCK-8方法檢測細胞存活率，篩選最佳藥物處理濃度；用蛋白印記及實時定量PCR方法分別檢測SIRT1蛋白和mRNA表達水平；用免疫組織化學方法檢測APP高表達轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織內(nèi)老年斑分布情況；用激光共聚焦顯微鏡及流式細胞術檢測原代海馬神經(jīng)元中活性氧（ROS）水平；用生物化學方法檢測小鼠腦組織及細胞中OH-、H2O2、O2.-水平，丙二醛（MDA）含量，以及超氧化物歧化酶（SOD），谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性。結(jié)果：與WT小鼠或未經(jīng)處理的原代神經(jīng)元相比，APP/PS1小鼠大腦或經(jīng)A β Os處理的神經(jīng)元中SIRT1的表達顯著降低；小鼠腦組織中老年斑數(shù)量明顯增加；腦組織及培養(yǎng)神經(jīng)元中氧化應激水平明顯升高，抗氧化酶水平明顯降低。APP/PS1小鼠大腦或經(jīng)A β Os處理的神經(jīng)元中這些異常改變可通過RSV處理后減弱，而用蘇拉明處理后則使其增強。結(jié)論：SIRT1可以降低APP高表達小鼠大腦及經(jīng)A β Os處理的神經(jīng)元中的氧化應激水平，具有神經(jīng)保護作用。

S1-10 史他汀類藥物對抗β-淀粉樣肽神經(jīng)毒性的非膽固醇依賴性作用機制實驗研究

官志忠1，2，3趙 亮1，2董陽婷1，2曹 坤1，2向 潔1，2徐 毅1，2肖 雁2，3齊曉嵐2，3禹文峰2，3

1. 貴州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院病理科，貴陽，550004，中國

2. 地方病與少數(shù)民族疾病，貴州醫(yī)科大學教育部重點實驗室，貴陽，550004，中國

3. 貴州省分子生物重點實驗室，貴州醫(yī)科大學，貴陽，550004，中國

目的：研究史他汀類藥物通過其非膽固醇依賴性作用對抗β-淀粉樣蛋白（A β）的 過程中β-淀粉樣肽前體蛋白（APP）代謝、尼古丁型乙酰膽堿受體（nAChRs）表達以及絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號轉(zhuǎn)導通路的相互作用關系，探討史他汀類藥物對阿爾茨海默氏?。ˋD）的可能性干預途徑。方法：選擇原代培養(yǎng)神經(jīng)細胞及過表達APP670/671的SHSY-5Y細胞，用史他汀類藥物（包括洛伐他汀、阿托伐他汀、羅蘇伐他汀和辛伐他汀）、A β、nAChR拮抗劑或細胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK）抑制劑分別或合并處理。用生化方法測定細胞存活率、膽固醇含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量；用蛋白印跡法檢測nAChR多種亞單位蛋白表達水平，APP代謝途徑中α分泌型淀粉樣前體蛋白（α APP）、β分泌型淀粉樣前體蛋白（β APP）、β淀粉樣前體蛋白裂解酶1（BACE1）、β淀粉樣前體蛋白裂解酶2（BACE2）及解聚素金屬蛋白酶結(jié)構域蛋白10 （ADAM10）等的蛋白表達水平，MAPK通路中ERK、c-Jun氨基末端激酶（JNK）及p38磷酸化水平；實時熒光定量PCR測定nAChR亞單位mRNA表達水平。結(jié)果：用A β或A β寡聚體處理體外培養(yǎng)神經(jīng)細胞48小時后見細胞存活率下降、SOD的活性降低和MDA含量增高等毒性作用，用史他汀類藥物預處理細胞24小時，均能減輕A β引起的神經(jīng)毒性作用。用洛伐他汀處理培養(yǎng)細胞24小時后，發(fā)現(xiàn)α 7 nAChR蛋白及mRNA表達水平均升高，而α 4、α 3和b β 2未見明顯改變；洛伐他汀處理引起α APP分泌增加、β APP減少、BACE1蛋白表達水平降低、而BACE2和ADAM10增高。洛伐他汀處理亦導致phospho-ERK1/2蛋白表達水平升高，而phospho-JNK和phospho-p38未見明顯改變。聯(lián)合應用洛伐他汀與MAPK/ERK1/2抑制劑U0126或α 7 nAChR拮抗劑MLA處理培養(yǎng)細胞，結(jié)果顯示U0126可以抑制細胞phospho-ERK1/2的磷酸化，降低α 7 nAChR蛋白表達水平，減少α APP的分泌，同時阻斷洛伐他汀引起的MAPK/ERK1/2信號轉(zhuǎn)導通路活化、α 7 nAChR蛋白表達水平升高以及α APP分泌增加等作用；MLA處理神經(jīng)細胞僅能減少α APP的分泌，對其自身的蛋白表達及phospho-ERK1/2的磷酸化均無明顯影響，MLA與洛伐他汀共同處理細胞后僅見洛伐他汀誘導的α APP分泌增加作用被減弱，而MAPK/ERK1/2的活化以及α 7 nAChR蛋白表達水平的上調(diào)均未被減弱。結(jié)論：采用不引起細胞膽固醇水平改變的史他汀類藥物劑量處理培養(yǎng)細胞，能減輕A β引起神經(jīng)細胞毒性作用，引起MAPK/ERK1/2信號轉(zhuǎn)導通路活化、α 7 nAChR蛋白表達水平升高以及α APP分泌增加；其作用機制可能是首先活化phosphor-ERK1/2信號轉(zhuǎn)導通路，該通路的活化刺激α7 nAChR的表達，最終增強APP的非淀粉樣代謝過程，活化α-分泌酶，從而促進α APP的分泌，產(chǎn)生對抗A β的神經(jīng)保護作用。

S1-11 噬菌體展示技術篩選PirB受體拮抗肽及其體外功能研究

李 雨1謝青青1黃依韻2羅煥敏1肖 飛1

1. 暨南大學基礎醫(yī)學院，廣州，510632，中國

2. 暨南大學藥學院，廣州，510632，中國

目的：運用噬菌體展示技術篩選能夠與A β42競爭性結(jié)合其受體PirB的小分子多肽，并驗證其生物學功能，為以PirB受體為靶點的小分子多肽治療阿爾茨海默病提供新的依據(jù)。方法：以PirB受體為目標蛋白，經(jīng)過三輪生物淘選，從Ph.D.-7噬菌體隨機展示肽庫篩選獲得高特異性的單克隆噬菌體，ELISA檢測分析單克隆噬菌體與PirB的結(jié)合能力。提取陽性克隆菌ssDNA，測序翻譯，分析比對陽性序列與A β42的相似度及疏水輪廓，合成候選多肽。采用MTT檢測多肽細胞毒性，利用細胞免疫熒光結(jié)合實驗驗證候選多肽是否和PirB結(jié)合。利用鏈霉素-親和素結(jié)合實驗進一步測量候選肽與PirB的結(jié)合能力，得到解離常數(shù)。采用神經(jīng)元突起損傷模型探究多肽的體外生物活性。Western Bolt檢測PirB下游信號ROCK2，CRMP2，p-CRMP2的表達情況。結(jié)果：三輪生物淘選后獲得29個陽性克隆，結(jié)合ELISA結(jié)果選定11個陽性克隆，提取ssDNA，測序翻譯，體外合成11條候選肽。經(jīng)軟件分析比對后，其中候選肽P11（命名為P2）與PirB高親和力的配體A β42有三個相同的氨基酸，與A β42帶同樣的電荷，具有較高的相似性，更有可能阻斷A β42與受體PirB的結(jié)合。經(jīng)過MTT、免疫熒光結(jié)合實驗及體外神經(jīng)元損傷模型，對11條候選多肽進行篩選驗證發(fā)現(xiàn)P2為目標肽，P2可能阻斷A β42與受體PirB的結(jié)合。MTT結(jié)果表明P2在16 μmol·L-1濃度范圍內(nèi)都不具備生物毒性。免疫熒光結(jié)合實驗表明P2結(jié)合能力強。細胞熒光共定位實驗也表明，P2能夠特異性的與PirB結(jié)合。鏈霉素-親和素結(jié)合實驗表明，P2與受體PirB特異性結(jié)合，解離常數(shù) Kd 為 0.128 μmol·L-1。生物學功能表明，在原代皮質(zhì)神經(jīng)元突起損傷模型中P2可拮抗A β42介導的突起損傷作用，促進神經(jīng)突起的再生。WB結(jié)果表明，P2降低PirB受體下游蛋白 ROCK2，p-CRMP2的表達。結(jié)論：成功的從噬菌體隨機展示肽庫中篩選得到具有生物活性的PirB受體高特異性拮抗肽，命名為P2。P2與受體PirB特異性結(jié)合，解離常數(shù) Kd為 0.128 μmol·L-1，P2能緩解A β42引起的神經(jīng)生長突起抑制作用，促進神經(jīng)突起再生，其分子機制為降低PirB受體下游信號蛋白ROCK2的表達以及CRMP2蛋白的磷酸化。

