陳 偉 顏麗萍 王冬梅

(1.泰山醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，山東 泰安 271016； 2.泰山護(hù)理職業(yè)學(xué)院，山東 泰安 271000)

心血管系統(tǒng)疾病是人類健康的第一殺手。在各種心血管疾病，如冠心病、高血壓病以及心力衰竭的病理進(jìn)展過程中，機(jī)體過度應(yīng)激，交感神經(jīng)系統(tǒng)功能過度亢進(jìn)，導(dǎo)致體內(nèi)兒茶酚胺類物質(zhì)水平持續(xù)升高，心肌損傷加重，加速心功能惡化。異丙腎上腺素為β受體激動(dòng)劑，常用異丙腎上腺素誘導(dǎo)動(dòng)物心肌損傷模型[1-2]。唇形科植物丹參(SalviaMiltiorrhizaBge) 味苦，微寒，歸心、肝經(jīng)，是一種經(jīng)典的活血化瘀藥，常用于治療心、腦血管系統(tǒng)疾病[3]。白花丹參(SalviaMiltiorrhizaBge. F. alba. )是丹參的變種，為山東特有珍稀藥用植物，主要分布于泰山山脈及周邊地區(qū)，屬泰山道地藥材，但常被作為丹參應(yīng)用。有研究表明白花丹參根、莖、葉中成分及含量與丹參有差異[4-5]，具有抗氧化、抗癌等藥理效應(yīng)[6]。本實(shí)驗(yàn)通過注射異丙腎上腺素造成心肌缺血模型，模擬心血管系統(tǒng)疾病患者體內(nèi)過高的兒茶酚胺水平，研究白花丹參對(duì)心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及抗氧化的可能機(jī)制，為白花丹參的合理應(yīng)用提供基礎(chǔ)理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1儀器、藥品與試劑 高速臺(tái)式低溫離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf)；多功能酶標(biāo)儀(Tecan INFINITE200)；白花丹參購(gòu)自萊蕪苗山白花丹參種植基地；鹽酸異丙腎上腺素注射液購(gòu)于上海禾豐制藥有限公司；乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒、磷酸肌酸激酶(CK)試劑盒、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、丙二醛(MDA)試劑盒購(gòu)自于南京建成科技有限公司；其他試劑均為分析純。

1.2動(dòng)物 SPF級(jí)8周齡Wistar 大鼠，雌雄各半，體重200～250 g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)：SCXK(京)2012-0001。

1.3藥物提取 白花丹參，產(chǎn)自萊蕪苗山白花丹參種植基地, 由泰山醫(yī)學(xué)院中藥教研室鑒定。參照文獻(xiàn)將生藥白花丹參根剪切成碎塊, 加10倍體積雙蒸水浸泡2 h，煮沸后改文火煎1.5 h，收集煎液，藥渣再加10倍體積雙蒸水煎1 h，合并2次煎劑，100目濾網(wǎng)過濾后濃縮為每毫升含1 g生藥，-20 ℃保存?zhèn)溆肹7]。

1.4分組與給藥 所有大鼠自由飲食飼養(yǎng)7天，隨機(jī)分為正常對(duì)照組，模型組，白花丹參水提取物高、中、低劑量組(10，5，2.5 g/kg)，每組10只。除正常對(duì)照組外，其他組大鼠背部皮下注射異丙腎上腺素5 mg/kg，而正常對(duì)照組的大鼠注射同體積的生理鹽水，連續(xù)注射7天。同時(shí)灌胃給藥，白花丹參水提取物組每天給予相應(yīng)劑量的藥物，正常對(duì)照組、模型組灌胃給予相同體積的生理鹽水，連續(xù)14天。

1.5血清中心肌酶和氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)及方法 最后一次給藥2 h后麻醉大鼠，經(jīng)腹主動(dòng)脈取血，分離血清，-20 ℃保存。按照試劑盒說明書，使用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度，計(jì)算血清中SOD、LDH、CK、LDH的活力及MDA含量。

2 結(jié) 果

2.1大鼠血清中心肌酶活力變化 與正常組比較，模型組大鼠血清中LDH、CK、AST活力明顯增高(P<0.01)；與模型組比較，白花丹參水提取物高、中、低劑量組血清中的LDH、CK、AST活力均顯著降低(P<0.05)，并具有明顯的劑量依賴性(見表1)。

表1 白花丹參水提物對(duì)大鼠血清心肌酶活力的影響

注：與正常組相比，*P<0.01；與模型組相比，#P<0.05。

2.2大鼠血清中SOD、MDA含量變化 與正常組比較，模型組大鼠血清中SOD活性明顯降低(P<0.01)；與模型組比較，白花丹參水提取物高、中、低劑量組血清中的SOD活性顯著降低(P<0.01)，并具有明顯的劑量依賴性(見表2)。同時(shí)模型組MDA含量顯著增加，而白花丹參水提取物各劑量組血清MDA含量均明顯減少，且隨劑量增加MDA減少越明顯，呈現(xiàn)明顯的劑量依賴性。

表2 白花丹參水提物對(duì)大鼠血清SOD活性、MDA含量的影響

注：與正常組相比，*P<0.01；與模型組相比，#P<0.01。

3 討 論

正常細(xì)胞膜為脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)，缺血缺氧時(shí)機(jī)體產(chǎn)生大量氧自由基，損傷細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，生成大量脂質(zhì)過氧化物MDA，組織和血清中MDA含量可反映機(jī)體氧化應(yīng)激損傷的程度。同時(shí)機(jī)體具有功能強(qiáng)大的抗氧化防御系統(tǒng)，SOD在這個(gè)系統(tǒng)發(fā)揮重要的清除自由基的作用，可使超氧陰離子(O2-)轉(zhuǎn)換為過氧化氫(H2O2)，進(jìn)而在過氧化氫酶的作用下轉(zhuǎn)化為水，從而使有毒的氧自由基轉(zhuǎn)化為無(wú)害的水分子，阻斷氧化應(yīng)激損傷。研究認(rèn)為白花丹參有明顯的抗氧化應(yīng)激損傷的效應(yīng)[8-9]。異丙腎上腺素屬于強(qiáng)效β受體激動(dòng)劑，可興奮心臟，增加心臟負(fù)荷，減少心臟供血，模擬心血管系統(tǒng)疾病患者體內(nèi)過度興奮的交感神經(jīng)，造成心肌缺血模型，用于評(píng)價(jià)保護(hù)心肌缺血藥物的實(shí)驗(yàn)研究中[2]。本研究采用異丙腎上腺素連續(xù)皮下注射建立大鼠心肌缺血損傷模型，研究結(jié)果顯示模型組大鼠血清中MDA 含量顯增加，同時(shí)SOD活性明顯下降，而給予白花丹參治療的大鼠血清中MDA 含量顯著減少，SOD活性明顯升高，表現(xiàn)出良好的抗氧化的藥理效應(yīng)。

心肌細(xì)胞內(nèi)有豐富的酶(同工酶)系, 如AST、LDH、CK等。氧自由基損傷生物膜，使膜在結(jié)構(gòu)與功能方面發(fā)生異常變化，釋放出大量的心肌細(xì)胞內(nèi)的可溶性酶，從而使血清中心肌酶水平顯著升高[10]。本研究中模型組大鼠血清中AST、LDH、CK的活力均明顯增高，白花丹參各劑量組大鼠血清中AST、LDH、CK的活力則明顯下降，具有明顯的劑量依賴性，具有明顯的保護(hù)心肌缺血的作用，其機(jī)制部分是通過其強(qiáng)大的抗氧化作用發(fā)揮。

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