S1-12 腦心清片對脂多糖誘導的BV-2細胞的抗炎及抗凋亡作用

朱東海 林 娟 郭海彪 李楚源

廣州白云山和記黃埔中藥有限公司，廣州，510515，中國

目的：通過研究腦心清片（NXQ）對脂多糖（LPS）誘導的小膠質(zhì)細胞（BV-2）的炎癥因子及凋亡細胞的表達作用，探討腦心清片對腦卒中的抗炎及抗細胞凋亡的作用。方法：采用LPS誘導的BV-2細胞作為體外神經(jīng)炎癥模型，用腦心清片進行干預，用ELISA檢測促炎因子IL-6、IL-1 β和 TNF-α的含量水平；采用 Western Blot法檢測 IL-6、IL-1 β和 TNF-α、p-Akt、p-Erk、Bax、Bcl-2 的蛋白表達水平。結(jié)果：LPS刺激BV-2細胞24 h之后，IL-6、IL-1 β和TNF-α炎癥因子表達水平明顯升高（P＜0.01），NXQ 預處理后，IL-1 β含量在 10、20 μmol·L-1時相對于 LPS 處理組均有顯著性的差異（P＜0.05，P＜0.05），IL-6、TNF-α含量在 20 μmol·L-1時相對于 LPS 處理組均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；LPS 刺激 BV-2 細胞 24 h 之后，IL-6、IL-1 β和 TNF-α蛋白表達水平明顯升高（P＜0.01），NXQ預處理后，能呈現(xiàn)濃度依賴性的降低這些蛋白的表達水平，并且在10、20 μmol·L-1時相對于LPS處理組均有顯著性的差異（P＜0.05，P＜0.01）；LPS刺激BV-2細胞24 h之后，p-Akt、p-Erk蛋白表達水平明顯降低（P＜0.01），NXQ預處理后，能呈現(xiàn)濃度依賴性的升高這些蛋白的表達水平，并且在 10、20 μmol·L-1時相對于 LPS 處理組均有顯著性的差異（P＜0.01，P＜0.01）；LPS 刺激 BV-2 細胞24 h之后，促凋亡蛋白Bax表達水平明顯升高（P＜0.01），NXQ預處理后，Bax蛋白表達水平下降，并且在20 μmol·L-1時相對于LPS處理組有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。LPS刺激BV-2細胞24 h之后，抗凋亡蛋白Bcl-2表達水平明顯降低（P＜0.01），NXQ預處理后，Bcl-2蛋白表達水平呈現(xiàn)濃度依賴性的升高，并且在 10、20 μmol·L-1時相對于 LPS 處理組均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，P＜0.05）。結(jié)論：腦心清片對脂多糖誘導的小膠質(zhì)細胞產(chǎn)生的炎癥和毒性具有一定的調(diào)節(jié)作用，通過調(diào)節(jié)炎癥因子的表達和激活Akt/Erk通路，具有抗炎和抗細胞凋亡作用，進一步闡明了腦心清片抗腦卒中的作用機理。

腦心清片；腦卒中；小膠質(zhì)細胞；炎癥因子；細胞凋亡

S1-13 α7神經(jīng)型尼古丁受體對突觸功能和鈣信號通路的影響及在阿爾茨海默氏病中的神經(jīng)保護作用機制研究

王曉玲1，2鄧于新1，2官志忠1，2，3齊曉嵐1，2

1. 地方病與少數(shù)民族疾病，貴州醫(yī)科大學教育部重點實驗室，貴陽，550004，中國

2. 貴州省醫(yī)學分子生物學重點實驗室，貴州醫(yī)科大學，貴陽，550004，中國

3. 貴州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院病理科，貴陽，550004，中國

目的：研究β-淀粉樣蛋白 （β-amyloid protein，A β） 的聚集是否會引起突觸形態(tài)及相關蛋白表達水平的變化以及與A β、膽堿能受體及突觸功能密切相關的鈣離子通路是否發(fā)生變化，進一步探討這些改變之間是否具有一定的相關性；研究特異性激動原代海馬神經(jīng)元中的 α7nAChR 對突觸形態(tài)及其相關蛋白、鈣信號通路相關蛋白、Ca2+濃度以及 α7nAChR 對抗 A β 毒性作用的神經(jīng)保護作用機制，為進一步闡明AD 發(fā)病機制提供一定的理論依據(jù)。方法：原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元細胞；實驗細胞分為A組：對照組；B組：α7nAChRs特異性激動劑 PNU-282987 處理組；C 組：A β1-42寡聚體處理組；D組：PNU-282987+ A β1-42寡聚體處理組；采用Real-time PCR 法和蛋白免疫印跡 （Western Blot） 法分別測定各組細胞中突觸相關蛋白Syn、PSD95、SNAP25、DYN1、AP180，鈣信號通路相關蛋白CaM、CaMKⅡ、pCaMKⅡ、CREB、PCREB mRNA 和蛋白表達水平的變化，流式細胞儀檢測神經(jīng)細胞鈣離子水平。結(jié)果：A β1-42寡聚體可引起神經(jīng)元細胞內(nèi)鈣超載，A β1-42寡聚體可減少各組細胞中突觸相關蛋白Syn、PSD95、SNAP25、DYN1、AP180和鈣信號通路相關蛋白CaMKⅡ、pCaMKⅡ、CREB、pCREB mRNA及蛋白表達水平，增加CaM mRNA及蛋白的表達水平；特異性激動海馬神經(jīng)元細胞α7nAChR后神經(jīng)細胞內(nèi)鈣離子水平相對減少，神經(jīng)元細胞中的突觸相關蛋白 Syn、PSD95、SNAP25、DYN1、AP180和鈣信號通路相關蛋白 CaMKⅡ、pCaMKⅡ、CREB、pCREB mRNA及蛋白表達水平升高，且能對抗A β對突觸蛋白及鈣通路相關蛋白的影響。結(jié)論：A β1-42寡聚體對細胞的神經(jīng)毒性能夠損傷突觸功能以及鈣信號通路；α7nAChR可增加突觸相關蛋白的表達以及可能通過激活鈣信號通路來抵抗A β的神經(jīng)毒性發(fā)揮神經(jīng)保護作用。

S1-14 H2S在缺血再灌注損傷中神經(jīng)細胞自噬發(fā)生機制中的作用研究

肖 雁1，2黃 赟1，2劉雨霞1，2田 茂1，2齊曉嵐1，2禹文峰1，2官志忠1，2，3

1. 貴州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院病理科，貴州，550004，中國

2. 地方病與少數(shù)民族疾病，貴州醫(yī)科大學教育部重點實驗室，貴州，550004，中國

3. 貴州省醫(yī)學分子生物學重點實驗室，貴州醫(yī) 科大學，貴州，550004，中國

目的：利用siRNA干擾技術干擾H2S生成的關鍵酶胱硫醚β-合成酶（cystathionine β-synthase，CBS）基因并構建細胞氧糖剝奪再灌注（oxygen-glucose deprivation/reperfusion，OGD/R）模型，探討OGD/R和CBS基因干擾后SH-SY5Y細胞自噬和凋亡情況及相關信號通路變化。方法：構建OGD/R模型，體外模擬缺血再灌注過程，根據(jù)氧糖剝奪和再灌注時間不同共設9組，利用透射電鏡觀察各組細胞OGD/R后細胞內(nèi)自噬小體形成情況，根據(jù)透射電鏡結(jié)果選取氧糖剝奪4 h/再灌注24 h作為后續(xù)實驗的OGD/R模型；脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將針對CBS基因的siRNA轉(zhuǎn)入SH-SY5Y細胞內(nèi)，同時構建OGD/R模型，將細胞分為3個組，分別為CBS干擾組，OGD/R組和CBS干擾+OGD/R組，各組均設相應對照。Real time PCR和蛋白印跡法鑒定CBS基因干擾效率，并檢測各組自噬相關蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1和信號通路中Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR的蛋白表達水平，以及凋亡信號通路中NF-κ Bp65、COX-2 蛋白表達水平；流式細胞術檢測各組細胞凋亡水平。結(jié)果：透射電鏡觀察細胞內(nèi)自噬小體：除正常對照組和氧糖剝奪4 h/再灌注12 h組未觀察到自噬小體外，其余各組均在胞質(zhì)內(nèi)觀察到了較多自噬小體。CBS基因干擾效率達80%。CBS干擾組自噬相關蛋白及相關信號通路蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ，Beclin-1，p-Akt/Akt，p-mTOR/mTOR蛋白表達水平與陰性對照組比較均無統(tǒng)計學差異；OGD/R組與正常對照組比較，OGD/R組LC3Ⅱ/LC3Ⅰ 明顯高于正常對照組， p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR均明顯降低，NF-κ Bp65、COX-2蛋白表達水平均高于正常對照組；CBS干擾+OGD/R組與對照組比較，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ，Beclin-1，p-Akt/Akt，p-mTOR/mTOR均無顯著差異。CBS干擾組細胞凋亡率與陰性對照組比較無統(tǒng)計學差異；與正常對照組比較OGD/R組細胞凋亡率明顯高于正常對照組；CBS干擾+OGD/R組與陰性對照組比較，細胞凋亡率無顯著差異。結(jié)論：OGD/R能夠明顯誘導SH-SY5Y細胞發(fā)生自噬和凋亡，且可能與Akt/mTOR及 NF-κ Bp65/COX-2信號通路相關；CBS基因干擾后對細胞自噬和凋亡均無明顯影響。

H2S；自噬；CBS；p-Akt/Akt；p-mTOR/mTOR；NF-κ Bp65；COX-2

S1-15 硫辛酸抑制AIF介導的非Caspase凋亡通路對多巴胺能神經(jīng)元的保護機制

禹文峰1，2李成朋1，2韓 飛1，2官志忠1，2，3

1. 地方病與少數(shù)民族疾病，貴州醫(yī)科大學教育部重點實驗室，貴陽，550004，中國

2. 貴州省醫(yī)學分子生物學重點實驗室，貴州醫(yī)科大學，貴陽，550004，中國

3. 貴州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院病理科，貴陽，550004，中國

目的：帕金森?。≒arkinson’s disease，PD）最主要的病理變化是中腦黑質(zhì)多巴胺（dopamine，DA）能神經(jīng)元的變性死亡，但其病理機制仍然不清楚。硫辛酸是丙酮酸脫氫酶的輔助因子，具有抗氧化性和線粒體保護功能，對PD具有一定的治療效果。本研究旨在探索硫辛酸是否通過抑制致凋亡因子（apoptosis inducing factor，AIF）介導的非Caspase凋亡通路對多巴胺能神經(jīng)元發(fā)揮神經(jīng)保護功能。方法：6-OHDA誘導建立單側(cè)損毀的PD大鼠模型后，給予硫辛酸干預；通過行為學、NueN和TH免疫染色觀察硫辛酸的保護作用；通過Western Blot、免疫組化、激光共聚焦檢測硫辛酸是否可以抑制AIF介導非Caspase依賴性凋亡通路對DA能神經(jīng)元具有保護作用。6-OHDA誘導PC-12細胞損傷建立PD細胞模型，給予LA干預；通過CCK-8、流式和線粒體膜電位檢測硫辛酸的保護作用；通過Western Blot和激光共聚焦檢測硫辛酸是否可以抑制AIF介導非Caspase依賴性凋亡通路對多巴胺能神經(jīng)元具有保護作用。結(jié)果：在PD模型大鼠上，硫辛酸能夠顯著緩解PD模型大鼠行為學的改變，顯著減緩PD模型大鼠黑質(zhì)區(qū)神經(jīng)元的丟失；同時，硫辛酸也顯著抑制PD模型大鼠黑質(zhì)區(qū)AIF的線粒體釋放和細胞核轉(zhuǎn)移。在PD細胞模型上，硫辛酸能夠抑制6-OHDA誘導的PC12細胞凋亡，顯著抑制6-OHDA誘導的PC12線粒體通透性轉(zhuǎn)變；同時，硫辛酸也顯著抑制PC12細胞模型AIF的線粒體釋放和細胞核轉(zhuǎn)移。結(jié)論：硫辛酸能夠通過抑制AIF介導的非Caspase凋亡通路對多巴胺能神經(jīng)元發(fā)揮神經(jīng)保護功能。

帕金森??；多巴胺能神經(jīng)元；致凋亡因子；細胞凋亡；硫辛酸

S1-16 CIG以PTPA為靶點降低rTg4510轉(zhuǎn)基因小鼠的tau蛋白磷酸化及病理表現(xiàn)的研究

馬登磊 羅 藝 李 林 張 蘭

首都醫(yī)科大學宣武醫(yī)院藥物研究室，神經(jīng)變性病教育部重點實驗室，北京市神經(jīng)藥物工程研究中心，北京，100053，中國

前言：微管相關蛋白tau在阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s Disease，AD）的發(fā)病機制中發(fā)揮重要的作用，并且得到了越來越多的關注。過表達P301L突變tau蛋白的rTg4510轉(zhuǎn)基因小鼠具有明顯的tau病理表現(xiàn)，廣泛應用于AD的基礎研究及藥理研究中。山茱萸環(huán)烯醚萜苷（cornel iridoid glycoside，CIG）為中藥山茱萸的有效成分，在我室之前的研究中顯示CIG在體外模型中可以降低tau蛋白的磷酸化。方法：本研究應用rTg4510小鼠為AD病理模型，給予CIG藥物處理3個月后進行行為學檢測，之后分別灌注固定取材及新鮮取材。應用Western Blot等方法檢測磷酸化tau蛋白、磷酸化調(diào)節(jié)酶、微管及突觸相關蛋白的表達水平；應用免疫熒光等方法觀察病理性tau蛋白、微管的形態(tài)、突觸相關蛋白表達等；應用Serine/Threonine Phosphatase Assay 檢測磷酸酯酶PP2A的活性。結(jié)果：實驗結(jié)果顯示CIG可以增加rTg4510小鼠在Morris水迷宮中的空間和工作記憶，改善在物體識別實驗中的物體識別記憶，降低小鼠的過度活躍狀態(tài)。同時CIG可以改善rTg4510小鼠的腦萎縮，降低海馬區(qū)域的神經(jīng)元的丟失；同時CIG可以增加rTg4510小鼠骨架相關蛋白的表達，改善細胞骨架形態(tài)；增加小鼠突觸NMDA受體及突觸相關蛋白的表達，增加突觸的數(shù)量。其主要的機制為CIG降低了rTg4510小鼠腦內(nèi)多個位點的磷酸化，降低了病理性tau蛋白的沉積；同時降低了磷酸化的可溶性和不可溶性tau蛋白。進一步探討CIG降低磷酸化的機制，發(fā)現(xiàn)CIG對于主要的磷酸激酶GSK-3β的作用不明顯；而CIG可以增加主要的磷酸酯酶PP2A的甲基化修飾，并且可以調(diào)節(jié)PP2A甲基化調(diào)節(jié)酶LCMT-1/PME-1的比例。同時，CIG可以增加內(nèi)源PP2A酶的激活因子PPP2R4的表達，并增加PP2A酶的活性。結(jié)論：CIG可以改善rTg4510轉(zhuǎn)基因小鼠的認知能力，改善腦萎縮和神經(jīng)元的丟失，保護細胞骨架形態(tài)和突觸。其主要機制為CIG降低了tau蛋白的過度磷酸化及病理性tau蛋白的沉積。進一步研究發(fā)現(xiàn)CIG可能通過增加內(nèi)源性PP2A激活劑PPP2R4的表達，進而直接或通過調(diào)節(jié)PP2A的修飾間接地增加PP2A活性。因此本研究提示CIG可能作為一個潛在的以PP2A激活為靶點的抗AD藥物。

S1-17 新化合物DHF-7改善CPZ復合MK-801致精神分裂癥模型小鼠學習記憶能力及腦白質(zhì)病變的機制研究

孫爭宇 張 蘭 李 林

首都醫(yī)科大學宣武醫(yī)院藥物研究室，北京市神經(jīng)藥物工程技術研究中心，神經(jīng)變性病教育部重點實驗室，北京，100053，中國

目的：DHF-7為我室自行設計并合成的新化合物。本研究探討DHF-7改善Cuprizone（CPZ）復合MK-801致精神分裂癥（SZ）模型小鼠學習記憶能力及腦白質(zhì)病變的機制。方法：C57BL/6小鼠用含0.2%的CPZ 混合飼料飼養(yǎng)5周后給予MK-801腹腔注射2周造模。DHF-7灌胃給藥7周。運用Y-迷宮、曠場試驗、新物體識別試驗測試行為學改變；通過免疫組化染色及透射電鏡觀察髓鞘脫失及髓鞘超微結(jié)構變化；Western Blot（WB）檢測胼胝體部位多種因子及受體的蛋白表達。結(jié)果：CPZ+MK-801復合模型組小鼠與正常對照組相比，行為學測試結(jié)果表明：模型組自發(fā)交替反應、分辨指數(shù)下降，出現(xiàn)認知障礙；進臂總次數(shù)、活動總距離增加，出現(xiàn)陽性癥狀；中央?yún)^(qū)活動距離增加，出現(xiàn)陰性癥狀。髓鞘堿性蛋白（MBP）免疫組化染色發(fā)現(xiàn)胼胝體區(qū)域免疫陽性染色變淺；透射電鏡發(fā)現(xiàn)胼胝體部位有髓神經(jīng)纖維分布稀疏，間隙擴大，髓鞘板層分離，厚度變薄，有髓軸突數(shù)目明顯減少，髓鞘脫失明顯。WB檢測發(fā)現(xiàn)：模型組小鼠腦內(nèi)MBP、CNP、BDNF、p-Fyn、p-TrkB、p-NMDAR2B、p-B-Raf、p-MEK1/2及p-ERK1/2 表達含量下降。灌胃給予DHF-7（25、50 mg·kg-1）干預后，模型小鼠自發(fā)交替反應、分辨指數(shù)增高，進臂總次數(shù)減少，活動總距離、中央?yún)^(qū)活動距離減少；MBP免疫組化染色發(fā)現(xiàn)胼胝體區(qū)域免疫陽性染色變深；透射電鏡發(fā)現(xiàn)胼胝體部位有髓神經(jīng)纖維排列緊密，髓鞘厚度增加，未出現(xiàn)板層分離，有髓軸突數(shù)目明顯增加，髓鞘得到修復。WB檢測發(fā)現(xiàn)DHF-7給藥組小鼠腦內(nèi)MBP、CNP、BDNF、p-Fyn、p-TrkB、p-NMDAR2B、p-B-Raf、p-MEK1/2及p-ERK1/2 表達含量升高。結(jié)論：CPZ復合MK-801模型小鼠能夠較全面地反映SZ的認知障礙、陽性癥狀和陰性癥狀，為SZ深入的機制研究提供了較好的動物模型。新化合物DHF-7能夠改善復合模型致SZ小鼠的癥狀，其學習記憶能力及腦白質(zhì)病變的改善可能是通過激活BDNF和p-Fyn、p-TrkB、p-NMDAR2B通路發(fā)揮作用，為SZ的治療提供了新的策略和方法。

S1-18 3，4-二羥基苯甲酸甲酯延緩秀麗線蟲衰老的作用及作用機制研究

米象男1，3胡 陽2潘君平1信怡榕1王嘉惠1高 勤1羅煥敏1，2，3

1. 暨南大學基礎醫(yī)學院藥理學系，廣州，510632，中國

2. 暨南大學醫(yī)學院病理學與病理生理學系，廣州，510632，中國

3. 暨南大學腦科學神經(jīng)藥理研究室，廣州，510632，中國

目的：本實驗室前期工作發(fā)現(xiàn)3，4-二羥基苯甲酸甲酯（methyl 3，4-dihydroxybenzoate，MDHB）具有神經(jīng)保護、抗細胞氧化損傷及延長秀麗線蟲壽命的作用。本論文以秀麗線蟲（Caenorhabditis elegans，C.elegans）為模型動物，研究MDHB給藥前后對秀麗線蟲壽命、應激能力等相關指標的影響，旨在進一步探明MDHB延緩線蟲衰老的作用及相關機制。方法：本文以秀麗線蟲為模型動物測定MDHB對秀麗線蟲壽命、運動能力、生殖能力及抗壓能力的影響。本實驗主要考察了抑菌性、熱量限制途徑和daf-2/daf-16參與的胰島素/胰島素樣生長因子信號通路，通過CRISPR-CAS 9、特定基因突變、熒光顯微鏡分析、熒光酶標儀及Real-Time PCR等方法進一步研究MDHB延緩秀麗線蟲衰老的作用及分子機制。結(jié)果：首先，本論文觀察MDHB對秀麗線蟲壽命的影響，結(jié)果表明160 mg·L-1MDHB能顯著延長野生型秀麗線蟲壽命19%，高于陽性藥白藜蘆醇。此外，MDHB給藥后延長eat-2突變株壽命，對于daf-2和daf-2；daf-16缺失突變體MDHB給藥后抗衰老作用消失，對于daf-16缺失突變株，MDHB給藥后壽命仍延長，但低于MDHB對野生型秀麗線蟲的延壽作用。表明熱量限制并非MDHB抗衰老的首要機制，MDHB可能主要通過daf-2/daf-16參與的胰島素/胰島素樣生長因子通路延緩線蟲衰老。其次，本文考察了壓力脅迫下，MDHB對野生型線蟲和突變株線蟲的影響，MDHB給藥后提高野生型線蟲生存率，對daf-16缺失突變株線蟲無延壽作用；MDHB還能降低線蟲體內(nèi)活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）水平，提高超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性，表明MDHB可提高抗氧化損傷能力從而延長線蟲壽命。最后，Real-Time PCR 結(jié)果顯示 MDHB處理后線蟲體內(nèi)daf-2下調(diào)，daf-16轉(zhuǎn)錄活性上調(diào)；使用GFP融合共表達株線蟲觀察MDHB對daf-16入核狀態(tài)和sod-3及hsp-16.2表達水平的影響，結(jié)果顯示MDHB促進線蟲daf-16入核，影響一系列與壓力應激和壽命相關的生理活動，如活化daf-16靶基因sod-3和hsp-16.2。表明MDHB激活daf-16/FOXO信號通路及其下游靶基因，提高線蟲抗氧化損傷和抗熱壓能力，從而延緩線蟲衰老。結(jié)論：MDHB可能通過調(diào)控daf-2/daf-16參與的胰島素/胰島素樣生長因子通路提高線蟲抗壓能力從而延長秀麗線蟲壽命。

S1-19 磷酸二酯酶5抑制劑淫羊藿次苷II通過BDNF/TrkB/CREB信號通路減輕淀粉樣蛋白25-35片段誘導的大鼠學習記憶減退作用及機制研究

劉 雙1李小慧1高健美2劉遠貴1石京山1龔其海1

1. 遵義醫(yī)學院基礎藥理教育部重點實驗室暨特色民族藥教育部國際合作聯(lián)合實驗室，遵義，563000，中國

2. 遵義醫(yī)學院藥學院臨床藥物治療學教研室，遵義，563000，中國

目的：觀察淫羊藿次苷Ⅱ（icariside Ⅱ，ICS Ⅱ）抗淀粉樣蛋白25-35片段（A β25-35）誘導的大鼠學習記憶減退模型和PC12細胞損傷的作用，并探索其可能的作用機制。方法：60只健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠隨機分為5組：假手術組、模型組、ICS II低劑量組、ICS II高劑量組、陽性藥組，每組12只。模型組大鼠雙側(cè)海馬注射5 μL（2 μg·μL-1）A β25-35誘導大鼠學習記憶減退模型，假手術組大鼠同法注入等體積生理鹽水。造模后開始給藥，給藥組每日分別灌胃ICS II低、高劑量，陽性藥組每日灌胃西地那非，假手術組及模型組灌胃等體積蒸餾水，連續(xù)給藥15天。造模10天后Morris水迷宮檢測大鼠學習記憶功能，連續(xù)5天。行為學檢測結(jié)束后，ELISA法測定海馬PDE 5及cGMP 的含量；采用MTT法和ELISA法分別檢測細胞的活力和細胞死亡情況，通過TUNEL染色檢測細胞凋亡情況，通過流式細胞術和Mito-SOX染色法分別測定細胞內(nèi)和線粒體內(nèi)活性氧含量。通過Westren Blot檢測Bcl-2、Bax、BDNF、TrkB蛋白表達及active-Caspase-3和p-CREB的水平。結(jié)果：模型組較假手術組大鼠的逃避潛伏期明顯延長，象限時間和穿越平臺次數(shù)明顯減少；海馬PDE 5水平增加，cGMP水平降低，BDNF及TrkB蛋白表達明顯降低，其相關調(diào)控信號CREB磷酸化水平明顯降低。然而，ICS Ⅱ高劑量組大鼠逃避潛伏期較模型組顯著縮短，象限時間和穿越平臺次數(shù)明顯增加；海馬PDE 5水平降低，cGMP水平明顯升高。BDNF、TrkB蛋白表達明顯增高，其相關調(diào)控信號CREB磷酸化水平明顯增加。ICS Ⅱ能夠減少A β25-35誘導的PC12細胞氧化損傷，下調(diào)Bax的表達及active-Caspase-3的水平，并 上調(diào)BCl2、BDNF、TrkB蛋白表達和CREB的磷酸化水平。此外，TrkB抑制劑ANA-12可阻斷ICS II對A β25-35誘導的PC12細胞氧化損傷的保護作用。結(jié)論：在本實驗條件下，ICS Ⅱ可明顯減輕A β25-35誘導的大鼠學習記憶減退和PC12細胞凋亡，其機制可能與降低PDE 5和線粒體內(nèi)活性氧的含量及上調(diào)BDNF/TrkB/CREB 信號通路有關。

淫羊藿次苷Ⅱ；磷酸二酯酶5；β-淀粉樣蛋白；腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子；酪氨酸激酶受體B；cAMP反應元件結(jié)合蛋白

S1-20 淫羊藿苷急性毒性試驗研究

牛紅妹

首都醫(yī)科大學宣武醫(yī)院藥物研究室，北京，100032，中國

目的：觀察淫羊藿苷小鼠急性毒性，初步評價其用藥安全性。方法：取健康ICR種小鼠28只，體質(zhì)量18～22 g，隨機分為2組（給藥組，空白組），每組14只，雌雄各半，選用最大給藥量法進行實驗。給藥組按淫羊藿苷可以灌胃的最大給藥濃度（0.36 g·mL-1）及小鼠可承受的最大體積（0.4 mL·10 g-1）灌胃，上下午各一次，空白組羧甲基纖維素鈉（CMC）（0.4 mL·10 g-1）灌胃。灌藥后4 h內(nèi)，每1 h觀察小鼠死亡情況，行為活動，精神狀態(tài)等。連續(xù)觀察14 d，每日稱重，記錄小鼠的毒性反應、死亡情況，并計算各臟器的臟器指數(shù)。結(jié)果：無法得出淫羊藿苷LD50；給藥后連續(xù)觀察14 d，小鼠未見中毒反應，無動物死亡；給藥14 d后解剖小鼠，肉眼未見臟器異常；臟器指數(shù)評價，2組比較無顯著性差異（P＞0.05）。結(jié)論：小鼠灌胃給藥最大給藥量為 28.8 g·kg-1，相當于臨床成人日用量的253.19倍，提示淫羊藿苷口服毒性小，臨床劑量下用藥安全。

S1-21 不同高海拔地區(qū)藏族輕度認知功能障礙和阿爾茨海默患者血清氧化相關酶與血紅蛋白相關研究

李國鋒 鐘 欣 杜 燦 郭祥星 彭 海 朱愛琴

青海省人民醫(yī)院老年醫(yī)學研究所，西寧，810007，中國

目的：探討不同高海拔地區(qū)藏族輕度認知功能障礙（mild cognitive impairment，MCI）和阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）患者血紅蛋白與血清氧化相關酶的變化。方法：選取青海地區(qū)：西寧市（中高海拔地區(qū)，海拔2 260 m）和玉樹市（高海拔地區(qū)，海拔4 000 m）世居藏族MCI和AD患者和藏族健康對照組各30例。采用ELISA法測定血清氧化相關酶：丙二醛（MDA），8-羥基脫氧鳥苷（8-OHdG）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）水平。外周血的紅細胞計數(shù)（RBCs）、紅細胞壓積（HCT）和血紅蛋白（HB）水平采用美國貝克曼全自動血細胞分析儀檢測。結(jié)果：和對照組比較，高海拔地區(qū)MCI組和中、高海拔地區(qū)AD組GSH-PX、8-OHdG和HB水平明顯增加，MDA降低明顯；和中海拔MCI組和AD組比較，高海拔地區(qū)MCI組和AD組RBCs、HCT、HB、GSH-PX和8-OHdG顯著增高。高海拔地區(qū)藏族健康老人8-OHdG也增高明顯。Pearson相關分析發(fā)現(xiàn)高濃度HB與血清MDA和8-OHdG有密切關系。結(jié)論：高海拔地區(qū)的世居藏族老人認知功能減退的早期氧化應激損傷就已經(jīng)出現(xiàn)并隨著海拔和病情嚴重程度而增高。高原地區(qū)MCI和AD患者紅細胞增多與氧化應激反應有一定相關性。

S1-22 Nogo-66調(diào)節(jié)神經(jīng)細胞β淀粉樣蛋白代謝的機制

曹巧玉 黃依韻 謝青青 羅煥敏 肖 飛 鄭 青

暨南大學基礎醫(yī)學院，暨南大學藥學院，廣州，510632，中國

目的：本文重點研究Nogo-66對β淀粉樣蛋白（A β）代謝的調(diào)節(jié)作用及其分子機制，對Nogo-66作用機制進行完善；同時，探討抑Nogo-66作用對延緩和阻止AD進程的影響。方法：①體外培養(yǎng)新生大鼠原代皮質(zhì)神經(jīng)元兩天后，加入不同濃度的Nogo-66處理，觀察細胞形態(tài)及定量分析突起生長狀況。②通過ELISA檢測不同濃度Nogo-66作用原代皮質(zhì)神經(jīng)元后，A β的變化情況。提取新生大鼠原代皮質(zhì)神經(jīng)元后，培養(yǎng)兩天，加入不同濃度的Nogo-66處理，繼續(xù)培養(yǎng)48 h，收集上清培養(yǎng)基，檢測細胞分泌的A β40和A β42含量。③體外培養(yǎng)新生大鼠原代皮質(zhì)神經(jīng)元兩天后，分別加入不同濃度的Nogo-66受體阻斷劑NEP1-40、受體下游信號分子ROCK（rho-associated coiled coil-containing protein kinase）的抑制劑Y-27632預保護1 h后，用終濃度為1 μmol·L-1的Nogo-66處理細胞，繼續(xù)培養(yǎng)48 h，收集上清培養(yǎng)基，檢測細胞分泌的A β40和A β42含量。④體外培養(yǎng)新生大鼠原代皮質(zhì)神經(jīng)元兩天后，用2 μmol·L-1的NEP1-40和100 μmol·L-1的Y-27632進行預保護，采用1 μ mol·L-1的Nogo-66處理細胞造模，Western Blotting檢測Nogo-66下游信號ROCK通路上各相關蛋白的表達及其磷酸化水平。結(jié)果：①形態(tài)學觀測結(jié)果顯示，當濃度為4 μ mol·L-1、16 μmol·L-1時，神經(jīng)元具有明顯損傷。MAP2免疫熒光結(jié)果顯示，Nogo-66能顯著性抑制突起再生，0.25 μmol·L-1、1 μmol·L-1各劑量組皮質(zhì)神經(jīng)元平均突起長度顯著性降低，具有效關系。表明Nogo-66能抑制原代皮質(zhì)神經(jīng)元突起的再生。②ELISA結(jié)果顯示，Nogo-66能促進A β40和A β42含量。其中 0.5 μmol·L-1、1 μmol·L-1的 Nogo-66 能顯著增加原代皮質(zhì)神經(jīng)元培養(yǎng)基中的 A β40和 A β42含量，具有量效關系。③加入Nogo-66受體阻斷劑NEP1-40、ROCK抑制劑Y-27632后，ELISA結(jié)果顯示，與Nogo-66模型組相比，2 μmol·L-1的NEP1-40能拮抗Nogo-66，顯著性降低原代皮質(zhì)神經(jīng)元培養(yǎng)基中的 A β40的含量；50 μmol·L-1、100 μmol·L-1的 Y-27632 能拮抗 Nogo-66，顯著性降低培養(yǎng)基中的A β40和A β42的含量，但量效關系不明顯。篩選出 NEP1-40和Y-27632最佳作用濃度分別為：2 μmol·L-1、100 μmol·L-1。④ELISA 結(jié)果顯示，Nogo-66 模型組（只加 Nogo-66，不加抑制劑）能顯著增加原代皮質(zhì)神經(jīng)元和N2a過表達細胞株（由澳門科技大學饋贈）培養(yǎng)基中A β40和A β42的含量。Nogo-66受體阻斷劑NEP1-40和ROCK抑制劑 Y-27632能拮抗Nogo-66，顯著性降低培養(yǎng)基中的 A β40和 A β42的含量。⑤Western Bolt結(jié)果顯示，0.5 μmol·L-1、1 μmol·L-1的 Nogo-66 能顯著性增加原代皮質(zhì)神經(jīng)元細胞和 N2a過表達細胞株的ROCK2和磷酸化的CRMP2的表達水平，且具有明顯的劑量依賴性。結(jié)論：①Nogo-66能抑制原代皮質(zhì)神經(jīng)元突起再生，且促進皮質(zhì)神經(jīng)元分泌A β40和A β42；②Nogo-66是通過激活Nogo-66受體及下游信號分子ROCK2和p-CRMP2抑制原代皮質(zhì)神經(jīng)元突起再生并促進分泌 A β40和A β42。

S1-23 臨床前期阿爾茨海默?。≒CAD)防治療法及安全性

崔德華 王賀成 肖衛(wèi)忠 樊東升 郭向陽 韓鴻賓

北京大學第三醫(yī)院，北京，100191，中國

背景：阿爾茨海默?。ˋD）是一種與年齡密切相關的神經(jīng)退行性疾病。隨著我國的人口老齡化趨勢加劇，該病的發(fā)病人數(shù)與發(fā)病率也逐年提高。AD 的發(fā)病隱襲，病程長，多中心臨床藥物試驗，因安全性隱患導致失敗。目前臨床前期AD（PCAD）的防治藥物研發(fā)安全性問題更為重要。目的：探究以A β為靶標的口服AD疫苗對于A β清除的相關生物學機制，研究口服AD疫苗能否即安全又能阻止AD病理進展及改善臨床癥狀。方法：口服疫苗研制及試驗方法參照本實驗室及國內(nèi)外合作已發(fā)表論文。結(jié)果：①我們發(fā)現(xiàn)該口服疫苗可以有效地感染HEK293細胞系，并可以使細胞穩(wěn)定的表達A β，具有較好的疫苗活性。在動物實驗中，我們采用 APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠模型，在口服AD疫苗免疫后利用ELISA的方法進行檢測腦組織A β水平，發(fā)現(xiàn)口服疫苗可以顯著地降低A β水平，證明了該口服AD疫苗的有效性。同時我們發(fā)現(xiàn)口服免疫后小鼠的體重無明顯改變，體型、色澤、血常規(guī)等無變化，初步證明了口服AD疫苗對于小鼠的安全性。②我們發(fā)現(xiàn)口服疫苗可以上調(diào)腦組織內(nèi)自噬相關指標LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比例，下調(diào)p62蛋白的水平，提高了LC3和A β的共定位，說明口服AD疫苗免疫后腦內(nèi)自噬功能被上調(diào)；Akt/mTOR信號通路被抑制；同時我們也發(fā)現(xiàn)抗體與補體C1q&C3水平在給予疫苗后顯著上升。這些結(jié)果提示口服疫苗可能通過自噬增強及活化抗體、補體系統(tǒng)促進A β清除。結(jié)論：口服AD疫苗能夠安全有效地促進腦內(nèi)Aβ的清除，其作用機制可能為通過對Akt/mTOR的抑制繼而提高自噬活性，同時口服免疫可以提高抗體以及補體關鍵蛋白水平，促進Aβ清除。在動物體系具有比較好的安全性。我們的研究初步揭示了參與Aβ清除的兩條重要途徑的影響因素及其機制，闡明了口服AD疫苗為臨床早期干預AD提供了新的理論與新途徑（Fig.1，2）。

Fig.1 Schema of the established effects of oral rAAV/Aβ vaccination on Aβ clearance

Fig.2 Oral vaccination is likely to be a safe and effective strategy for early intervention in AD

S1-24 基于LPS誘導小鼠炎癥模型的LW-AFC抗炎作用研究

曾 菊1，2程 斌1，2程肖蕊1，2周文霞1，2張永祥1，2

1. 軍事科學院軍事醫(yī)學研究院毒物藥物研究所，北京，100850，中國

2. 國家抗毒藥物和毒理學重點實驗室，北京 100850，中國

目的：免疫炎癥學說是阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）的重要發(fā)病機制學說之一，為研究中藥五類新藥六味地黃苷糖（LW-AFC）是否可通過抗炎發(fā)揮防治AD的作用，本課題采用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導小鼠炎癥模型，觀察六味地黃苷糖（LW-AFC）對在體小鼠長時程增強（long-term potentiation，LTP）的作用及其可能的機制。方法：灌胃給予雄性BALB/c小鼠LW-AFC兩周，第14 d給藥結(jié)束后30 min腹腔單次注射LPS（250 μg·kg-1），4 h后在體記錄興奮性突觸后電位，其后取血測定外周血淋巴細胞亞群，外周血和腦組織中炎性細胞因子以及腦組織中小膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞激活情況。結(jié)果：腹腔注射LPS 4 h后小鼠海馬DG區(qū)的興奮性突觸后電位降低，即LTP減弱，預防給予LW-AFC可明顯減輕LTP減弱，說明LW-AFC可保護炎癥所致小鼠神經(jīng)突觸可塑性損傷。進而發(fā)現(xiàn)，LW-AFC可顯著提高炎癥模型小鼠脾臟淋巴細胞中CD19+細胞的比例，調(diào)低CD4+/CD3+細胞比例；同時，LW-AFC能明顯升高外周血中CD3+/CD4+細胞比例，降低CD4+/CD3+細胞比例。此外，LW-AFC還可顯著降低炎癥小鼠外周血、海馬和大腦皮層中炎癥相關細胞因子 TNFα、IL-6、IL-1 β、IL-12、INFγ、IL-10、MCP-1 的水平，腦組織中尤其海馬部位炎癥因子下降更為顯著。腦組織切片免疫熒光染色結(jié)果顯示預防給予LW-AFC可明顯抑制小膠質(zhì)細胞的過度激活。結(jié)論：LW-AFC對炎癥所致突觸可塑性受損具有明顯保護作用，其作用可能與調(diào)節(jié)淋巴細胞亞群及抑制炎性細胞因子水平有關，提示LW-AFC可能通過抑制炎癥反應發(fā)揮防治AD作用。

LW-AFC；突觸可塑性；炎癥因子；淋巴細胞亞群

S1-25 基于 快速老化模型小鼠SAMP8的CA-30抗阿爾茨海默病的作用研究

雷 曦1，2王健輝1，2程肖蕊1，2張小銳1，2劉 港1，2周文霞1，2張永祥1，2

1. 軍事科學院軍事醫(yī)學研究院毒物藥物研究所，北京，100850，中國

2. 抗毒藥物與毒理學國家重點實驗室，北京，100850，中國

目的：采用阿爾茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）的動物模型-快速老化模型小鼠SAMP8，研究六味地黃湯活性部位CA-30防治AD的作用及可能機制。方法：應用筑巢試驗觀察小鼠的日?；顒訄?zhí)行能力，微弱光線曠場檢測小鼠的自主活動度，Morris水迷宮實驗和穿梭箱實驗分別觀察CA-30對小鼠空間學習記憶能力和主動回避反應能力的影響；采用放射免疫法和酶聯(lián)免疫吸附法檢測下丘腦-垂體-腎上腺軸（hypothalamic-pituitary-adrenal，HPA）和下丘腦-垂體-性腺軸（hypothalamic-pituitary-gonadal，HPG）中相關激素的水平；采用流式細胞術檢測外周血淋巴細胞亞型、采用液相蛋白芯片技術檢測血漿中細胞因子的含量；采用宏基因組測序方法檢測腸道菌群。結(jié)果：與正常對照組相比，SAMP8的老化度評分顯著升高，自主活動性、筑巢能力、空間學習記憶能力和主動回避反應能力均顯著降低。給予CA-30能夠明顯改善其老化征象，提高其自主活動度、空間學習記憶能力和主動回避反應能力。同時，與正常對照相比，SAMP8的神經(jīng)內(nèi)分泌免疫調(diào)節(jié)（neuroendocrine immunomodulation，NIM）網(wǎng)絡平衡失調(diào)，給予CA-30對其NIM網(wǎng)絡平衡失調(diào)具有調(diào)節(jié)作用，具體表現(xiàn)為：CA-30能夠顯著降低SAMP8小鼠HPG軸中促性腺激素釋放激素（gonadotrophin releasing hormone，GnRH）、黃體生成素（luteinizing hormone，LH）和卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，TSH）的分泌水平，增加外周血中B細胞（CD19+）的表達量，減少抑制性 T 細胞（CD3e+，CD8a+）、調(diào)節(jié)性 T 細胞（CD4+，CD25+）和活化 T 細胞（CD3e+，CD25+）的表達量，此外，CA-30還能糾正抗炎細胞因子IL-4、IL-5水平的降低，從而改善SAMP8免疫功能低下的狀態(tài)。與正常對照相比，SAMP8的菌群物種豐度在門、綱、目、科、屬、種水平上均存在顯著差異，CA-30能夠顯著改善SAMP8在5個層級水平上的菌群物種紊亂，調(diào)節(jié)百分比分別為：門12.5%、綱28.6%、目25%、科27.8%、屬13.8%，提示給予CA-30能夠改善SAMP8腸道菌群的紊亂狀態(tài)。結(jié)論：六味地黃活性部位CA-30能夠改善快速老化型AD模型小鼠SAMP8學習記憶能力，同時可調(diào)節(jié)腸道菌群以及NIM網(wǎng)絡平衡，提示CA-30有可能成為防治AD的潛在藥物。

CA-30；阿爾茨海默??；SAMP8；學習記憶；神經(jīng)內(nèi)分泌免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡；腸道菌群

S1-26 山茱萸環(huán)烯醚萜苷對血管性癡呆大鼠模型學習記憶功能的影響

孟 敏

首都醫(yī)科大學宣武醫(yī)院，北京，100053，中國

目的：明確山茱萸環(huán)烯醚萜苷對雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎所致血管性癡呆大鼠模型的藥效學作用。方法：106只SD大鼠隨機分為7組（假手術組，模型組，CIG小劑量組，CIG中劑量組，CIG大劑量組，尼莫地平組，血塞通組），行雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎手術（假手術組只游離，不結(jié)扎），以尼莫地平和血塞通作為陽性對照藥，術后6 h開始，按1 mL·100 g-1體重給予灌胃給藥，每日一次（假手術組和模型組給予等體積蒸餾水）。給藥30日及90日進行Morris水迷宮、物體識別實驗和避暗實驗，觀察山茱萸環(huán)烯醚萜苷對血管性癡呆大鼠模型學習記憶功能的影響。采用免疫組織化學方法，檢測大鼠腦內(nèi)神經(jīng)元存活情況和乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶（choline acetyl transferase，ChAT）表達。結(jié)果：給藥30日后，模型組與假手術組比較，物體識別指數(shù)明顯下降，差異具有顯著性（P＜0.05），給藥后物體識別指數(shù)上升，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。給藥90日后，模型組與假手術組比較，物體識別指數(shù)明顯下降，差異具有顯著性差異（P＜0.05），給藥后物體識別指數(shù)上升，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；模型組與假手術組相比，Morris水迷宮逃避潛伏期明顯加長，差異具有統(tǒng)計學意義，給予山茱萸環(huán)烯醚萜苷給藥后，逃避潛伏期明顯縮短，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。免疫組化的結(jié)果顯示，模型組大鼠皮層和海馬的NeuN神經(jīng)元減少，ChAT表達量減少，給予CIG灌胃給藥后，神經(jīng)元存活數(shù)量明顯增加，ChAT表達量顯著增高。結(jié)論：山茱萸環(huán)烯醚萜苷能夠通過保護神經(jīng)元和促進ChAT表達，改善血管性癡呆大鼠模型的學習記憶能力。

S1-27 藥物組合吲哚美辛與阿托伐他汀對阿爾茨海默病的治療作用研究

王健輝1，2程肖蕊1，2張小銳1，2劉 港1，2周文霞1，2張永祥1，2

1. 軍事科學院軍事醫(yī)學研究院毒物藥物研究所，北京，100850，中國

2. 抗毒藥物與毒理學國家重點實驗室，北京，100850，中國

目的：觀察吲哚美辛與阿托伐他汀組合對阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）的治療作用。方法：在口服給予APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠藥物組合吲哚美辛與阿托伐他汀90 d后進行Morris水迷宮和穿梭箱實驗，并應用免疫熒光染色技術，觀察小鼠腦中的A β沉積；應用AlphaLISA技術檢測小鼠中樞以及外周血中的A β含量；應用液相蛋白芯片技術和流式細胞術，檢測小鼠外周血中細胞因子和脾細胞上清液中淋巴細胞亞型；應用放射免疫和化學發(fā)光技術，檢測小鼠下丘腦-垂體-腎上腺軸（hypothalamic-pituitary-adrenal，HPA）和下丘腦-垂體-性腺軸（hypothalamicpituitary-gonadal，HPG）中的相關激素水平。結(jié)果：藥物組合吲哚美辛與阿托伐他汀能夠顯著改善APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠的空間學習記憶能力和主動回避反應能力，降低海馬中的A β沉積以及A β1-42水平，顯著抑制外周血中促炎因子 IL-1 β、IL-23、GM-CSF、TNF-α、NF-β和 eotaxin 的分泌，并促進抑炎因子IL-4和G-CSF的分泌。同時，藥物組合吲哚美辛與阿托伐他汀能夠增加CD4+，CD28+T細胞的數(shù)量，降低CD4+，CD25+，F(xiàn)oxp3+T細胞的數(shù)量，顯著降低HPA軸中ACTH、HPG軸中GnRH和LH的水平。結(jié)論：藥物組合吲哚美辛與阿托伐他汀合用能夠改善APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠紊亂的免疫系統(tǒng)，調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的失衡，進而改善APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠的學習記憶能力和病理損傷，提示吲哚美辛與阿托伐他汀的組合有可能成為防治AD的潛在藥物。

吲哚美辛；阿托伐他汀；阿爾茨海默??；APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠；學習記憶；A β；細胞因子；淋巴細胞亞型；神經(jīng)內(nèi)分泌

S1-28 快速老化模型小鼠海馬囊泡谷氨酸轉(zhuǎn)運體表達與興奮性毒性關系的研究

王 靜1，2程肖蕊1，2周文霞1，2張永祥1，2

1. 軍事科學院軍事醫(yī)學研究院毒物藥物研究所，北京，100850，中國

2. 抗毒藥物與藥理學國家重點實驗室，北京，100850，中國

目的：已有研究表明，阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）的發(fā)病機制與谷氨酸興奮性毒性有關，囊泡谷氨酸轉(zhuǎn)運體（vesicular glutamate transporters，VGLUTs）位于谷氨酸能突觸前神經(jīng)元的囊泡膜上，特異地將細胞質(zhì)中的谷氨酸轉(zhuǎn)運進突觸囊泡，其在囊泡膜上的數(shù)量以及囊泡外胞質(zhì)中的谷氨酸濃度，決定了其轉(zhuǎn)運谷氨酸進入囊泡的速度和囊泡的填充程度。然而，在AD病人大腦皮層中VGLUT1與VGLUT2顯著減少，但是卻存在嚴重的谷氨酸（glutamic acid，Glu）興奮性毒性這一矛盾現(xiàn)象。本研究的目的是采用AD動物模型探討VGLUTs減少但卻存在谷氨酸興奮性毒性的可能原因。方法：采用微透析技術，采集快速老化模型小鼠SAMP8及其對照SAMR1海馬部位組織間液，通過 HPLC電化學方法檢測氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的含量。采用Western Blot方法，檢測海馬中VGLUT1和VGLUT2的表達，并檢測降解VGLUTs的酶calpain、caspase3的表達及Glu作用的突觸后受體NMDA、AMPA的表達情況，同時檢測高親和力谷氨酸轉(zhuǎn)運體EAAT1/2、谷氨酰胺酶、谷氨酰胺合酶，以及谷氨酰胺轉(zhuǎn)運相關的SN1、SAT1的表達。結(jié)果：與SAMR1相比，SAMP8小鼠海馬部位VGLUT1/2表達降低，海馬組織間液Glu升高。一方面，位于星形膠質(zhì)細胞上的Glu轉(zhuǎn)運體EAAT1和 EAAT2表達降低，另一方面，突觸后膜上NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B、NMDAR2C、NMDAR2D的表達降低，AMPA2表達升高，提示可能是由于這兩個方面的因素導致了突觸間隙Glu濃度過高，造成了興奮性毒性。在SAMP8小鼠海馬部位，谷氨酰胺合酶和谷氨酰胺酶降低，轉(zhuǎn)運谷氨酰胺的轉(zhuǎn)運體SN1降低、SAT1升高，提示這可能會導致胞質(zhì)中Glu減少，從而反饋調(diào)節(jié)VGLUTs的表達降低，同時，降解VGLUT1/2的酶caspase3表達增加，兩者最終導致了SAMP8小鼠海馬中VGLUTs減少。結(jié)論：AD動物模型SAMP8海馬中VGLUTs減少而Glu增多，其可能原因是降解VGLUT1/2的酶增多和胞質(zhì)中Glu減少，同時突觸后Glu受體和EAAT1/2表達降低。

阿爾茨海默病；囊泡谷氨酸轉(zhuǎn)運體；谷氨酸；突觸后受體

S1-29 疾病特異性誘導性多功能干細胞AD模型建立

張 林1，2，3蔣 寧1，2周文霞1，2張永祥1，2

1. 軍事科學院軍事醫(yī)學研究院毒物藥物研究所，北京，100850，中國

2. 抗毒藥物與毒理學國家重點實驗室，北京， 100850，中國

3. 沈陽藥科大學，沈陽，110015，中國

目的：將阿爾茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）患者和認知正常人的血細胞重編程為誘導性多功能干細胞（induced pluripotent stem cells，iPSCs），進一步誘導為神經(jīng)干細胞和神經(jīng)元，觀察不同來源iPSCs向神經(jīng)干細胞和神經(jīng)元分化能力的差別及細胞凋亡情況。方法：將散發(fā)性AD患者和認知正常人來源的外周血細胞重編程為iPSCs，進一步誘導為神經(jīng)干細胞和神經(jīng)元，應用IncuCyte ZOOM動態(tài)細胞觀察系統(tǒng)記錄分化過程中細胞生長曲線，應用免疫細胞熒光實驗對誘導得到的神經(jīng)干細胞和神經(jīng)元進行鑒定，采用TUNEL原位末端標記法檢測誘導得到神經(jīng)干細胞和神經(jīng)元的細胞凋亡情況。結(jié)果：經(jīng)過7 d誘導，iPSCs可分化為神經(jīng)干細胞，AD患者和認知正常人來源神經(jīng)干細胞均可表達神經(jīng)干細胞標記物Nestin，Sox1，Sox2和Ki67。AD患者來源的神經(jīng)干細胞的生長曲線低于認知正常人。增殖標記物Ki67染色結(jié)果顯示，AD患者和認知正常人來源神經(jīng)干細胞中Ki67陽性細胞比例沒有顯著差異，TUNEL檢測結(jié)果顯示AD患者來源神經(jīng)干細胞中TUNEL陽性細胞顯著多于認知正常人（P＜0.001），提示導致AD患者來源的神經(jīng)干細胞的生長曲線低于認知正常人的原因可能與AD患者來源的神經(jīng)干細胞凋亡增多相關。神經(jīng)干細胞向神經(jīng)元誘導分化第1天時，AD患者來源神經(jīng)干細胞誘導培養(yǎng)板中MAP2陽性細胞比例為11.7%，顯著高于認知正常人培養(yǎng)板中MAP2陽性細胞比例2.9%（P＜0.01）；誘導至第16天時，AD患者來源神經(jīng)干細胞誘導培養(yǎng)板中MAP2陽性細胞比例為83.8%，顯著高于認知正常人培養(yǎng)板中MAP2陽性細胞比例51.3%（P＜0.001）；TUNEL檢測結(jié)果顯示分化至第16天時，AD患者來源神經(jīng)元中TUNEL陽性細胞顯著多于認知正常人（P＜0.001）。結(jié)論：AD患者來源神經(jīng)干細胞向神經(jīng)元分化時分化速度大于認知正常人iPSCs誘導的神經(jīng)干細胞，且分化的神經(jīng)元凋亡多于認知正常人。由AD患者iPSCs誘導得到的神經(jīng)干細胞和神經(jīng)元凋亡增多，與AD患者大腦中神經(jīng)細胞丟失的病理特征相似，提示其可以作為一種研究AD發(fā)病機制及藥物篩選的模型。

阿爾茨海默病；誘導性多功能干細胞；神經(jīng)干細胞；神經(jīng)元；細胞凋亡

S1-30 SOD模擬物AEOL-10150延長SAMR1小鼠平均壽命并抑制衰老相關分泌表型

張小銳1，2程肖蕊1，2王健輝2曾 菊2馬丁丁2張宏超2周文霞1，2張永祥1，2

1. 軍事科學院軍事醫(yī)學研究院毒物藥物研究所，北京，100850，中國

2. 抗毒藥物與毒理學國家重點實驗室，北京，100850，中國

目的：觀察SOD模擬劑AEOL-10150在抗快速老化小鼠（SAMR1）上的抗衰老作用及其作用機制。方法：18月齡SAMR1小鼠，雌雄各半，每周皮下注射AEOL-10150（2 mg·kg-1）1次，連續(xù)給藥直到動物死亡。采用Morris水迷宮，新物體識別，筑巢實驗和強迫游泳實驗觀察動物的行為變化。通過免疫熒光觀察腦組織中DCX+神經(jīng)元的數(shù)量。流式細胞術檢測造血干細胞、淋巴細胞亞群和ROS水平。細胞因子水平用Luminex法測定。結(jié)果：AEOL-10150能延長SAMR1小鼠的平均壽命，但對最大壽命沒有明顯影響。此外，AEOL-10150能顯著提高老年小鼠空間學習記憶能力，但不能增加下丘腦MBH區(qū)和海馬DG區(qū)DCX+神經(jīng)元的數(shù)量。我們進一步觀察了AEOL-10150對外周血造血干細胞和淋巴細胞亞群和細胞因子的影響。結(jié)果顯示，AEOL-10150能顯著延緩造血干細胞的消耗，調(diào)節(jié)淋巴細胞亞群和細胞因子的釋放。其中，AEOL-10150能夠劑量依賴性地抑制血漿中衰老相關分泌表型（senescence-associated secretory phenotype，SASP）相關炎性細胞因子TNF-α和IL-17的水平。結(jié)論：AEOL-10150具有抗衰老作用，其抗衰老作用可能與調(diào)節(jié)免疫力及抑制SASP產(chǎn)生密切相關。

衰老；SOD模擬物；平均壽命；衰老相關分泌表型

S1-31 新型小分子化合物OAB-14改善AD模型動物認知障礙作用及機制研究

鄒莉波 袁春玲 郭曉麗 周曉昱 陳國良

沈陽藥科大學，生命科學與生物制藥學院，沈陽，110016，中國

目的：阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）發(fā)病機制復雜，相關假說眾多。盡管存在爭議，A β毒性假說仍是最為公認的主要致病機制之一。據(jù)報道，抗腫瘤藥貝沙羅汀能夠快速清除AD模型小鼠腦內(nèi)A β并改善學習記憶障礙，但其不良反應嚴重。我們參考貝沙羅汀合成了一系列化合物，并從中篩選出一個新型小分子化合物OAB-14。本研究旨在考察OAB-14對AD模型小鼠學習記憶障礙的改善作用及對神經(jīng)元和突觸可塑性的影響，并從A β生成、清除兩個方面考察OAB-14對A β的作用。方法：采用8月齡APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠，灌胃給予OAB-14（50、100和200 mg·kg-1）、貝沙羅?。?00 mg·kg-1）或溶劑，連續(xù)給藥15天。給藥第6天開始依次進行新物體辨別、Y迷宮、Morris水迷宮實驗。采用Western Blot方法考察OAB-14對A β生成相關蛋白、A β降解酶、突觸相關蛋白、M1/M2型小膠質(zhì)細胞標志物、神經(jīng)炎癥因子、ApoE通路相關蛋白及ApoE亞型的影響；采用非變性凝膠電泳考察酯化ApoE的水平；采用免疫組化和Thio-S檢測A β沉積；ELISA法測定可溶和不溶性A β1-40、A β1-42含量；采用免疫熒光對小膠質(zhì)細胞和A β進行共定位；透射電鏡檢測海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細胞核、線粒體、突觸超微結(jié)構。結(jié)果：模型組小鼠在新物體辨別、Y迷宮、Morris水迷宮實驗中表現(xiàn)出顯著的形象辨別記憶、工作記憶和空間學習記憶障礙；社會交往實驗中主動接觸時間縮短，社會交往能力下降；筑巢實驗中生活自理能力也顯著下降。與模型組相比，OAB-14能劑量依賴性地改善APP/PS1小鼠形象辨別記憶、工作記憶、空間學習記憶障礙，提高小鼠社會交往能力及生活自理能力。OAB-14 200 mg·kg-1連續(xù)給藥15 d，對A β生成相關蛋白APP、ADAM10、BACE-1、PS1的表達沒有顯著影響，提示OAB-14可能不影響A β的生成。OAB-14顯著增加A β降解酶NEP、IDE的表達；增加ApoE、ABCA1、ABCG1的表達，提高酯化ApoE水平，增加小膠質(zhì)細胞吞噬A β。提示OAB-14可能通過活化ApoE通路，并提高A β降解酶的表達，增加腦內(nèi)可溶性A β的清除。OAB-14還能顯著提高小膠質(zhì)細胞表面受體CD36的表達，從而促進對纖維化A β的清除。OAB-14促進小膠質(zhì)細胞由促炎的M1型向抗炎、吞噬的M2型轉(zhuǎn)換，在增加其對A β清除的同時，減少炎癥因子的表達。透射電鏡結(jié)果顯示，OAB-14能促進APP/PS1小鼠海馬神經(jīng)元細胞損傷的修復，改善突觸超微結(jié)構，增加NeuN標記的神經(jīng)元細胞數(shù)及NeuN蛋白表達。OAB-14可顯著增加ApoE3的表達，降低ApoE4的表達，增加H3的乙?；剑罨疊DNF通路，提高突觸相關蛋白SYP、GAP43、PSD95的表達。結(jié)論：OAB-14能顯著改善APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠的學習記憶障礙，減少腦內(nèi)A β沉積，其機制可能與增加A β降解酶表達，活化ApoE通路，提高小膠質(zhì)細胞對A β的清除有關。同時，OAB-14能減少海馬神經(jīng)元丟失及提高突觸可塑性，這可能與減少A β對神經(jīng)元的毒性以及活化BDNF/TrkB/raf/ERK信號通路有關。本課題的研究為將OAB-14開發(fā)為抗AD新藥提供了藥效學依據(jù)。

S1-32 基于 非標記液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜組學方法的阿爾茨海默病血清生物標志物的研究

許婷婷1郭 鵬2張 巍2王曉良1

1. 中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院，藥物研究所，北京，100050，中國

2. 首都醫(yī)科大學附屬北京天壇醫(yī)院，北京，100050，中國

目的：通過非標記液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）組學的方法尋找在AD患者和年齡相匹配的健康對照者（healthy control，HC）血清中存在的差異蛋白，為AD的早期診斷與預測提供相關依據(jù)。方法：本研究共收集AD患者血清和HC血清各40個，然后每5個樣品等體積混合成一個樣品池即每組n=8，經(jīng)去除血清中兩種高峰度蛋白即白蛋白和IgG處理后，進行非標記液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜組學分析，鑒定到一些在AD疾病組和HC對照組中存在的差異蛋白，然后采用ELISA和Western Blotting（WB）方法進行擴大驗證組學結(jié)果中鑒定到的部分差異蛋白，目前研究階段共驗證了以下 6個差異蛋白，分別是 Apolipoprotein M（ApoM）、Kininogen-1（KNG1）、Apolipoprotein F（ApoF）、S100A8、Platelet factor 4（PF4）和 C4b-binding protein beta chain（C4BPB）；除了驗證上述組學中的部分差異蛋白外，我們還在同一批樣本中驗證了3個與AD發(fā)病有關的蛋白即Apolipoprotein E（ApoE）、Complement C3（C3）和 Complement factor H（CFH）。結(jié)果：在 AD 疾病組和HC對照組中組學分析結(jié)果共鑒定到61個差異蛋白，其中在AD疾病組中表達上調(diào)的蛋白共26個，表達下調(diào)的蛋白共35個；擴大驗證結(jié)果如下：①ELISA結(jié)果表明ApoM和KNG1在AD患者血清中的含量與HC相比都是顯著下降的，該結(jié)果與組學結(jié)果一致；②ELISA結(jié)果顯示ApoF和C4BPB在兩組中的含量不具有統(tǒng)計學差異；③S100A8的ELISA結(jié)果表明該蛋白在AD患者血清中的含量是顯著上升的，但ELISA結(jié)果與組學結(jié)果相矛盾，具體原因待查，PF4的ELISA和WB結(jié)果均證明該蛋白在AD患者血清中的含量是顯著降低的；④ELISA數(shù)據(jù)結(jié)果顯示ApoE在兩組中的含量不具有統(tǒng)計學差異，CFH在AD患者血清中表達顯著上調(diào)，而C3在AD患者血清中表達顯著下調(diào)。結(jié)論：本研究結(jié)果表明ApoM、KNG1、CFH、C3和PF4這5個蛋白有望成為AD候選的血液生物標志物，這些蛋白主要參與膽固醇轉(zhuǎn)運、補體和凝血反應、免疫應答以及炎癥等過程，可能參與AD的發(fā)病過程。但仍需要進行更大規(guī)模的臨床驗證。

S1-33 Cuprizone對少突膠質(zhì)細胞相關蛋白的影響

顧麗紅 李 林

首都醫(yī)科大學宣武醫(yī)院藥物研究室，北京市神經(jīng)藥物工程技術研究中心，神經(jīng)變性病教育部重點實驗室，北京，100053，中國

目的：研究雙環(huán)己酮草酰雙腙（cuprizone）對少突膠質(zhì)細胞（oligodendrocytes，OLs）相關蛋白的影響。方法：新生24 h Sprague-Dawley（SD）大鼠的大腦皮層膠質(zhì)細胞混合培養(yǎng)7天后，采用恒溫搖床振蕩分離與差異貼壁方法并結(jié)合條件培養(yǎng)基純化培養(yǎng)細胞，純化培養(yǎng)3 d后加入含有25 nmol·L-1cuprizone培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)3 d。光學顯微鏡觀察細胞形態(tài)；免疫熒光染色鑒定細胞類型。Western Blot檢測MBP、Fyn、Erk1/2等蛋白的含量。結(jié)果：獲得高純度成熟的少突膠質(zhì)細胞，熒光MBP染色陽性。相較于正常細胞組蛋白，Cuprizone組細胞MBP，Erk1/2及磷酸化Fyn（416位點）蛋白含量明顯降低。結(jié)論：Cuprizone對髓鞘形成細胞-少突膠質(zhì)細胞相關蛋白的表達成抑制作用。

少突膠質(zhì)細胞；細胞培養(yǎng)；雙環(huán)己酮草酰雙腙

Effect of Cuprizone on Oligodendrocyte-associated Proteins